定量产品中公司参考品的制备

定量产品中公司参考品的制备陈超公司参考品制备的目的参考品的制备参考品制备的目的123研发性能考核原料检定及批间控制产品检定I参考品的要求待测物的分类丨参考品制备的基本要求丨参考品的组成第一部分待测物分类参考品的要求大分子抗原指能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，并能与相应免疫应答产物（抗体或致敏淋巴细胞）在体内或体外发生特异性结合的物质。肿瘤标记物等半抗原某些小分子物质，单独不能诱导免疫应答，但与大分子蛋白质或非抗原性的多聚赖氨酸等载体交联或结合后可诱导免疫应答。胰岛素C肽等抗体是一种由浆细胞分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质。乙肝表面抗体（anti‐HBs）甲状腺球蛋白抗体（anti‐Tg）甲状过氧化物酶抗体（anti‐TPO）等小分子物质生物体内主要分子量较小的活性成分或无机物。三碘甲状腺原氨酸（T3）四碘甲状腺原氨酸（T4）雌二醇（E2）孕酮（P）等第一部分基本要求参考品的要求0204010305结构原则上标准品与被测物具有完全相同的化学结构，包括相同的立体化学结构。有时也用结构类似的物质作为标准品化学纯度国际上公认的标准参考品或高纯度的纯品免疫纯度被测物质与标准品对所用抗体的免疫活性应该完全一致干扰物质标准品中不能有干扰分析的物质参考品批量为保证检测的连续可比性，每批标准品应有相当大的量，以保证在较长时间内使用第一部分参考品的组成参考品的要求准确度参考品线性参考品精密度（重复性）参考品分析特异性参考品15243其他参考品II标准品的分类国际参考品丨国家级标准品丨实验室标准第二部分标准品的分类标准品的分类国际参考品(International reference)国际参考品是由WHO、IRMM等制定的实验室制备，被国际公认为最高级别的标准品。1国家参考品国家级标准品是由国家的有关权威机构，用高化学纯和高免疫纯、低交叉反应的纯品制备的，供国家内部使用。国家级标准品应与国际参考品或其他国家的国家级标准品进行对比。23实验室参考品实验室标准是由实验室自己，或由生产厂家制备的标准品，又称为二级标准品。所有的二级标准品都必须经过与国家标准品或国际参考品进行比对或校正。III参考品的制备基质的选择及制备丨纯品的选择丨参考品浓度的选择丨参考品制备第三部分基质的选择及制备参考品的制备作为参考品的介质（基质）成分应与被测样品相同。1对大多数用于测定血清中某物质的参考品，应用不含被测物质的零值血清制备。2对于零值血清制备困难时，选择合适的缓冲液中添加一定量的载体蛋白（一般用1%‐2%的BSA），以便使其与样品的介质环境相近（如10‐20 mM的PBS缓冲液，pH 7.2‐7.4）。3第三部分零值血清的制备参考品的制备吸附法血清中小分子物质如三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）等，可用活性炭吸附去除。该方法简便，但待测物质难以清除干净，且大分子活性物质不能用此法进行去除制备。对大分子活性物质可选用低值血清，经反复冻融使被测物质失活。该方法可使某些蛋白类激素大部分失活，但也难以得到真正的零值血清。亲和层析法反复冻融法零值血清制备商品化用特异性抗体制备亲和层析柱，用以吸附被测抗原。该方法可以得到高质量的零值血清，但操作较为复杂、成本也比较高。ScantibodiesSeracareBiomex等第三部分待测物（添加物）的选择参考品的制备尽可能选用国际或国家标准品，对于小分子物质可选用USP、EP等标准品。A高化学纯度和高免疫纯度的纯品，不建议使用重组抗原。B国际或国家标准品配制量较少，不够日常使用。无国际或国家标准品第三部分参考品浓度选择&参考品制备参考品的制备行业标准或国家标准A参考医学决定水平B产品质量的控制点C同类试剂的性能评估D用零值血清配制高浓度的标准品（母液）根据参考品设定的浓度要求，用零值血清将高值血清稀释至应有的浓度IV参考品的赋值（定值）免疫活性鉴定丨浓度的标定第四部分免疫活性的鉴定参考品的赋值选用高特异性的抗血清作公认标准品(如WHO的国际参考品或国家标准品)和待鉴定标准品的剂量反应曲线，并观察两条剂量曲线的平行性。如两条剂量反应曲线平行，说明两种来源物质对同一抗体有相同的亲和力，即二者是同质性物质。如两条剂量反应曲线不平行，说明两种来源物质具有异质性，因而这一待鉴定的标准品原则上是不能使用的。一公认标准品剂量曲线一待鉴定标准品剂量曲线√测量值浓度×测量值浓度第四部分浓度的标定参考品的赋值国际或国家标准品直接配制：称重法A用高纯度物质配制（有国际或国家标准品）：用公认的标准品系列稀释度建立的剂量曲线对参考品进行直接赋值。B用高纯度物质配制（无国际或国家标准品）：溯源至公认的参比测量体系。C准确度确认（验证）（样本）V参考品的稳定性与保存影响标准品稳定性的因素丨标准品的保存方法丨稳定性研究第五部分影响标准品稳定的因素参考品的稳定性与保存基质中的酶、细菌污染、pH变化、氧化、潮湿等因素都可以导致标准品的变性，而且这些变化可因高温和光照加速。保存过程中发生的聚合反应等分子结构的变化，可使标准品失活。容器内壁的吸附作用和溶剂的蒸发可造成标准品浓度的改变。保存条件不适当也可以影响标准品的稳定性，如反复的冻融可降低标准品的免疫活性等。1234第五部分标准品的保存方法参考品的稳定性与保存冷冻干燥（冻干）法：冷冻干燥对标准品的浓度和免疫活性无明显的影响，是目前最常用的保存方法。冷冻干燥制品在低温下，可在较长的时间内保持稳定。但应用冷冻干燥制品时，复溶体积的准确度十分重要。因此，要用经过校准的量器准确的复溶，以减少标准品的浓度误差。1在标准品中加一定量的防腐剂可减少细菌污染的影响。2冷冻法：‐20 oC或‐70oC以下保存。3第五部分稳定性研究参考品的稳定性与保存长期稳定性：长期处于保存条件下参考品的稳定性12‐8 ℃稳定性（适用时）：置于2~8℃的参考品稳定性2冻融稳定性（适用时）：参考品经一次或多次冻融后的稳定性3开瓶稳定性：参考品在开瓶使用后的稳定性4谢谢