临床检验方法学性能评估指南

方法学评价方法学评价†国家卫生行政管理部门和医学实验室认可，都对实验室方法性能评价提出了明确要求：†临床实验室引入新的或修订的检验方法，在常规应用前，应对检验方法的性能进行全面地评价或验证。引入新实验方法的流程图KristianLinnetandJamesC.Boyd定义†测量准确度（accuracyofmeasurement）就其计量学意义，指单次测量结果与被测量真值之间的一致程度，受随机误差和系统误差的影响。†正确度（trueness）：指大量测量结果的平均值与可接受参考值之间的接近程度。定义定义†溯源性Traceability：通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。[VIM：1993，定义6.10]定义†测量不确定度Uncertaintyofmeasurement†表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数。[VIM：1993，定义3.9]†ISO/PDTS25680.8《医学实验室测量不确定度的计算和表达》测量的目的测量的目的†获得被测对象的准确量值，所谓准确量值是指测量结果可以溯源到国际或国家的基准量值，以保证被测对象的量值在国际或国家范围内保持一致。†但这种“一致”是有条件的，即在某个不确定度范围内的一致。临床检验的特点临床检验的特点测量分类测量分类目的目的被测物性质被测物性质溯源性溯源性结果相关结果相关信息信息计量学测量获取准确量值物理、化学（长度、质量、时间、温度、电阻）可部分不确定度临床检验为区分健康状况提供信息生物体参考区间方法学性能要点方法学性能要点†校准Calibration„校准物和校准方式„校准间隔„校准验证†分析特异性和干扰AnalyticalSpecificityandInterference精密度精密度PrecisionPrecision†重复性Repeatability：批内CV（OCV）†中间精密度：总CV（RCV）„实验室内„条件改变：时间、校准、操作者、仪器†重现性Reproducibility：„实验室间„条件改变：操作者、设备（EP5－A2）方法学性能要点方法学性能要点†线性范围LinearityRange„被测量与方法输出成线性关系†测量范围MeasurementRange„符合方法学性能†可报告范围ReportableRange„临床有用性测量区间（测量区间（MeasuringInterval）†也称：（分析）测量范围。†测量程序可给出测量结果（数值）、由测量低限和测量高限构成的闭区间；†在此区间内，测量总误差满足方法规定的性能指标。极限参数（分析灵敏度）†空白限（LoB）：空白样本的昀高观测值†检测限（LoD）：可检出的被测物昀低量†定量限（LoQ）：可靠检测的昀低量†测量范围下限（LMR）†线性范围下限（LLR）（EP17－A）检测方法的极限参数检测方法的极限参数0被测量LoDLoQ极限参数的关系极限参数的关系LoBLoB＜LoD≤LoQ实验室分析目标的确立实验室分析目标的确立†允许总误差：„精密度：RCV„准确度：偏倚„样本误差：只考虑分析误差时，被忽略。†管理要求不精密度不精密度†分析标准差：†总标准差：†分析不精密度在测量过程中引入的随机误差是非常有限的.22AWithinBTσσσ+=WithinBAσσ⋅=21偏倚（Bias）：†允许偏倚与参考区间的宽度相关联；由个体间、个体内生物变异及分析变异决定；†建议：2241BetweenBWithingBBiasσσ+⋅≤管理要求管理要求†管理部门或学会提出的目标；†目标使用浓度：医学决定水平、危急值、参考区间、治疗范围，等†建议：以1/4PT要求作为允许总误差，以兼顾方法学稳定性和质量成本。