网织红细胞意义

网织细胞的临床意义主要内容1.相关基础知识.2.病例报道.3.当今常用仪器和参数.4.最新临床应用.网织物的来源和性质:实验证明网织物不是核残存部分,也不是固有的,它与胞浆内的碱性物质相关,进一步实验又证实碱性物质越多,网织物就越粗,碱性物质越少,网织物就越细.现已证实它们就是核糖体.电镜下的网织红细胞:经活体染色可见核糖体附于网丝上,线粒体由于中毒死亡而变大和退化.当网织细胞趋于成熟时,核糖体和细胞器逐渐消失,线粒体嵴消失,数目减少,Golgi复合器,中心粒,聚铁蛋白的残存物逐渐消失.网织红细胞的生成当有核红细胞在红细胞岛或途径血窦时都会失去细胞核。此时生成的网织红细胞很可能在血压的作用下从骨髓经血窦上皮进入血液。血循环中的网织红细胞的成熟大约24-48小时。20%的血红蛋白和细胞膜都是在这个时期完成。电镜下的网织红细胞是轻微运动的，折皱的不规则外形。在“年轻”网织红细胞中散在的RNA可形成多聚RNA。当蛋白合成结束时，又变成单体RNA。网织细胞的活体染色:ⅰ染色时间:2~8minⅱ比例:用2%的煌焦油兰染色以滴数计1:5时,网织细胞数开始减少,1:2为最佳.ⅲ涂片部位:中部为佳.ⅳ玻片干燥程度:立即干燥者最佳.•普通光学显微镜法:计数1000个RBC中的Ret,以百分数表示.Miller窥盘法由于目测计数误差较大,Brecler等证明用Miller窥盘法可减低标准误,特别是RBC较少时.EDTAK2抗凝血(4hr内)→染液(纯化天青B或新美兰)→1:1,15min→涂片.盘:厚1mm,直径19mm,圆玻片上划出格子:大方格内Ret/(小方格内RBCx9)X100%病例分析刘斐:男17岁.面色苍白,乏力12年,间断腹痛10年.93年头晕,乏力,苍白,不喜活动,Hb6g/dl,骨穿显示缺铁性贫血.95年出现进食水果冷食后脐周绞痛,振发加重,恶心,呕吐.04年腹痛发作频繁,每日一次,程度剧烈,伴针刺样痛.05.11来我院就诊.DC显示Rbc大小不等,形态不规则,中心淡染区扩大.铁三项:SI92mg/dl,TBIC444mg/dl↑,TS21%↓,SF2mg/ml↓长期医嘱:11.29.速力菲11.29.Vc11.29右旋糖酐铁.得到两份化验报告:11.2912.5RBC4.404.76HGB56.0075.00HCT24.3031.50MCV55.2066.10CH12.9015.60CHCM236.00237.00RDW19.9015.60HDW28.8029.80RET%1.607.90CHR17.4025.10说明:虽然大多数仪器都利用了流式细胞技术,但它们在应用的染料,检测技术方面还是有各自的特点.通常荧光的强度,光吸收量,和光散射量与网织细胞的RNA含量成正比.国际常用仪器仪器型号处理染色检测技术BayerADVIA120活体Oxazine750光吸收BayerH*3活体Oxazine750光吸收AbbottCellDynCD3200活体新亚甲蓝光散射AbbottCellDynCD3500活体新亚甲蓝光散射AbbottCellDynCD3700活体新亚甲蓝光散射AbbottCellDynCD4000荧光CD4K530荧光法BectonDickisonReticCountFACSCount荧光噻唑橙荧光法BeckmanCoulterSTKS活体新亚甲蓝VCSBeckmanCoulterGENS活体新亚甲蓝VCSSysmexXE2100荧光聚次甲基荧光染料光散射ABXPentra120Retic荧光噻唑橙光散射分析仪技术RET形状分群主要参数ADVIA120流式细胞技术球形化3类/IFRMCVr,CHr,CHCr,其他CoulterLH700VCS球形化IFRMSRVSysmexXE2100流式细胞技术原形3类/IFRRET-YADVIA120测定原理ADVIA120网织红细胞测定原理当一定体积分散的细胞经网织红细胞反应池后,产生低角度(2°-3°)和高角度(5°-15°)两组散射光,每个细胞产生的吸收量可被测量.