(七)固定液和保存液

（七）固定液和保存液用固定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等，能保存组织内细胞的形态、结构及其组成，尽量使它近于生活状态。固定液一般有防腐和保存的作用，分为单纯固定液和混合固定液。单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞等，前两种固定液是中学生物实验室常用的。单纯固定液的优点是简便，缺点是有一定的局限性，不易达到理想的固定要求。混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成，使各自的优缺点相互补充，成为较完美的固定液。这种固定液的制备虽比较麻烦，但是效果比较好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福尔马林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。常用的保存液大致跟固定液相同，主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。有时按特殊保存的需要，再保存液中增加某些药品（如原生标本的保存液）。1、福尔马林福尔马林在固定组织标本时杀菌能力强，所以防腐性强，渗透力大，固定得快。永福尔马林固定精细的解剖标本时，要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。固定液常用的浓度是5～10%（根据材料的大小、性质和数量而定）。保存液常用的浓度是5～10%。用福尔马林作保存液，效果好且价格低廉。在配制福尔马林溶液（固定液或保存液）时，应将37～40%的甲醛作为整个溶质来配。例如配制5%福尔马林是取市售37～40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。实际上甲醛含量只有1.9～2%，这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。注意事项：（1）福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸，可适量的加入碳酸钙（）或碳酸镁（）等碱性物质进行中和。（2）福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低，并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛，使浸液变浊，影响观察。所以，根据一定保存期的情况，可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液，以防标本变坏。其中如有白色沉淀物，加热后可使它溶解。（3）市售的福尔马林液常带有酸性，能腐蚀石灰质，因此，最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。2、酒精（乙醇）酒精也是常用的固定液，它有强烈的杀菌作用，对组织材料的渗透力较大，固定的快。但是，它的脱水作用较强，在高浓度的酒精中容易使材料显著硬化和收缩。一般用于固定浸制标本材料，分一级或二级固定，即70%或50%与70%的酒精。有些小型材料或精细的解剖材料，最好用二级或三级固定，即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精，最后再进行保存。从经济效果来考虑，一般酒精应跟福尔马林液等固定液混合使用。市售的工业用酒精浓度是95%左右，因此用时要重新配制。保存液的浓度通常是70%。注意事项：（1）在固定材料时要注意固定的效果，小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必须先往体内注射一部分固定液，再放入固定液中，防止材料内部腐怀变质。用福尔马林液固定也是如此。（2）高浓度的酒精有脱水、脱脂作用。含有多量脂肪或拟脂标本（如脑、脊髓）等都不宜用较高浓度的酒精作保存液。（3）为了防止酒精使标本硬化，保存一些精细的材料或解剖标本时，因加入少量甘油，因为甘油具有润软组织的作用。（4）忌跟铬酸、锇酸和中铬酸钾等氧化剂配合。3、醋酸醋酸即乙酸，纯醋酸在低于16.7摄氏度时会凝成冰状固体，所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透组织，因为它不能沉淀细胞质中的蛋白质，组织不会硬化。一般常跟酒精、福尔马林、铬酸等容易引起组织变硬和收缩的液体混合，以起到相互抵消的作用。