临床实验室分析目标（临床化学）临床实验室分析目标（临床化学）检验项目室间质量评价标准室内不精密度CV%钾靶值±0.4mmol/L3.6钠靶值±4mmol/L1.9氯靶值±5%1.8钙靶值±0.25mmol/L2.9磷靶值±10.7%6.4血糖靶值±10%4.3尿素靶值±9%5.3肌酐靶值±15%3.5尿酸靶值±17%4.3胆固醇靶值±9%4.5甘油三酯靶值±18.8%8.1丙氨酸氨基转移酶靶值±18%7.3天门冬氨酸氨基转移酶靶值±20%6.0乳酸脱氢酶靶值±20%4.3北京市部分临床检验项目不精密度建议肌酸激酶靶值±21%6.6碱性磷酸酶靶值±27%4.8γ‐谷氨酰基转移酶靶值±20%6.4白细胞靶值±10%3.9红细胞靶值±4%2.4血红蛋白靶值±4.5%2.1红细胞压积靶值±5%2.1血小板靶值±14%6.8乙肝表面抗原3份样本定性均符合NA乙肝表面抗体3份样本定性均符合NA乙肝e抗原3份样本定性均符合NA乙肝e抗体3份样本定性均符合NA乙肝核心抗体3份样本定性均符合NA丙肝抗体3份样本定性均符合NA北京市部分临床检验项目不精密度建议依据:1.生物学变异;2.三甲医院检验科实际RCV(95%范围)质控图－钾3.53.63.73.83.94.4.14.24.30510152025日期设定：Mean=3.9SD=0.10(1/4PT)质控图－K3.783.813.843.873.93.933.963.994.020510152025日期设定：Mean=3.9SD=0.03计算：Mean=3.85SD=0.03血钾测定血钾测定CVCV要求要求†室间质评：±0.4mmol/l†室内不精密度：±3.6%„以上为北京市卫生局提出的要求†检验科RCV：1.0%质控图－K3.693.733.773.813.853.893.933.974.010510152025日期设定：Mean=3.85SD=0.04CV＜3.6%计算：Mean=3.85SD=0.03GLU测定mmol/l28仪器准确度评估偏倚RCVS.I.单位？公议值？均值？误差和不确定度误差和不确定度†误差：被测量的单个结果与真值之差；„是单个数值；„已知误差的数值可用于修正结果；†不确定度：„以一个区间表示；„不能修正测量结果方法学评价的内容与相关文件方法学评价的内容与相关文件†初步评价（CLSIEP10－A2）†精密度（CLSIEP5－A2）†对比及偏差（CLSIEP9－A2）†线性范围（CLSIEP6－A）†抗干扰能力（NCCLSEP7－A2）†基质效应（CLSIEP14－A2）方法学评价内容与相关文件方法学评价内容与相关文件†极限参数测定（CLSIEP17－A）†临床准确度（CLSIGP10－A2）†定性实验方法的评价（CLSIEP-12A）†参考区间（CLSIC28－A)†操作精密度和准确度的使用者证明（CLSIEP15－A）方法学研究方法学研究†评估（Evaluation）：实验室通过实验，测量新方法的分析性能；†确证（Validation）：方法满足预期用途的证明过程；†验证（Verification）：方法满足一定性能标准的检验过程；†证明（Demonstration）评价实验室能否遵循厂家指导书，并取得预期结果。验证操作精密度和准确度的证明操作精密度和准确度的证明(EP-15)†精密度„批内不精密度≤2/3总变异：n=4/s/d×5d„批内不精密度≥2/3总变异：n=3/s/d×3d†准确度„方法学比对„样本数：20临床准确性临床准确性†区分不同健康状况的能力；†阳性结果：真阳性和假阳性†阴性结果：真阴性和假阴性†临界值改变：影响灵敏度和特异性准确度及其评价†回收实验†干扰实验†方法学对比临床对临床对““准确性准确性””的要求的要求†实验室提供的检验结果或数据，应有助于临床医生进行疾病诊断、疗效评估和预后判断。†除了计量学准确性外，实验室还应对检验方法的临床准确性进行评价。回收实验回收实验†用于评估实验方法正确测定在常规样本中加入的被测物量的（质量、浓度、活性）能力；†通过测定比例系统误差，对实验方法的准确度进行评价。