低角度和高角度光散射信号分别代表了细胞体积(Y轴)和血红蛋白浓度(X轴),光吸收量和网织红细胞RNA含量成比例.和成熟RBC相比,网织红细胞吸收了更多的光量.网织细胞分布图ADVIA120的主要网织细胞参数#Retic,%ReticCHr(平均网织红细胞血红蛋白量)CHCMr(平均网织红细胞血红蛋白浓度)MCVr(平均网织红细胞体积)LRetic(%,#);MRetic(%,#);HRetic(%,#)→低,中,高吸光强度的网织红细胞.IRF-H,IRF-M+H→不成熟的网织红细胞.其他主要仪器的参数MFI（平均荧光指数）RET-Y（SysmexXE2100）RPI（网织红细胞生成指数）=ret%/ret成熟天数患者HCT/0.45→这一指标显示出骨髓对贫血的反应,RPI≼2表示出骨髓对贫血反应低下或无反应.RMI(网织红细胞成熟指数)=(MFR+HFR)/LFRx100网织红细胞的临床意义①网织红细胞对贫血的适当反应:贫血的恢复依赖的是加速造血,而这是通过骨髓释放EPO完成的.(最大速度6~8倍).通过网织红细胞计数可以最原本反应出贫血是由于RBC生成减少或外周血的减少.网织红细胞正常绝对值是25~75109/L.而任何大于100109/L都可被看成是骨髓对贫血正常的反应.有无溶血性贫血的可能:胆红素增高程度,红细胞的直接破坏和Hb排泄的增加方面的实验参数是我们应当考虑的.②低值网织红细胞和贫血的关系,并且依据RBC进行分类.低值的网织红细胞主要和正常造血减弱有关,这归结于两类原因:一种是红系原始细胞减少(再生障碍),另一种是红系增生,但由于系无效造血,产生的大量无法生存的RBC不能进入到血循环.依据RBC的MCV,MCH,MCHC可进行分类.比如:小细胞贫血:缺铁性贫血,地中海贫血,HbE综合症.大细胞贫血:巨幼细胞性贫血正常细胞贫血(最多):类风湿关节炎,慢性病,肾病,和获得性红系再障等.③骨髓移植(BMT):Ret(21d)→HFR→MFR+HFR(13.31d,WBC14.8d)④MDS:MFR暗示RBC规律性恢复的开始.⑤放疗和化疗:可获得细胞毒,副作用或贫血治疗后的信息.HGB↓→EPO↑→促使干细胞分化→HFR释放早于Ret总数.是骨髓受抑制和恢复的敏感指标.⑥对于贫血的起因有多种分类法,但有两种分类方法是被广泛使用的,一种是以形态学为主,另一种是Kinetic的基于血液形成和破坏的分类法.在许多难以诊断的病例中,二者兼用.在他的分类中网织红细胞担任重要角色.认为正常人平均RPI为1,当RPI≥3时表示红细胞生成增加,而RPI≼2时为生成降低.在RPI2∼3这一区间Kinetic法则还无法确定.网织红细胞的研究进展无论是流式细胞技术还是新型的网织细胞仪,由于计数方法的改进,简单的标本采集,和大批量的标本分析,它已经向我们提供了一种快速,廉价,简单和精确度,准确度较高的实验方法.人们已经从单纯地依据Ret数目,发展到依据其分类及细胞内部含量(如CHr等)研究疾病的过程.研究一:IRF在估计有效造血在贫血病理过程中的作用132ARC(82×109)IRF(0.23)RPI(2)临床病例临床意义26≥≥≥(9/27)镰形贫血危象骨髓造血增强19≥≤≥(16/19)甲低,结节病,厌食症造成的营养不良,神经性梅毒对贫血反应低下或无反应59≤≤≤红细胞生成力降低,慢性肾功能不全,厌食症,对贫血反应低下或无反应28≤≥≤贫血:急性感染,缺铁性贫血,HIV感染,镰形贫血危象,怀孕,MDS有待研究贫血起因研究二:CHr在诊断缺铁性贫血中的意义单纯的血清铁不能完全诊断缺铁,因为在急性反应期它往往是升高或正常.