盐酸普鲁卡因半数致死量-LD50的测定

药物半数致死量(LD50)的测定药理学实验毒性试验特殊毒性试验（致畸、致癌、致突变）长期（慢性）毒性试验急性毒性试验：1～7d半数致死量（lethaldose50%,LD50）：是指能够引起试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量的对数值表示。测定LD50意义(1)是衡量药物毒性大小的指标，评价药物优劣的重要参数(2)评价药物安全性---治疗指数TI=LD50/ED50(3)申报新药过程中必须提供的药理学资料盐酸普鲁卡因产生毒性作用的原理:盐酸普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产生全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭而死亡。LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、加权机率单位法(Bliss法)、寇氏法、序贯法等。Bliss法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分组无严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是目前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，故现多采用计算机程序计算。我国卫生部规定，Bliss法是作为新药LD50测定评定必须采用的方法。实验部分【实验目的】1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度。【实验材料】实验动物：小白鼠，体重18～２２g，♀♂各半，实验前禁食12h,不禁水。实验器材：计算机（BL-410机能实验系统）、电子秤、注射器、小鼠笼。实验药品：盐酸普鲁卡因（Procainehydrochloride）【实验步骤】预备实验1．探索剂量范围：根据经验或文献，通过实验找出100%死亡的最小剂量及0%死亡的最大剂量。此即上下限剂量（Dm，Dn）。2．确定组数、计算各组剂量：组数（n）：5组按公式求公比r:按公比求各组剂量：D1，D2，…,Dn，其中D1=Dn=最小剂量、D2=D1·r,…，Dn=Dn-1·r,Dm3．配制等比稀释溶液：要求各小鼠给药容积一样，一般0.1ml/10g，按下列公式计算浓度：1nnmDDr等容注射量DC母r=1.25等容注射量DC母药液配制的具体步骤：预试中Dm=344mg/kg，Dn=141mg/kg，算出r=1.25，小鼠的平均体重为20g，每组10只，用药量为0.1ml/10g=10ml/kgC1=344mg/kg/10ml/kg=34.4mg/ml每组药液量=每组动物总重×用药量=200g×0.1ml/10g=2ml1号2号3号4号5号1号液2号液3号液4号液5号液2ml2ml2ml2ml2ml【实验步骤】正式实验1．分组编号:取小鼠50只，随机分成5组，每组10只，♀♂各半。2．计算给药：由腹腔注射给药。3．观察记录：记录小鼠给药后反应，死亡时间，统计死亡数，列下表：结果记录表组别剂量（ml/10g）动物数（只）死亡数（只）死亡率（%）123450.120.110.100.0910.0821010101010小鼠的腹腔注射方法抓好后将小鼠保持头低位4.实验观察30min后进行数据统计5.计算LD50及其95%可信限采用Bliss法程序计算各参数步骤：启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项，再进入半数有效量选项。一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数据。单击“计算”按钮，计算LD50等参数。【注意事项】给药剂量准确小鼠腹腔注射脱臼处死实验用过小鼠【思考题】1.测定LD50有何药理意义？2.为何选择测定LD50作为衡量药物毒性大小的指标?