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项目葡萄糖（GLU）方法己糖激酶终点法目录1.检测原理2.标本采集与处理2.1受检者的准备2.2静脉采血2.3抗凝剂2.4标本处理3.试剂3.1试剂3.2校准血清3.3试剂与校准血清的稳定性4.仪器5.操作6.计算7.操作性能7.1精密度7.2准确度7.3灵敏度7.4可报告范围7.5特异性7.6干扰8.参考值9.临床意义附录A:参数1.检测原理在己糖激酶的作用下，葡萄糖与ATP反应生成ADP和葡萄糖-6-磷酸。在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下，葡萄糖-6-磷酸与NAD+反应生成NADH和6-磷酸葡萄糖。NADH在340nm处有最大吸收，通过测定NADH的生成量与同样处理的葡萄糖标准比较，可计算出血清中葡萄糖的含量。HK葡萄糖+ATP---------ADP+D-葡萄糖-6-磷酸G6PDH葡萄糖-6-磷酸+NAD+---------------6-磷酸葡萄糖酸+NADH2．标本采集与处理2.1受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖，避免引起高血糖。常用药物中可致血糖增高的有以下几类。糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作用，因而血糖升高。如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗，应密切监测血糖，根据情况适当减少剂量或配合降糖药物应用。甲状腺制剂：甲状腺激素（甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白），可以促进葡萄糖的吸收，加速糖元分解及糖异生，使血糖增高。因而应用甲状腺制剂时应严密观察，特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂时应慎重给药。肾上腺素：肾上腺素可动员肝及肌肉的糖元分解，使血糖升高。一般来说，肾上腺素及拟肾上腺素制剂很少会长时间就用，所以对血糖的影响不大。利尿剂：噻唪类利尿剂长时间应用，可使病人的糖耐量降低而升高血糖，可能是抑制胰岛素分泌或使糖元分解的缘故。噻唪类利尿剂致高血糖大多出现在用药2-3个月后，停药能自行恢复。避孕药：包括雌激素与黄体酮样衍生物，这些药物均具有降低糖耐量和升高血糖的作用。因此患有糖尿病的育龄妇女，不能服用这些避孕药。异烟肼：异烟肼是抗结核病的一线药物，治疗结核病时用药期至少在半年以上。长期用异烟肼可影响糖代谢，使糖耐量降低，因此在用药期间应定期检查血糖并采取相应措施。当糖尿病合并肺结核时，异烟肼忌与磺脲类降糖药合用，否则可能产生不可逆糖尿病。其它：如烟酸及其衍生物、吩噻嗪类药物、生长素、促肾上腺皮质激素、双香豆素、去甲基麻黄碱等药物，均有增高血糖浓度的作用，使用时应注意监测血糖，避免引起高血糖或糖尿。2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3抗凝剂：血浆使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。2.4标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。3．试剂3.1试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司GLU试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下：组成R1:R2=5:1混合后浓度缓冲液100mmol/LPH=7.6己糖激酶（HK）100U/ml葡萄糖-6-磷酸脱氢酶300U/mlATP4.0mmol/LNAD+3.0mmol/L叠氮钠0.09%葡萄糖标准液5.55mmol/L(100mg/dl)3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。3.3试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。试剂颜色为无色至浅粉色，当试剂变色或者在546NM的吸光度高于0.15ABS，按照试剂失效处理。多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。试剂盒配备的水标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期，开瓶后2-8℃储存避免污染，可稳定2个月。4．仪器KONELAB30型号仪器。性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。5．操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为终点法。参数见后附，附录A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。6．计算A测定C=————×C0A标准式中：c——测定葡萄糖浓度，g/L；A测定——标本管吸光度；A标准——标准管吸光度；CO——校准血清葡萄糖浓度，g/L；7．操作性能7.1精密度：批内CV1.1%，批间CV2.8%。7.2准确度：检测结果的相对不准确度≤±10%。7.3灵敏度：葡萄糖浓度为：10mmol/L时，显色吸光度为0.558～0.660。7.4可报告范围：血清与试剂R1、R2用量之比为1:100:20时，测定上限为38.9mmol/L。7.5特异性：测量值在给定值的90%-110％范围内。7.6干扰：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸80mg/ml对测试结果无明显影响。8．参考值4.16-6.44mmol/L。临床意义血糖(英文名称:glucose)测定试剂盒用于定量测定血清中葡萄糖的含量。葡萄糖是存在于人体血液中最主要的碳水化合物，葡萄糖浓度的测定常用于内分泌功能的检查。血糖增高常见于甲状腺机能亢进、糖尿病等；血糖降低常见于胰岛素增多症、胰腺癌等。附录A:参数