而CHr更直观地反应了细胞状况,它只有在胞膜和胞浆丢失时才发生改变.实验结果显示CHr对照组对于炎症性贫血和非炎症性贫血的患者都有显著差异(P≤0.001).ROC曲线也显示出在诊断缺铁性贫血方面.CHr的敏感度和特异性都较好于MCV和血清铁指标.研究三:网织细胞和贫血的诊断♣网织细胞的成熟指数在鉴别诊断大细胞贫血中的应用这项研究的目的是用网织细胞的参数来鉴别大细胞贫血.网织细胞参数主要是:IRF,MRV,MFI(平均荧光指数).我们知道大细胞贫血通常从病理过程上可以分成两类:①由于脂类沉积在细胞膜上引起,主要指肝病(NMMA).②由于无效造血,包括MDS和叶酸和VitB12缺乏的MA.主要实验结果如下:Normal(30)MA(10)NMMA(30)MDS(35)ARC(109/L)55.8±3.047.1±9.783.5±7.669.5±6.5IFR(%)4.5±0.419±2.59.1±0.822.5±1.4MRV(fl)106.9±1130.6±6.1118.3±1.5127.3±1.6MFI10.5±0.3/12.9±0.620.5±0.8为了区别MDS和其他类型的大细胞贫血他计算出90%的可信区间,并把IRF≤16%,MRV≤129fl,MFI≤18定为0.得分(IRF+MFI+MRV)MDS(患者例数和%)非巨幼细胞性大细胞贫血(患者例数和%)06(17.1)24(80)12(5.7)5(16.6)213(37.1)1(3.3)314(40)0(0)由肝病引起的大细胞贫血是因为脂类异常代谢,在临床上和MDS较难区别.虽然MDS最终要依靠骨髓和细胞基因的检查.网织细胞的检查的确提供了十分有效的鉴别诊断依据.尤其对于那些在外周血检察中缺乏明显发育不良特征的低危险度的MDS.这一发现①辅助骨髓穿刺检查.②利于不同实验室之间的标准化.♣网织红细胞不成熟部分指数在MDS患者中的升高.这篇文章的作者把220例正常人和70例MDS患者比较,发现HFR(P0.01),r=(HFR+MFR)/LFR(0.25%vs0.15,P0.001).MDS通常被认为是一类骨髓中红系受到破坏的慢性非再生性大细胞贫血.一方面由于”幼稚”的网织红细胞生存期延长,另一方面是网织红细胞的凋亡造成了正常或低值的网织红细胞计数.此时加强造血产生的分类左移的网织红细胞会导致HFR的增加,从而导致网织红细胞绝对计数略增,被自动分析仪识别.这对MDS诊断有重要意义.研究四:网织细胞和地中海贫血用CHr和sTfR来反映铁充足状态下杂合型β地中海贫血患者红系骨髓活力和血红蛋白合成,及其与基因型和ＨｂＡ２的相关性.β地中海贫血主要可以分为βsilent,β0,β+.以往由于技术的局限直接检测肽链合成用以确定基因类型,结果会不稳定...用Bayer-ADVIA120.结果显示sTfR与HbA2和HbF有正相关,而CHr和HbA2有负相关(r=-0.790,P0.00001).也证实了基因的突变程度和血红蛋白合成间的关系．从而表明了ＣＨｒ在确定不同类型β地中海贫血的严重度方面的作用．βsilentβ+β0正常组Hb(g/L)135±11122±12112±8141±10Retic(%)1.2±0.41.2±0.51.7±0.71.1±0.3CHr(pg)29.6±1.622.5±1.421.4±1.630.2±0.9HbA23.4±0.54.9±0.65.4±0.43.5谢谢