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动物细胞工程动物细胞融合与单克隆抗体融合的原生质体AB再生细胞壁杂种细胞AB杂种植株脱分化愈伤组织再分化原生质体B原生质体A去壁人工诱导植物细胞A植物细胞B回顾植物体细胞杂交过程去壁动物细胞融合也称细胞杂交。是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。杂交细胞：融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。概念：动物细胞融合细胞膜的流动性原理：诱导融合方法：物理法:化学法:生物法：灭活的病毒离心、振动、电刺激聚乙二醇（PEG）•为什么灭活的病毒能作为诱导剂？•不灭活的病毒能作为诱导剂吗？灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）融合过程中两个细胞膜从彼此接触到破裂形成细胞桥的变化过程图解•为什么灭活的病毒能作为诱导剂？•不灭活的病毒能作为诱导剂吗？生物法：灭活的病毒丧失感染性（不感染细胞）保留融合活性仙台病毒紫外线动物细胞融合技术的意义打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；重要用途：制备单克隆抗体。动物细胞融合单克隆抗体1.抗体是由何种细胞产生的？２.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？３.简述获得抗体的传统途径？４.这种方法获得的抗体有什么缺陷？单克隆抗体传统血清抗体的制备：方法：向动物体内反复注射某种抗原，然后从动物血清中分离所需要的抗体。特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏传统血清抗体的制备的缺陷：单克隆抗体•AntibodiesAntigen单克隆抗体与多克隆抗体１、单克隆抗体McAb（概念）由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。那么，如何大量获得化学性质单一、特异性强的抗体？（即单克隆抗体）单克隆抗体的制备一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂种细胞动物细胞培养技术２、设计思路：动物细胞融合单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量繁殖单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备制备过程：1.注射抗原的目的是什么？2.诱导其融合的方法有哪些？3.融合后培养液中有几种细胞？4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点？5.为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选？6.大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法?单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备制备单克隆抗体的方法是用缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤细胞变异株与脾脏的B细胞融合。采用HAT选择性培养基（培养基中加次黄嘌呤HyPoxanthineH，氨基喋呤AminoopterinA及胸腺嘧啶核苷ThymidineT），在这种选择性培养基中，由于变异的瘤细胞不具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，所以不能利用培养基中的次黄嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA。而只能利用谷酰胺与尿核苷酸单磷酸合成DNA，这一途径又被氨基喋呤所阻断，所以未融合的瘤细胞不可避免也要死亡。融合的杂交瘤细胞由于脾淋巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶，可以通过次黄嘌呤合成DNA，克服氨基喋呤的阻断，因此杂交瘤细胞大量繁殖而被筛选出来。B淋巴细胞在一般培养基中不能长期生长，一般于二周内均死亡。有限稀释法：将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。单克隆抗体单克隆抗体的应用：①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合②用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗香港查男女