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Bac-to-Bacexpressionsystem专业：生物化学与分子生物学姓名：蒋琢璞学号：200730200简介杆状病毒表达系统（BaculovirousExpressionVectorSystem,BEVS）与细菌，酵母，哺乳动物细胞一起被公认为当今世界的基因工程的四大表达系统。它作为一种新型的表达系统，因为其许多特有的优势特点，逐渐引起了人们越来越多的关注特点能对高效表达的蛋白质进行较完善的翻译后加工，如糖基化，磷酸化，酰基化，信号肽的切除等；与其他真和细胞表达系统相比能获得重组蛋白的高水平表达，最高甚至可达到细胞总蛋白的50%；对脊椎动物无感染性，并且也已经证明它们的启动子在大多数的哺乳动物细胞中也是没有活性的，因此这对于表达一些致癌基因和潜在的毒蛋白比其他的表达系统更有优势；能容纳大分子片段的插入和表达；能同时在一个细胞和载体上表达多个外源基因；能保证高表达的外源蛋白在细胞内进行正确的折叠，二硫键的搭配等。基本原理AcNPV为环状双链的DNA病毒，分子量在90～130kd，是目前应用最广泛的杆状病毒表达载体。其中的多角体蛋白(Polyhedrin)对于感染过程不是必需的，因此可以用一个外源基因来代替多角体蛋白基因，用这样一个重组的杆状病毒来感染昆虫细胞，从而实现目的蛋白的高效表达。为了在昆虫细胞中表达外源基因，重组病毒质粒的构建和纯化筛选，常常需要依赖基本的转染和斑点分析方法，这个过程通常会花费4～6周。然而，如果利用一个既能在大肠杆菌（Escherichiacoli）中进行复制的，又能感染敏感的鳞翅目昆虫细胞的病毒穿梭载体（bacmid）,那么就可以将周期降低到几天。小结杆状病毒由于安全性高，翻译后加工功能好等诸多优点，使它成为一种越来越有优势的表达系统。但是作为外源蛋白的大规模商业化生产还存在缺陷和局限性。如杆状病毒的浸染最终将会导致细胞的裂解以及虫体的死亡，而许多蛋白在细胞内的加工都是在侵染晚期进行的，所以这将使得一些蛋白得不到最好的修饰，从而影响到蛋白的表达。另外，昆虫细胞内的糖基化过程与哺乳动物细胞存在一定的差别，所表达出的某些蛋白与其真实的结构仍然存在着差异。还有无法进行连续性表达，且杆状病毒可能的其他宿主还不十分清楚，表达产物的纯化和多元表达等方面的技术还不够理想等。在杆状病毒系统的基础研究和应用技术方面．目前杆状病毒的基因组学，特别是功能基因组学的研究相对薄弱．有关病毒晚期基因的高表达和调控机制等仍未明了。这些不足，有望通过基因工程的方法得到解决。Thankyou!