第九章-植物体细胞无性系变异与突变体的筛选

第九章植物体细胞无性系变异与突变体的筛选陈观水生命科学学院[e-mail]13905914445第九章植物体细胞无性系变异与突变体的筛选主要内容：第一节植物体细胞无性系变异第二节植物体细胞无性系突变体的筛选学习的目标与要求：了解体细胞无性系变异的意义、掌握体细胞无性系变异的诱导方法和筛选方法，了解体细胞无性系变异的遗传机理。一、植物体细胞无性系变异1.体细胞无性系变异的表现和普遍性植物细胞、组织、器官在无菌条件下进行离体人工培养，经过脱分化和再分化过程，重新形成愈伤组织和完整植株称为体细胞无性系（somaclones）。在培养阶段发生变异，进而导致再生植株亦发生遗传改变的现象(包括形态、生理生化、育性、抗性等方面)，称为体细胞无性系变异（somaclonalvariation）。一、植物体细胞无性系变异1.体细胞无性系变异的表现和普遍性培养材料在遗传上是相对稳定的；变异是普遍现象，不限于特定的物种、器官，所涉及的性状也相当广泛。研究表明，经组织培养产生的变异要比常规繁殖方法产生的植株表现更多的变异。体细胞无性系变异的变异率可以高达30~40%，有时甚至高达100%，某一具体性状的变异率在0.2~3%之间。体细胞无性系变异是一把双刃剑，在微繁殖及遗传转化方面要尽力避免产生体细胞无性系变异，但育种工作者则希望产生更多种类和更高频率的变异。一、植物体细胞无性系变异2.体细胞无性系变异的类型及遗传基础1)体细胞无性系变异的类型遗传变异(geneticvariation)：是获得新种质的有效途径。非遗传变异生理适应(physiologicadaptation)：由于某种外界条件存在而引起的性状变异，会随着外界因素的消失而消失后生遗传变异(epigeneticvariation)：遗传物质没有发生改变，只是基因的表达调控发生改变而引起的变异。一、植物体细胞无性系变异2.体细胞无性系变异的类型及遗传基础2)体细胞无性系变异的遗传基础染色体数目变异、结构变异、基因突变、DNA总量变异和DNA重复序列拷贝数的变异、基因丢失、DNA碱基修饰、转座子的激活、基因重排等一、植物体细胞无性系变异2.体细胞无性系变异的类型及遗传基础2)体细胞无性系变异的遗传基础大量研究表明，染色体变异是植物组织培养的一个基本特点。高浓度2,4－DAgNO36－BA高浓度6－BA蔗糖浓度培养初期增加染色体变异频率降低变异频率无明显影响对最初9代callus染色体变异无明显影响长期培养加大超倍体细胞频率9代之后，低浓度蔗糖时，亚倍体细胞频率明显减少一、植物体细胞无性系变异2.体细胞无性系变异的类型及遗传基础2)体细胞无性系变异的遗传基础DNA在核内重复复制－－同源多倍体培养天数不同DNA值细胞比例（％）2C2c~4c8c8cor8c088.311.7580.716.82.5134.879.56.69.1179.781.57.90.9硬粒小麦中胚轴培养中DNA值的变化一、植物体细胞无性系变异2.体细胞无性系变异的类型及遗传基础2)体细胞无性系变异的遗传基础染色体断裂与重组－－非整倍体、四倍体产生染色体结构变异的一般不能正常生长染色体畸变中出现的双着丝粒染色体在细胞分裂后期如不能被拉断，就会在两核之间形成染色体桥，出现四倍体。一、植物体细胞无性系变异3.