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1第七章细菌感染的诊断与防治原则Examinationandstrategyofpreventionandtherapyforbacterialinfection2细菌感染的实验室诊断主要包括：细菌学诊断----以检测致病菌及其抗原或代谢产物为目的血清学诊断----以检测患者血清中特异性抗体为目的基因诊断----以检测致病菌特异性DNA片段为目的3第一节细菌学诊断4一、标本的采集原则：无菌采集严格无菌操作，避免标本被污染。标本收集于无菌容器中，容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无菌容器，而不能用消毒剂处理。5早期采集采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，且必须在抗菌药物使用前，否则这份标本在分离培养时要加入药物拮抗剂。6取样部位不同疾病、不同时期取不同部位标本如流脑病人取CSF、血液或出血瘀斑；伤寒病人在病程1～2周内取血液，2～3周时取粪便。尽可能取病变明显部位的材料取局部病变标本，不可使用消毒剂，必要时以无菌生理盐水冲洗，拭干后取材。7粪标本：自然排便采集粪便标本时，取有脓血、粘液的粪便一小匙。液体粪便则取絮状物，一般取1～3ml，直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检。8痰标本：采集标本前应用清水、冷开水漱口有假牙者应取下假牙。首先轻咳，咳出咽喉部的分泌物，弃去，再用力咳嗽，咳出肺部的痰液直接吐入无菌的容器中。若怀疑结核感染找抗酸杆菌，应收集24小时的痰液于清洁玻璃容器内。若怀疑放线菌感染，应让病人留取含有颗粒的痰液，实验室查到硫磺颗粒且弱抗酸，可以考虑放线菌感染。采集双份血清采集急性期及恢复期血清恢复期血清效价比急性期效价升高4倍或以上具有诊断意义。910一般标本采集后最好在2h内送检，大多细菌可4℃冷藏运送、特殊（如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌）需保温立即送检。粪便标本中杂菌多，常置于甘油缓冲盐水保存液中。尽快送检、冷藏运送11注意安全烈性传染病或病因不明患者临床标本的采集时应做好防护工作。121、直接涂片染色镜检形态和染色性上有特征的致病菌，直接涂片镜检后有助于初步诊断。如：痰中查抗酸性杆菌，脓液中找G+葡萄串样球菌等。二、细菌学诊断方法13葡萄球菌霍乱弧菌14AB结核分枝杆菌A.结核分枝杆菌培养的镜下形态(抗酸染色)B.结核分枝杆菌痰标本直接涂片(抗酸染色)152、分离培养（isolationandcultivation）：所有标本原则上均应作分离培养获得纯培养后进一步鉴定，根据不同要求选用不同培养基。分离培养比直接涂片镜检阳性率高，但需时较久；大多细菌16～24h，结核杆菌需4～8w。分离培养是微生物学诊断的金标准。16分离培养isolationandcultivation分离培养是微生物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断技术。（图为普通孵箱）17厌氧箱厌氧袋18各种细菌所具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力亦不一致，因而其代谢产物有别，藉此可对不同致病菌进行鉴别（如肠道杆菌）。3、生化试验糖发酵试验194、血清学试验：含特异抗体的免疫血清＋未知纯种细菌进行血清学实验，可确定致病菌的种和型。常见有玻片凝集试验。玻片凝集试验205、动物试验：主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等。常用动物：小鼠、豚鼠、家兔接种途径：皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内等。216、药物敏感试验测定标本中致病菌对药物的敏感程度。对指导临床用药及控制感染有重要意义。常用纸碟法和试管稀释法。22第二节血清学诊断采用已知的细菌或其特异性抗原，检测患者血清或其他体液中有无相应特异性抗体及其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。23在血清学诊断中，最好采取患者急性期和恢复期双份血清标本。结果：以抗体效价明显高于正常人水平或患者恢复期抗体效价比急性期升高≥4倍方有意义。常用有凝集实验、沉淀实验、补体结合实验、中和试验、ELISA等。优点：快速、灵敏且不受抗生素等药物影响。24肥达试验玻片凝集实验25第三节分子生物学诊断PCR技术核酸杂交技术DNA芯片技术26细菌学诊断基本方法27第四节细菌感染的特异性防治28特异性免疫产生的方式人工免疫人工主动免疫疫苗、类毒素人工被动免疫抗毒素、丙球自然免疫自然被动免疫胎盘、初乳自然主动免疫患病、隐性感染人工免疫：采用人工方法将疫苗、类毒素等或含有某种特异性抗体、细胞免疫制剂等接种于人体，以增强宿主体的抗病能力。29一、人工主动免疫人为地将疫苗（vaccine）或类毒素接种于人体，使机体主动产生特异性免疫力的一种防治微生物感染的措施。30常用制剂疫苗----灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗、重组活载体疫苗、转基因植物疫苗和治疗性疫苗。类毒素311、灭活疫苗：选用免疫原性强的细菌经人工大量培养后，用理化方法杀死而成。如伤寒、百日咳、霍乱等灭活疫苗。优点：易于制备和保存。缺点：接种剂量大；维持时间短；接种次数多；注射的局部和全身性副反应较大；不产生细胞免疫应答。322、减毒活疫苗：用减毒或无毒力的活病原体制成；如BCG优点：只需接种一次、接种剂量较小、副反应轻微或无、免疫效果好且持久、能同时产生细胞免疫和体液免疫；以自然途径接种，有SIgA抗体的局部粘膜免疫形成。缺点：不易保存（冷藏且保存期短）、回复毒力的危险性33343.亚单位疫苗：用化学方法裂解和提取或通过基因工程产生的细菌保护性抗原组分制成的疫苗。如:脑膜炎球菌的荚膜多糖，乙肝疫苗等。354、核酸疫苗／DNA疫苗／基因疫苗将能编码诱发保护性免疫应答的病原体基因片段和能在真核细胞表达的质粒重组，直接注入宿主体内使其表达目的免疫原，进而诱导出保护性抗体和细胞免疫的新型疫苗，如乙肝疫苗。核酸疫苗的出现与发展是疫苗发展史上的第三次革命。36重组活载体疫苗转基因植物疫苗治疗性疫苗等37类毒素：外毒素经0.3～0.4%甲醛作用3～4周后，毒性消失仍保持免疫原性的制品。如白百破三联疫苗（DPT）是将白喉类毒素、百日咳死菌苗、破伤风类毒素混合而成。38二、人工被动免疫给机体注射含特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等制剂，使机体即刻获得特异性免疫力的过程，以治疗或紧急预防感染。391、抗毒素：一般用细菌类毒素或外毒素多次免疫马后采血，从血清中提取免疫球蛋白精制而成。抗毒素能中和相应的外毒素，阻断其毒性作用。例如用于白喉、破伤风等疾病。注射前需做皮肤试验。应早期、足量注射。常用制剂402、免疫球蛋白----丙种球蛋白、胎盘球蛋白（麻疹、甲肝、乙肝、脊髓灰质炎等）3、抗菌免疫血清41区别要点人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体或细胞因子免疫出现时间慢，2～4周快，立即免疫维持时间长，数月～数年短，2～3周主要用途预防治疗或紧急预防人工主动免疫和人工被动免疫的主要区别42本章主要内容小结细菌感染的微生物学诊断方法。人工主动免疫和人工被动的主要区别及常用的制剂。