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新乡医学院医学检验系2011级临床输血学检验论文题目：ABO血型正反定型不符的相关讨论与意见参与人员：张博雅刘嘉年呼君晓郭果李静宋琼琳赵雅洁李波逯克鹏张家乐专业：医学检验系班级：2011级检验一班完成日期：2014/4/232目录前言————————————————第3页案例————————————————第4~5页分析与讨论————————————————第6~21页致谢————————————————第22页引用文献————————————————第23页3前言日常生活中血型检验十分普遍，但是由于其压型存在而导致时常出现ABO血型检验正反定型不符的情况，正反定型不符给临床血型鉴定带来极大困扰，影响输血的正常进行。因此，对于正反定型不符的患者进行更为深入的检验并确定其真正血型变得极有意义。应当通过增加亚型抗体的测定与吸收放散实验等来确定其真实血型。关键词：ABO血型亚型正反定型吸收放散实验唾液血型物质检测4一、案例献血者一名，女，某岁，某族，某地。某年某月来本站无偿献血，外采初检血型为AB型，检验科复检时发现ABO正反定型不符，正定型为AB型，反定型为B型，须进一步检测，定型。表1—A—B—A1—ABAcA2cBcOc自cIS2+w4+-4+±---2IS2+4+±---4℃10min2+s4+-4+2+1+1+1+w37℃3min表2人源—A人源—BIS-4+4℃10min1+表3Ps—A—A1A2cIS-4+-4℃10min-4+-37℃3min5表4PcAcBcOc-H(IS)--2+4℃10min1+1+3+6二、讨论与分析1、进一步检测所需的试剂与方法AB型人红细胞存在A、B两种抗原，B型血人很红细胞存在B抗原，由于正定型为AB型，反定型为B型，容易推测该患者红细胞上B抗原应不存在亚型抗原，而反定型由AB型变为B型，可推测患者血清中抗—A含量低或者不存在A抗体，结合正定型结果，考虑患者存在A抗原亚型。进一步检测可于正定型中加入抗—A1、抗—A2等血清，于反定型中加入A1细胞、A2细胞等。并进行吸收放散实验来比较效价以便判断是否存在抗原抗体结合反应。实验方法1.ABO正定型实验取两支试管，分别加入两滴抗-A、抗-B试剂，在各加一滴3-5％受检者红细胞悬液，混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。怀疑为亚型时，再加做抗-AB、抗-H试验。2．ABO反定型实验取四支试管，先各加入两滴受检者血清，再分别加入一滴A、B、O型试剂红细胞和受检者红细胞悬液，混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。3.吸收放散及唾液血型物质检测吸收放散：用生理盐水将3ml受检者压积红细胞洗涤三次，取洗后的压积红细胞2ml，加入对应的人源性抗血清，4℃下吸收1小时，7吸收后用4℃生理盐水洗涤5次，再放于56℃放散10min，数次振荡，3500r/min离心1min，取2滴放散液，加入对应的1滴A、B、O试剂红细胞，混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。唾液血型物质检测：受检者唾液离心去杂质后，煮沸10min，3500r/min离心5min，以2+凝集强度为标准将抗-A、抗-B标准血清和抗-H标化，取1滴上清液与标化后的1滴抗-A、抗-B标准血清和抗-H中和，然后加入1滴对应的A、B、O试剂红细胞，混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。结合上图与表—1，可怀疑该患者亚型为AxB型。8二、亚型的确定、冷反应自身抗体的分析与排除、人源抗体、A2c与H抗体选择的原因、表—2的分析。表2人源—A人源—BIS-4+4℃10min1+1、分析亚型根据血型血清学实验所表现的抗原性强弱程度的分级量化等血清学特征，可鉴别出各种ABO亚型。