土壤中霉菌的分离

土壤中霉菌的分离一．实验目的1.加深理解选择性培养基的原理应用。2.学习从自然界中分离霉菌的具体操作方法。二.实验原理从土壤中取样，采用马丁氏培养基对试样中的真菌进行富集，通过稀释涂布平板法，获取有单个孢子繁殖而形成的菌落，通过形态观察，辨别出霉菌，从而使霉菌得到分离。土壤是微生物的“天然”培养基，是丰富的菌种资源库。种类百分含量数目(个/克)细菌70%~90%2.5亿放线菌5%~30%70万霉菌3%~20%40万藻类1%~2%5万原生动物0.5%~1%3万真菌主要存在于土壤表面10cm处，在30cm处以下很难找到真菌，土壤中常见的真菌主要是：半知菌，如曲霉，地霉，青霉，木霉Martin培养基，是一种适合真菌生长并含有抑制细菌和放线菌生长的链霉素和孟加拉亿的培养基，能有效地选择土壤中少量存在的真菌，生长在马丁氏培养基的真菌，因大多数被孟加拉红有一定程度上的抑制，故形成的菌落较少，这正好避免了某些气生菌丝生长旺盛的霉菌迅速蔓延而造成的不利于霉菌的分离和计数的负面影响。三.实验器材与用品1.材料土壤样品，Martin培养基2.用品取样器，三角瓶。托盘天平。分析天平，烧杯，玻璃棒，平皿，试管，量筒，移液管，洗耳球，报纸，棉线，加压蒸汽灭菌锅，消毒棉，镊子，涂布器，脱脂棉，试管架，酒精灯，记号笔。四．实验步骤（一）.实验前的准备1.取样取样人时间地点取样深度实验用量（g)2.无菌水的制备90ml的无菌水（三角瓶，带玻璃珠），9ml试管灭菌水（试管）6支3培养皿的包扎：6个一组，12个4.Martin培养基的配制待链霉素加入前，需将培养基冷却到55℃~60℃，最终含量为30ug/ml5移液管包装：6支Martin培养基的配制组分用量备注1L240ml琼脂粉20g4.8g葡萄糖10g2.4g蛋白胨5g1.2gK2HPO41g0.24gMgSO4.7H2O0,.5g0.12g1/3000孟加拉红溶液100ml24ml自来水900ml216ml自然pH————加压蒸汽灭菌115℃30min链霉素0.03g0.0072g6.加压蒸汽灭菌操作者温度时间备注（二）．实验操作步骤稀释涂布平板法.1.倒平板，加入链霉素后，摇匀，趁热倒平板，凝固后，并做好标记，10-3,10-4,10-5,10-6,每梯度3个平板。2.制备土壤稀释液待90ml无菌水降至室温，称取土样10g，置入盛有90ml无菌水的三角瓶中，震荡，摇匀，使土样与水充分混匀，将微生物分散，稀释度为10-1。3梯度稀释用一支1ml无菌吸管从三角瓶中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入到另一个盛有9ml无菌水的试管中并混匀均匀，从此类推，制成10-2，10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释度的土壤溶液。4涂布稀释度为10-3,10-4,10-5,10-6的四管土壤稀释液，没梯度取0.1ml置入对应标记的平板中，涂布。5培养将涂布后的平板倒置培养在恒温培养箱中，28℃五．实验结果及处理1.计算土壤中真菌数.稀释度10-310-410-510-6菌落数123平均123平均123平均123平均每克样品总菌数每克样真菌数：nxs^10*101.0稀释度为10-n平均菌落数X2，通过菌落形态的观察辨别出霉菌，并在平板底做好标记六.参考书目[1]周德庆.微生物学教程.3版.北京:高等教育出版社,2013[2]熊元林,姚小飞.赵为.微生物实验.2版.华中师范大学出版社,2014[3]周德庆,徐德强.微生物实验教程.3版.北京:高等教育出版社,2013[4]李兴杰.微生物学.北京:高等教育出版社,2013[5]车振明.微生物学.北京:科学出版社,201112014108B3组廖继林26蓝伟铭28张海峰30郭俊来32李诏然34陈纪廷36