回收实验的基本要求回收实验的基本要求†使用常规样本基质，如血清或血浆；如果加入的被测物为液体，应控制体积在10%以内；†保证样本基质的一致性，原始样本中应加入不含被测物的相同溶液，作为基础样本；†对加入的物质能够实现准确定量，如称重、使用标准物质或标准液；†应选择有临床意义的浓度加入基础样本，一般加入的浓度应有3个或以上不同的浓度水平，并保证对实验样本昀终的测定结果在检测方法的线性范围内。回收率回收率（recovery）†计算方法（以加入的被测物为标准液为例）†回收浓度=样本昀终测定浓度-基础样本浓度标准液体积基础样本体积标准液体积标准液浓度加入浓度+×=%100%×=加入浓度回收浓度回收率）（回收率回收率†对加入不同浓度水平的样本在完成回收实验后，计算平均回收率。†理想状态时的回收率为100%，†误差大的方法其回收率低，准确度较差。参考（定值）物质：正确度验证参考（定值）物质：正确度验证†新鲜冰冻人血清：NIST、CAP†参考物质或实验室间比对材料：PT组织者提供；†试剂厂家提供的正确度验证或质控物质；†第三方提供的定值材料；EP－15A校准校准（calibration）†在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统所指示的量值（或实物量具或参考物质所代表的量值）与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作(JJF1001－1998)；†是一个测试和调整检验系统（包括仪器、试剂、方法学参数，等）的过程，从而建立该系统的计量学溯源性。设备校准设备校准†除非在专业的特定要求中注明可以不作校准外，†所有用于检验、校准、取样的设备，包括对检验结果准确性有影响的辅助设备（如实验环境测量设备和实验材料）都应进行校准。建立计量溯源性面临的问题建立计量溯源性面临的问题†人体样品中分析物定义不充分，在实现物质的量的单位（mole）时存在技术问题，即难以获得指定化合物的超纯物质；†校准物中分析物的非均一性（如异构体、衍生物），难以阐明其物理、化学性质（如酶、抗体、糖蛋白，等）；建立计量溯源性面临的问题建立计量溯源性面临的问题－2†人体样品中的分析物与校准品中的分析物间存在不均一性；†人体样品基质与校准品基质不同；†校准品中含有不适宜的“替代分析物”；†测量时，分析物发生变性，如物理或化学修饰。可溯源校准的确认可溯源校准的确认†参考测量程序和常规测量程序所测的量相同；†全部人源样本的常规方法测量结果与参考方法测量结果间的数学关系相同；†用常规方法和参考方法测量指定校准品的被测量时，其测量结果的数学关系与测量人样本时测量结果的数学关系一致（参考物质的互换性）；方法学比对方法学比对†比对方法„参考方法：评价结果溯源性„PT：评价结果准确性„分析系统：评价分析系统有效性干扰物质干扰物质†临床实验室测量过程中，干扰物质可以是测量误差的重要来源；†精密度：室内质控监测，†准确度：回收实验、与参考物质或参考方法比对；†干扰物：任可一个测量程序都可能存在干扰物质，引起的误差难以判定。测量过程中干扰物质的来源测量过程中干扰物质的来源1病理条件下产生的代谢物如：糖尿病、多发性骨髓瘤，等2由治疗过程引入的化合物如：药物、非肠道营养物、血浆扩充剂，抗凝剂，等。3病人本身原因引入的物质如：饮酒、滥用药物、补品、不同饮食习惯，等4标本处理过程中的添加物如：抗凝剂、添加剂、稳定剂，等。5操作过程对样本的污染如：护手霜、手套粉、血清分离器、采血管盖，等6样本本身的基质效应如：化学和物理性质不同于理想的新鲜样本。测量过程中的干扰因素测量过程中的干扰因素†不准确度（inaccuracy）又称分析总误差（totalanalyticalerror）主要受三个因素影响：不精密度、偏倚和样本误差。„实验室可以通过对测量程序的评估，对不精密度和偏倚进行分析，但通常把样本误差（干扰）看成是个别样本的问题，而不是测量程序的问题。干扰因素干扰因素†从评价的角度看，干扰既可造成系统误差，也可造成随机误差。†对于特定的病人群体，样本中干扰物的平均浓度可以造成系统偏差；†对个体病人，干扰物带来的误差取决于它在标本