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*2009－07－25**（1982-），，，。（auto-induction），80CoffeyTGF-α[1]。。Studier，。，，YuAPRIL[2]、Tustx2[3]。1，。4000，[4]。20，，。20[5]，。20，，。，（），。；，mRNA，。，。lac、trp、tac、λPL。pUCpBS，DNAlac。2T7T7。T7，；37℃13min，T7250T7***100044。。Q591·2ACN11-5340／N(2009)03-0010-06（）JOURNALOFBEIJINGINSTTTUTEOFEDUCATION（NATURALSCIENCEEDITION）4320099Vol.4No.3Sep.200910。T7E.coliRNA，E.coliRNAT7RNA；T71RNA[6]。T7RNA。T7：T7RNAT7，；T7mRNA；T7mRNA。T7，BL21（DE3），T7RNA，lacUV5，（lactoseoperon）（1）。T7，T7RNA[6,7]。（inducer），lacI（）lacO，lacT7RNA，，。（IPTG），，lacOT7RNA；T7RNAT7DNA。mRNA（rbs、Met），。T7，T7RNA，。，，。laclacOT7，T7lac[8]。NovagenpET，T7lac。，laclacO，，T7RNA，T7RNAT7。T7lac。lac，；，lacUV5T7，[9]。，T7lacT7。3T7IPTGT7。，。IPTG，。lacmRNA（backgroundlevelconstitutivesynthesis）[10]，T7lac，，。，IPTG，。、[11－12]。lacmRNA，。LB，（tryptone），。（casein），，1（Hartwell，2008）：T711（）；。。，。。（cataboliterepression）[10]，，lac（2）。。4，Studier。，，。lacYlacZ（lactosepermease）β-（β-galactosidase），T7；（gal）。Studier，、，，。15N13C，。，———MDG[11]（1）。，，。，———ZYM-0.8G（2）。，0.8%，。StudierMDAG[11]ZYM-0.8G，17，2。，MDAG。，———ZYM-5052[11]（3）。，。50525‰，0.5‰2‰。，，2。，，。1MDG（10ml）9.15mlH2O25mMNa2HPO420μl1MMgSO425mMKH2PO42μl1000×50mMNH4Cl125μl40%5mMNa2SO4500μl5%2mMMgSO4200μl50×M0.2×0.5%0.25%12。Studier，[11]；，lac，。，。，15N———N-5052[11]（4）。15N，15N。，，ZYM-5052。，NH4+。，13C———C-750501[11]（4）。：、。，13C。0.01%；，。，13C。，。：，50×M，，17.75gNa2HPO4、17.0gKH2PO4、13.4gNH4Cl、3.55gNa2SO4，100ml。pH6.7。，。。，40%（w/v）。，，30min。，。2ZYM-0.8G（10ml）9.58mlZY1%N-Z-amineAS20μl1MMgSO40.5%2μl1000×25mMNa2HPO4200μl40%25mMKH2PO4200μl50×M50mMNH4Cl5mMNa2SO42mMMgSO40.2×0.8%3ZYM-5052（10ml）9.58mlZY1%N-Z-amineAS20μl1MMgSO40.5%2μl1000×25mMNa2HPO4200μl50×505225mMKH2PO4200μl50×M50mMNH4Cl5mMNa2SO42mMMgSO40.2×0.05%0.5%0.2%α-：T713（），50×5052，100ml25g、2.5g、α-10g（），，40%。（2.5%，）。，1000×，100ml0.1MFeCl350ml、1MCaCl22ml、1MMnCl21ml、1MZnSO41ml、0.2MCoCl21ml、0.1MCuCl22ml、0.2MNiCl21ml、0.1MNa2MoO42ml、0.1MNa2SeO32ml、0.1MH3BO32ml，。，。FeCl3，；，。5，。ZY，StudierN-Z-amineAS（sigmaN4517），N-Z-amineAS。Mg2+；Kana，Kana，Kana100μg/ml。，：，0.2，、MgSO450×M，50×5052。，。，，。，Studierbaffledflask，（），，。，。，300rpm，，。Studier，37℃，37℃[8]，。，A600，。，：（1）（T7）BL21（DE3），1%LB（），37℃。（2），ZYM-0.8G（，Kana），37℃6-8h，。（3），ZYM-0.8G1∶1000ZYM-5052（4N-5052C-750501N-5052C-75050150mMNa2HPO450mMNa2HPO450mMKH2PO450mMKH2PO450mM15NH4Cl50mMNH4Cl5mMNa2SO45mMNa2SO42mMMgSO42mMMgSO40.2×0.2×0.5%0.75%13C-0.05%0.05%0.2%α-0.01%α-14，Kana），15。（4）37℃37℃，。（5），、。