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实验一ABO血型鉴定和Rh血型鉴定临床检验诊断学实验室实验内容一、5%红细胞悬液的配制二、ABO血型鉴定（试管法、纸片法）三、Rh血型鉴定?一、5%红细胞悬液的配制原理：使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释压积红细胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，获出最佳结果。器材:小试管（玻璃及塑料皆可）、加样枪、试管架、离心机、记号笔、显微镜。试剂:生理盐水。标本:抗凝或非抗凝静脉血。操作1、全血2ml1000g离心5min，吸取分离上清至另一干净试管（备用）；2、压积加生理盐水约2～3ml，充分摇匀或吸管轻轻吹打混匀，再次离心去掉上清液；3、重复离心（1000g，60s）洗涤红细胞3次，去掉上清液制备压积红细胞；4、取1滴压积红细胞于1支干净的小试管中，在其中加入19滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是5%的红细胞悬液。目的：掌握ABO正反定型的原理、方法。原理：红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO血型。正定型：用已知血型特异性抗体（抗-A、抗-B）来测定红细胞上有无相应的抗原；反定型：用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体。二、ABO鉴定器材:记号笔、小玻璃试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸板、显微镜。试剂:1.ABO血型抗体：抗A、抗B(-A、-B)；2．试剂红细胞：3％～5％Ac、Bc及Oc。3.生理盐水。标本:抗凝或非抗凝静脉血。操作（试管法）(1)标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明－A、－B；反定型：取3支小试管，标记Ac、Bc、Oc。(2)配5%悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加2ml生理盐水，混匀，1000g离心60s，弃上清；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红。(3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。（4）离心：1000g离心15秒。(5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+红细胞凝集成大小块，血清清晰。2+红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。l+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。mf混合凝集外观（mixedfield）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。－表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。红细胞凝集强度判断标准试管法结果判定表lABO血型正反定型结果试剂血清+受检红细胞受检血清+试剂红细胞（正定型）（反定型）-A-B受检血型AcBcOc＋－A－＋－－＋B＋－－－－O＋＋－＋＋AB－－－判断标准操作：玻片法(鉴定纸板)(1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标-A、-B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B试剂1滴，再加受检者10％红细胞悬液l滴，混匀。(2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc，各加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板)，使血清与细胞充分混匀，约2min肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片试验时可用低倍镜观察结果。正定型反定型注意事项1.试剂2.悬红3.蛋白4.溶血5.冷抗体6.老年、儿童7.污染目的掌握Rh血型鉴定的原理、方法。原理Rh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清来检查红细胞抗原。在临床输血中一般只做D抗原的鉴定，被检红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。三、Rh血型鉴定器材小试管、滴管、试管架、记号笔、鉴定纸板、显微镜、离心机。试剂1.Rh抗血清：常用的为IgM抗抗D（其他为抗C、抗c、抗E、抗e）。2.己知Rh阳性和阴性的5％红细胞悬液各1份3.生理盐水。标本静脉血。操作(盐水试管测试法)1.取单克隆抗-D（IgM）-C、-c、-E、-e试剂各1滴到5支试管中。2.每管各加1滴3％～5％待检红细胞悬液。3.充分混匀，以1000g离心15秒。4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用肉眼观看凝集。5.判定结果注意事项1．用抗D血清进行Rh血型鉴别时，结果为阴性，不能直接报告Rh阴性，需进一步检测弱D型还是部分D型。2．Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力振摇。3.Rh血型系统的抗体多为后天免疫刺激产生，不需要做反定型。作业简述导致ＡＢＯ血型鉴定出现正反定型不一致的常见原因。