A抗原亚型较多，主要是A1（占80%）和A2亚型（占20%），其他的A亚型（A3，Am,Ax,Aint,Ael,Ay等）较少见或罕见。B抗原的亚型比A亚型少，较常见的有B1，B3，Bm,Bx,Bel等亚型。1、可以根据以下原则区分A亚型：①、红细胞与抗A及抗A1的凝集强度；②、红细胞上与抗A,B的凝集强度；③、红细胞上H抗原强弱；④、血清中是否存在抗A1；⑤、分泌型人唾液中A，B,及H物质的存在；2、A1与A2亚型区别：A1和A2是血型血清学方法确定的最重要的A型红细胞9○1有两种A型抗原，A1和A○2A1亚型的红细胞上具有A1和A抗原，其抗原血清中含有抗B抗体；A2亚型的红细胞上只有A抗原，其血清中除含B抗体外，还有少量抗A1抗体。根据表1所示：正定型时献血者的红细胞与抗体反应，抗A凝集强度与抗B凝集强度相比较弱，而与抗A1抗体无反应，而反定型时，献血者血清与已知红细胞反应时，当在IS，2IS条件下时，都为+—，而在4°C10min条件下时为2+，而与A2C在IS,2IS条件下时无反应，说明献血者血清中可能存在A亚型，且产生了A型抗体，且排除了A1亚型，因为献血者红细胞与抗A1抗体无反应。3、如何鉴别亚型？A1细胞与标准血清抗—A及抗A1均凝集，而A2只与抗—A发生凝集，与抗A1不发生凝集。A3亚型与抗—A和抗A,B均反应呈现混合凝集现象，且A3型大多数人血清中无抗A1，Aend型与A3类似，但Aend型个体唾液中只含有H抗原，不含H物质，而A3型红细胞表面A抗原较弱，分泌型人的唾液中含有A物质。Ax型：A抗原十分弱，仅仅只能通过抗A,B检测，通常血清中有抗A1。Am亚型：红细胞在常规试验中不与抗—A1抗—B和抗—AB反应，但其血清反定型时出现正反型不一致，只有抗—A，Ael只能通过吸收放散试验才能证明红细胞上有怀A抗体存在的个体。10因此如果怀疑有亚型存在只能怀疑为A2B亚型。2、冷抗体高效价的冷反应自身抗体可能遮盖同时存在的具有临床意义的同种异体抗体，干扰ABO血型鉴定与交叉配血。用自身红细胞在冷环境中可吸收掉这些自身抗体，使同时存在的异体抗体被检测出来。血液中含有冷自身抗体的患者，其红细胞通常已经包被了自身IgM和补体，这些自身抗体一般在37℃用PBS洗涤3遍可以除去。更有效的办法使用ZZAP试剂除去这些结合的免疫球蛋白和补体。冷抗体在20℃以下作用活跃，低温下可直接凝集红细胞，为一种完全抗体，绝大多数为IgM。正常人的血清中均含有少量的冷抗体,但效价很低,不影响血型定性和交叉配型,但高效价冷抗体会影响血型定性和交叉配型困难，但正常人血清中的少量抗体在低温条件下直接凝集红细胞。在表1，反定型时，4摄氏度条件下，献血者的血清可以与A,B,O和自身细胞都发生了弱凝集反应，而在室温条件下时，与B,O,和自身细胞都未发生凝集反应，可以怀疑在4摄氏度下，是正常人血清中的少量抗体与红细胞作用而引起的凝集反应。如果怀疑反定型B型是冷抗体引起的，则其反定型，室温条件下时，可与红细胞有凝集反应，而表中没有发生反应，可以排出冷抗体，若进一步验证，将献血者血清与A型红细胞在盐水介质反应，发生凝集，再放置37度水浴箱中30分钟后，凝集散开，最后确定为AB，若没散开在进一步验证。11或将自身红细胞和自身血清反应，在盐水介质中出现凝集则为冷抗体。反之则无。3、自身抗体自身抗体是对自身抗原产生的抗体，或者是外来抗原与机体内莫些成分结合后产生的抗体。有IgM（少）和IgG（多）类。当自身抗原产生的抗体，可发生自身免疫性疾病，会破坏自身红细胞而且有明显的贫血症状，而此女可以无偿献血可以排出自身免疫性疾病。自身抗体可以分为：自身冷抗体(IgM)和自身温抗体(IgG)。如果存在自身冷抗体（IgM），则其在室温时，在盐水介质中自身血清和自身红胞可发生凝集反应，而表1中未发生凝集反应，所以可以排出自身冷抗体，如若进一步测定可以利用吸收放散试验来测定有无自身冷抗体。自身温抗体（IgG）,在37摄氏度下反应活性最强，而且如果其与红细胞在盐水介质中发生凝集反应，不能形成肉眼看见的凝集，而表1中反定型，与A细胞反应出现了肉眼看见的凝集，所以可以排出自身温抗体，如若做进一步测定，可以利用聚凝胺试验，抗人球蛋白试验，吸收放散试验测定。