安捷伦-液质联用技术(LCMS)及其应用

byLiPing1安捷伦-液质联用技术(LC/MS)及其应用byLiPing2液质(LC/MS)联用技术基础byLiPing3质谱分析仪(MS)需要高真空条件质量分析系统最好使用挥发性缓冲液液相(HPLC)高效分离混合物流动相挥发后产生大量气体出口压力为大气压无质量限制可以使用缓冲盐溶液液相(HPLC)到质谱(MS)的接口HPLCMSInterface(KeytoSuccess!)byLiPing4LC-MS的接口的发展和种类传送带(movingbelt)式的LC-MS:目前已经停用热喷雾(TSP)LC-MS接口:已经很少使用粒子束(PBI)大气压电离源(API):目前最常用的方法电喷雾(ESI)大气压化学电离源(APcI)byLiPing5LC/MS联用技术的相对适用范围byLiPing6大气压电喷雾质谱应用范围大气压电喷雾源大气压化学源分子量化合物极性1000100,00010,000非极性极性化合物气相色谱/质谱byLiPing7库仑爆炸（CoulombExplosions）RayleighLimitReached++++++++++-----++++++++++-----++++++--++++++--溶剂蒸发++带电液滴分析物离子溶剂离子束分析物离子溶剂离子束盐/离子对中性化和物电喷雾(ESI)的电离过程byLiPing8NeutralMoleculesAnalyteIonsClustersSalts毛细管液相的入口雾化器加热N2雾化气入口碎片碰撞电压(CID)锥孔八极杆四极杆高能打拿极/电子倍增器+++++透镜+++++++++++++液质联用的电喷雾(ESI)接口byLiPing9ES电离原理byLiPing10蒸汽通过电晕针放电形成带电荷的反应剂离子溶剂在蒸发器中蒸发+含有气溶胶的分析物分析物离子+++++++++++++++++++++++电荷转移至分析物分子++++流动相分析物溶剂---------[溶剂+H]+[溶剂+H]++M---------溶剂+[M]+大气压化学电离源(APCI)的电离过程byLiPing11毛细管碎片碰撞电压（CID）Coronaneedle++++++++++++锥孔透镜四极杆++++八极杆热氮气液质联用的大气压化学电离源(APCI)接口高能打拿极/电子倍增器byLiPing12APCI电离原理byLiPing13大气压源子化技术电喷雾(ESI)化合物无需具有挥发性是分析热不稳定化和物的首选方法离子在溶液中以已生成除了生成单电荷离子之外还可以生成多电荷离子大气压化学电离源(APCI)化和物需具有一定的挥发性化和物必需是热稳定的离子在气态条件中生成只生成单电荷离子byLiPing14电喷雾(ESI)和大气压化学离子化(APCI)农药及残留化合物多肽及蛋白的分子量测定确定氨基酸序列多肽及蛋白的纯度分析单糖和多糖的结构分析中极性到高极性,包括离子化合物的分析,如表面活性剂分析农药及残留化合物抗生素碱性药物小分子量样品类固醇,雌激素单磺酸偶氮染料ESIAPCIbyLiPing15什麽是诱导解离碰撞?(CollisionInducedDissociation)?在特定的区域,通过与氮气分子碰撞导致分子解离,从而产生特征碎片离子可以得到结构信息用于化和物的定性分析可以提供用于定量分析目地的确任碎片离子只要改变单一参数“fragmentor”来控制CID.CapillaryFragmentationZone(CID)SkimmersOctopoleLensesQuadrupoleMn[M]1+[M]2+DETAILbyLiPing16碰撞电压值对质谱图的影响3504004505005506006507002000400060008000m/z--Abundance439467502684.653504004505005506006507002000400060008000m/z--Abundance411439467495684.65碰撞电压=175volts碰撞电压=100voltslossofC14fattyacidlossofC12fattyacidCH2OCOOC11H23CHOCOOC13H27CH2OCOOC15H31lossofC16fattyacidbyLiPing17安捷伦液-质联用仪介绍byLiPing18液质(LC/MS)联用系统的示意图离子源离子束聚焦M/Z分析器检测器数据处理HPLCLC接口020406080100Abund.100150200250300m/z197.1223.0251.0281.0324.21:MS,Time=0.4341-0.7177min(#17-#22),100%=20039000arb质谱图byLiPing19安捷伦LC/MS产品家族液相/离子井质谱(VL和SL)液相/单四极杆质谱LC/MSDVL液相/单四极杆质谱LC/MSDSLbyLiPing20四极杆质谱Scanningofmeasuringrange:U(DCvoltage)V(peakamplitudeofaradiofrequency)UandVarevariedU+Vcos2ftUVcos2ftacanddcvoltagesionswithcorrespondingm/zionscollidewiththerodsDetector++++++MainRFLowAmplitudeDipoleField(1/3FrequencyoftheMainRF)ConversionDynodeElectronMultiplierShutterOptimizedAsymptoteAngleOctapoleRing多极离子阱质谱byLiPing21安捷伦的专利技术直角喷雾接口提高灵敏度减少污染降低毛细管被堵塞对非挥发性缓冲液的忍耐能力强byLiPing22独一无二的交叉喷雾器交叉喷雾器不需X,Y,Z位置调整,而且避免了离子光学透镜的污染倾斜排水口可以快速去除冷凝液byLiPing23完成整个分析后,毛细管的入口处还是干静的!