血涂片及免疫细胞观察

血涂片及免疫细胞观察华南农业大学生命科学学院微生物学教研室张玲华课题组一、实验目的•掌握微量采血及血涂片的制作方法•学习使用光学显微镜观察免疫细胞二、实验原理•瑞氏染液，是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。•瑞氏染液可以将不同免疫细胞中的颗粒和细胞核的核蛋白染成不同颜色，因而，根据细胞中颗粒的颜色、大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将免疫细胞进行分类。三、实验用品•采血针、酒精棉球、镊子、载玻片、瑞氏染液、PBS缓冲液等四、实验操作•采血•涂片•染色•观察1消毒2刺破皮肤3取血将血液滴在载玻片上用另一个载玻片作推片让血液粘附在推片上推出均匀的血膜窍门：将载玻片的一端垫起，有助于推出均匀血膜。•染色液加入3-5滴，静置30s左右后，加入等量缓冲液，静置5-10min。•用蒸馏水/自来水冲去载玻片上的染色液，直至玻片显粉红色。五、实验结果细胞辨别基本窍门细胞类型细胞大小细胞质细胞核红细胞直径7-8微米淡红色无核淋巴细胞直径6-8微米淡蓝色深紫色中性颗粒白细胞直径10-12微米紫蓝色紫色，1-5分叶嗜酸性颗粒白细胞直径10-15微米鲜红色颗粒紫色，2分叶嗜碱性颗粒白细胞直径10-11微米蓝色颗粒淡蓝色，1-2分叶单核细胞直径14-20微米灰蓝色浅紫色，肾形或马蹄形血小板直径2-3微米浅蓝色紫红色颗粒六、注意事项•血涂片需要完全干燥后，再加入染色液。•加入染色液后，再加入缓冲液稀释时，不需要倒掉染色液。•染色时间与染液浓度,室温高低,细胞多少有关。染液越淡,室温越低,细胞越多,所需染色时间越长或应适当增加染液量,因此染色时间应视具体情况而定。特别是更换新染料时必须经试染,摸索最佳染色条件。•染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净。冲洗时应用流水将染液冲去,不能先倒掉染液,以免染料沉着于血片上。•染色过淡，可以复染，复染前需要先加入缓冲液，后加入染色液。→淋巴细胞→嗜中性粒细胞←单核细胞思考题•1、为什么要用甲醇作为瑞式染液的溶剂，它对于染色过程中具有什么重要作用？•2、在染色过程中，采用缓冲液稀释的目的是什么？•谢谢！