4、选择人缘抗体的原因人缘抗体即多克隆抗体是人体内天然存在的或免疫反应检测到的抗体。ABO血型抗血清是天然抗体，于出生后2-8个月开始产生，8-10岁达高峰。长期以来一直是国内外血型检测机构及医院使用的12ABO定型试剂。其主要特点：方法简单、特异性强，凝血明显，但与抗原结合较弱，又利于判断抗原活性的强弱和抗原数量的多少。5、选择A2c抗体的原因A2c细胞抗原数量比A1c少，糖基转移酶的活性也比较第，而且A2c只有A抗原，其血清中除了抗B抗体外，还可以有少量抗A1抗体。而A1c就具有A1和A抗原，其血清中只有抗B抗体。因此，当反定型时A2c只可以与抗A抗体反应，而如果选用A1c时，不仅可以与抗A抗体，还可以抗A1抗体发生反应。所以使用A2c宜于鉴别，其红细胞的亚型。6、H抗体选择的原因H物质是A和B抗原的前体物质，H物质的形成是受H基因控制的。常见成人ABO血型各型红细胞上H抗原从强到弱排列顺序为：OA2BA2BA1A1B抗H抗体是一种较为罕见IgM型的冷抗体,在极少数A1和A1B亚型的人血清中偶见。在临床血型鉴定时常可引起正反定型不符,造成定型困难，所以要增加H抗体。A亚型最重要的血清学特征是红细胞抗原数目减少，红细胞与试剂血清表现为弱凝集或者不凝集，与抗原反应较强，莫些人血清中有-抗-A1。使用抗H抗体可以更好地测定亚型的存在，还可以判断红细胞上H抗原的强弱。13表2人源—A人源—BIS-4+4℃10min1+表2所示：其目的是判断抗原的强弱和其数目的多少。在室温时，自身红细胞与人源-A无凝集反应，而在4摄氏度10分钟条件下为1+，因为当A亚型存在时，红细胞的抗原数目减少，强度减弱红细胞与试剂血清表现为弱凝集或不凝集，但当在4摄氏度时，抗体活性最强，可以发生凝集。而献血者B型红细胞不存在亚型其抗原抗体反应都强。表3Ps—A—A1A2cIS-4+-4℃10min-4+-37℃3min表3：检测自身血清里可能存在抗A1抗体。A2c在室温和4摄氏度下都与抗A抗体发生凝集反应，而与自身血清和抗A1抗体都未发生凝集反应，这可以说明自身血清里可能存在抗A1抗体，而在37摄氏度下，A2c与自身血清和抗A1抗体都不发生发应，而与抗A抗体不发生凝集或弱凝集。14表4PcAcBcOc-H(IS)--2+4℃10min1+1+3+表4：可以判断自身红细胞表面存在H抗原。抗H抗体分别在室温和4摄氏度条件下与自身细胞，Ac，Bc，和Oc作用，而只有H抗原的红细胞才给抗H抗体发生凝集反应，并且在低温下，抗H抗体的活性增强。如图所示：在室温时，只有与O型红细胞与发生反应，而不与自身细胞，Ac，Bc反应，说明O型红细胞表面有的H抗原大于其余细胞。而在，4摄氏度10分钟件下时，抗H抗体，不仅与自身细胞发生凝集反应，还与Bc发生反应，而且与O细胞凝集强度加强，则与Ac不发生反应。说明自身红细胞表面存在H抗原。常见成人ABO血型各型红细胞上H抗原从强到弱排列顺序为：OA2BA2BA1A1B由以上可以推测，该患者血型可能为A2亚型15三、本病例使用新鲜细胞Bc和Oc的原因、表—3结果的分析以及血型的确定。表3Ps—A—A1A2cIS-4+-4℃10min-4+-37℃3min表4PcAcBcOc-H(IS)--2+4℃10min1+1+3+本病例不能用新鲜的BC和Oc，因为新鲜细胞上的H物质多，H抗原强，并且一般所有人红细胞表面都表达H抗原。H抗原是A抗原和B抗原的前体物质只有H抗原无抗原AB抗原的红细胞是O型红细胞。红细胞H抗原数量与ABO血型相关，O型红细胞H抗原数量最多，而A、B型红细胞上的H抗原绝大部分已被转化，H抗原较弱。常见成人ABO血型各型红细胞上H抗原从强到弱排列顺序为：OA2BA2BA1A1B。因为Bc和Oc新鲜时H物质较多，易误判亚型。使抗H抗体可以更好地测定亚型，判断红细胞H抗原强弱。由表1，通过正定型判断出存在A细胞的亚型，可能有少量抗16A1抗体，反定型排除了A1亚型，抗—A1与病人红