在非常复杂的基质的条件下-汉克盐溶液(Hank’s)Componentg/LSodiumchloride8Calciumchloride0.1Potassiumchloride0.4Potassiumphosphatemonobasic0.06MagnesiumSulfate0.1Sodiumbicarbonate0.35Sodiumphosphatedibasic0.048Glucose1Phenolred0.011byLiPing24清洁喷雾室在APCI的条件下,流动相为HBSS,连续进样635次以后完成整个分析后,毛细管的入口处还是干静的!byLiPing25内置式较正溶液用于全自动调谐和质量较正byLiPing26安捷伦1100系列LC/MSD:易懂,易用的图型化的液相和质谱控制及分析软件byLiPing27哪一种离子化模式最好?不知道要分析的化合物的性质是酸性或碱性要分析的化合物中同时包含酸性和碱性化合物酸性和碱性化合物的浓度不同byLiPing28可同时采集多种质谱信号:正离子和负离子模式采集50组，30个离子/组离子同时采集正负离子byLiPing29我经常筛选未知物.最好是同时获得分子量和一些碎片信息我正在筛选未知物,但我不知道最优的碰撞电压我希望一次能获得在不同碰撞电压条件下的谱图可同时采集多种质谱信号:高和低CID能量byLiPing30低CID能量高CID能量可同时采集多种质谱信号:高和低CID能量byLiPing310200000400000600000800000min12345670100000200000300000400000500000600000700000800000Highfragmentor:130VLowfragmentor:65Vm/z100200300311.1312.1156.1311.1108.1245.1218.1可同时采集多种质谱信号:高和低CID能量磺胺药物演示混合样byLiPing32可同时采集多种质谱信号:SIM/ScanSIM来定量所选的目标化合物离子对未知的化合物SCANbyLiPing33ScanSIM0100000200000300000400000500000600000min1234520000400006000080000100000120000140000160000180000200000279.0m/z100200300279.0280.0301.0磺胺药物演示混合样可同时采集多种质谱信号:SIM/ScanbyLiPing34可同时采集多种质谱信号:时间编程信号1)开始五分钟不采集信号2)5分钟开始采集信号3)信号关闭采集Improvedataqualityandmanagedatafilesize:byLiPing35从每一项分析中获得最大的信息一针注射样品可获得任意以下分析模式最多达四种1.高/低CID能量可获得分子量及碎片信息用于确认化合物的结构2.正/负离子化模式3.SIM/FullScan模式byLiPing36如何建立自己的HPLC/ESI和HPLC/APCI谱库byLiPing37质谱库检索特点检索用户自建谱库使用NIST程序和检索规则没有应用独特的筛选,如PBM谱库可以包含结构式交互式或自动检索DAD/MSD组合检索报告byLiPing38自动生成谱库检索报告Librarysearchmode:AutomaticlibrarysearchLibraryfileNo.:1Libraryfilename:S:\SPYDER\MSLIBR~1\DOUGLIB.UVLMatchthreshold:950Puritythreshold:CalculatedTimewindowleft[%]:NoneCasesensitive:NoTimewindowright[%]:NoneWholeword:NoWavelengthshift:0.0Comparespectrum:YesAbsorbancethreshold:0.0Searchlogic:ORSearchrange:AllSignal1:DAD1A,Sig=254,8Ref=450,80Signal2:MSD1TIC,MSFileNISTMSlibrarysearchmode:AutomaticlibrarysearchNISTMSlibraryfileNo.:1NISTMSlibraryfilename:douglibRetTimeSigMWLibraryMatchFormulaName[min]#Id-------|---|----|-|-------|-----|----------------|------------------2.746227014720C9H10N4O2S2Sulfamethizole2.987227815748C12H14N4O2SSulfamethazine3.571228416583C10H9ClN4O2SSulfachloropyridazine6.1432310125868C12H14N4O4SSulfadimethoxinebyLiPing39SIM灵敏度•API-electrosprayat400µl/minorAPCIat1000µl/min•Selectedionmonitoringofm/z609.3•Positiveionization•VL10pgreserpine50:1RMS(10:1peak-to-peak)•SL1.0pgreserpine50:1RMS(10:1peak-to-peak)卓越的操作性能指标byLiPing40LC/MSDSL:利血平(电喷雾,SIM模式)ChromatographicConditionsColumn:3