：，，；，IPTG；，；，NMR13C15N，（M9）。NMR，。：[1]R.Coffey,R.Derynck,J.Wilcox,T.Bringman,A.Goustin,H.Moses,M.Pittelkow.Productionandauto-inductionoftransforminggrowthfactor-alphainhumankeratinocytes[J].Nature,1987,328:817-820.[2]S.Yu,Y.Wang,Y.Liu,W.Mo,H.Song,M.Yu.ExpressionandpurificationofAPRILbyauto-induction[J].ProteinExprPurif,2009,Inpress.[3]W.Tu,K.Cai,X.Gao,L.Xiao,R.Chen,J.Shi,H.Liu,X.Hou,Q.Wang,H.Wang.ImprovedproductionofholotoxinStx2withbiologicalactivitiesbyusingasingle-promotervectorandanauto-inductionexpressionsystem[J].ProteinExprPurif,2009,Inpress.[4]T.A.Brown.GenecloningandDNAanalysis:anintroduction(5edition)[M].Oxford:Wiley-Blackwell,2006.[5]F.Baneyx.RecombinantproteinexpressioninEscheichiacoli.CurrentOpinioninBiotechnology.1999,10:411-421.[6]F.W.Studier,B.A.Moffatt,UseofbacteriophageT7RNApolymerasetodirectselectivehigh-levelexpressionofclonedgenes[J].J.Mol.Biol,1986,189:113-130.[7]F.W.Studier,A.H.Rosenberg,J.J.Dunn,J.W.Dubendorff,UseofT7RNApolymerasetodirectexpressionofclonedgenes[J].MethodsEnzymol,1990,185:60-89.[8]J.W.Dubendorff,F.W.Studier.ControllingbasalexpressioninaninducibleT7expressionsystembyblockingthetargetT7promoterwithlacrepressor[J].J.Mol.Biol,1991,219:45-59.[9]P.J.Lopez,J.Guillerez,R.Sousa,M.Dreyfus.OnthemechanismofinhibitionofphageT7RNApolymerasebylacrepressor[J].J.Mol.Biol,1998,276:861-875.[10]R.F.Weaver.Molecularbiology(4edition)[M].Boston:McGraw-HillCompanies,2008.[11]F.W.Studier.Proteinproductionbyauto-inductioninhigh-densityshakingcultures[J].ProteinExpressionandPurification,2005,41:207-234.[12]J.Meerman,G.Georgiou.ConstructionandcharacterizationofasetofE.colistrainsdeficentinallknownlociaffectingtheproteolyticstabilityofsecretedrecombinantproteins[J].Biotechnology,1994,12:1107-1110.T7ExpressionSystemandProteinProductionbyAuto-inductionStrategyFengShan(FacultyofEducationforTeachersofScienceandMath,BeijingInstituteofEducation,Beijing100044,China)Abstract:Averypopularmethodofensuringtightcontrol,aswellashigh-levelinducedexpression,istoplacethegenetobeexpressedinaplasmidundercontrolofaT7phagepromoter.However,there’ssurelysomedisadvantagesintheinducibleexpressionsystemswhichwerecurrentlyused.Studierandhiscoworkersinventedtheconceptofauto-induction,usingtheirauto-inducingmediainhigh-densityshakingculturesmightgetproteinsbetterbothinqualityandquantity.Keywords:auto-induction;expressionvectors;T7promoter;media：T715