人工诱发变异人工诱变物理诱变化学诱变X,α,β,γ射线及紫外线碱基类似物DNA分子结构插入物烷化剂DNA复制中，“以假乱真”，如5-溴尿嘧啶(BU)、2-氨基嘌呤等带有不稳定烷基，能改变DNA的化学结构。甲基磺酸乙酯二、植物体细胞无性系突变体的筛选1.突变体筛选的一般原则1)多种检测手段相结合，初筛与复筛相结合2)离体筛选与常规育种相结合二、植物体细胞无性系突变体的筛选2.体细胞无性系突变体筛选方法1)从再生植株中直接筛选有用突变株2)对离体培养物的筛选二、植物体细胞无性系突变体的筛选2.体细胞无性系突变体筛选方法突变体筛选方法直接选择法间接选择法绿岛法正选择法负选择法二、植物体细胞无性系突变体的筛选2.体细胞无性系突变体筛选方法直接选择法正选择法：用一种含有特定物质的选择培养基，在其上只有突变的细胞能够生长，非突变细胞不能生长，从而直接筛选出突变体的办法。小麦幼胚愈伤组织--1.4%NaClN6培养基＝＝小麦耐盐系。二、植物体细胞无性系突变体的筛选2.体细胞无性系突变体筛选方法直接选择法负选择法（富集选择法，又称浓缩法）：在特定培养基中，让正常细胞生长繁殖，突变体细胞受抑制不分裂呈休眠状态，然后用一种能毒害正常生长细胞，而对休眠细胞无害的药物淘汰正常细胞，再用正常培养基恢复突变体生长。该方法主要应用于营养缺陷型突变体筛选。二、植物体细胞无性系突变体的筛选2.体细胞无性系突变体筛选方法间接选择法间接选择法是一种借助于与突变表现型有关的性状作为选择指标的筛选方法。当缺乏直接选择表型指标或直接选择条件对细胞生长不利时，可考虑采用间接筛选法如脯氨酸（Pro）锦橙珠心悬浮细胞--γ射线--高浓度Pro＝＝细胞内Pro含量提高一倍＝＝耐寒愈伤及植株。抗病突变体的筛选也常常用间接筛选的策略。二、植物体细胞无性系突变体的筛选2.体细胞无性系突变体筛选方法绿岛法绿岛法是利用已分化组织进行筛选和鉴定的方法。对于抗病毒突变体、抗除草剂突变体的筛选，可以采用“绿岛法”。这种方法最早用于抗除草剂，叶片大面积枯黄，仅有少量抗除草剂突变细胞组织仍保持绿色，取这部分材料则成为很小的绿岛，因而形象地称之为“绿岛法”。单倍体烟草植株--γ-射线--除草剂--叶片部分变黄--取出绿色部分--愈伤组织==耐除草剂的单倍体植株==二倍体二、植物体细胞无性系突变体的筛选3.体细胞无性系突变体的筛选材料选择和预处理预培养（悬浮或平板）诱发突变（平板培养）高抗高产细胞株选择（平板培养）愈伤组织增殖或再生植株突变体鉴定二、植物体细胞无性系突变体的筛选4.体细胞无性系筛选的成功范例(略)二、植物体细胞无性系突变体的筛选5.植物细胞无性系突变体筛选的应用1)在农业上的应用创造育种中间材料或直接筛选新品种在全世界50多个国家中，已培育出1000多个由直接突变获得的或由这些突变体杂交而衍生的品种通过体细胞诱变选育的谷类作物品种中，品质得到不同程度改良的占34.3％。抗病，占诱变品种的1/4、耐盐、抗除草剂、耐寒、耐旱；二、植物体细胞无性系突变体的筛选5.植物细胞无性系突变体筛选的应用2)在植物细胞大规模培养生产次生代谢物的应用筛选高产突变株二、植物体细胞无性系突变体的筛选6.植物体细胞无性系突变体筛选的局限性1)筛选方式2)变异表达的特异性3)植株再生困难4)非目标变异的干扰思考题1．体外培养的变异有何特点？2．哪些因素会影响培养物的遗传变异？3．体细胞无性系变异的诱导和选择方法。4．体细胞无性系变异的应用途径。