醋酸固定液的常用浓度是0.3%～5%。4、苦味酸苦味酸是一种黄色结晶，能溶于水（溶解度是0.9～1.2%）、酒精（溶解度是4.9%）和苯（溶解度是10%）。苦味酸也能沉淀一切蛋白质，穿透较慢，固定后，组织收缩明显，但不使组织硬化。苦味酸固定液可以在100毫升蒸馏水中加入苦味酸约1.5克，制成饱和水溶液。固体苦味酸易爆，长制成饱和水溶液保存。5、升汞升汞又叫氯化汞，是白色粉末，以针状结晶为最纯。通常固定时用饱和水溶液，有时也用70%酒精作溶剂，不单独用作固定剂。升汞的穿透力较弱，通常用于小型材料，对蛋白质有强烈的沉淀作用，硬化程度中等。固定液用饱和溶液，浓度约为7%。6、卡尔氏（Carl's）液配方95%酒精170毫升蒸馏水280毫升福尔马林60毫升冰醋酸20毫升冰醋酸要在临用前加入。这时极好的昆虫保存液，常用来杀死和保存小型、身体柔软的种类入螨、蜈蚣、马陆等。在这溶液里加入少量甘油，能防止虫体变脆。7、卡诺氏（Carnoy's）液配方纯酒精6份冰醋酸1份氯仿3份这种固定液能固定细胞质和细胞核，尤其适宜于固定染色体，所以多用于细胞学的质片，还用来固定腺体、淋巴组织以及原生动物的胞壳等。这种固定液穿透得快，因此一般小块组织固定20～40分钟，大型材料不超过3～4小时。固定后用95%或纯酒精洗涤，换液两次，移到石蜡中或用80%酒精保存。8、吉尔桑氏（Gilson）液配方60%酒精50毫升冰醋酸2毫升80%硝酸7.5毫升升汞10克蒸馏水440毫升这是常用的固定液，适用于肉质菌类，特别是柔软胶质状的材料如木耳等，也广泛用于无脊椎动物和一般组织和蛙胚的固定。固定时间18～20小时，然后用50%酒精冲洗材料，除去升汞。如果用水冲洗，会使材料膨胀。混合液保存24小时后失效。9、福尔马林--醋酸--酒精溶液（FAA）液配方50%酒精85毫升福尔马林10毫升冰醋酸5毫升这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织，昆虫和甲壳类动物。液组织在这溶液里固定12小时，木质化组织要固定1周，材料也可在此液中长期保存。固定后的材料放在50%酒精中冲洗1～2次。4、细胞质染色剂配方一伊红染液伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。（1）取1克伊红，溶于99毫升蒸馏水中，即成1%伊红水溶液（市售红墨水内含伊红成分，可以用红墨水稀释液来代替本溶液）。（2）取1克伊红，溶于99毫升70%酒精中，即成1%伊红-酒精溶液。配方二甲基蓝染液取1克甲基蓝，溶于29毫升70%酒精中，加入70毫升蒸馏水，即成1%甲基蓝染液。配方三亮绿染液取0.5克亮绿，溶解在100毫升蒸馏水中，即成0.5%亮绿溶液。5、细胞核染色剂配方一甲基绿染液取1克甲基绿，溶于99毫升蒸馏水中，加入1毫升冰醋酸。本染液能染细胞核，还用来染木质化细胞壁。配方二龙胆紫染液取1克龙胆紫，溶于少量2%醋酸溶液中，加2%醋酸溶液，直到溶液不呈深紫色止。配方三美蓝（亚甲基蓝）染液取0.5克美蓝，溶于30毫升95%酒精中，加100毫升0.01%氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶内。此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。配方四硼砂-洋红染液取4克硼砂，溶于96毫升蒸馏水中。再加入2克洋红，加热溶解后煮沸30分钟，静置3日，用100毫升70%酒精冲淡，放置24小时后过滤。此染液能染细胞核，还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色，如水螅、血吸虫等整体标本。配方五德氏（Delafield's）苏木精染液甲液取1苏木精，溶于6毫升无水酒精中，即成苏木精-酒精溶液。乙液取10克铵矾溶于90毫升蒸馏水中，即成10%铵矾水溶液。取甲液逐滴加入到乙液中，用纸遮盖，放在阳光明亮处，使它充分氧化。3～4天后将溶液过滤，在滤液中加入25毫升甘油和25毫升甲醇，保存在密闭玻璃瓶内。静置1～2个月，待该液颜色变深时过滤，可长久保存。本染液是染色体的优良染色剂，除能染细胞核外，还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。配方六席夫（Schiff's）试剂称取0.5克碱性品红，加到100毫升煮沸的蒸馏水中，再微微加热5分钟，不断搅拌，使它溶解。在溶液冷却到50摄氏度时过滤，滤液中加入10毫升1N盐酸。再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重亚硫酸钠（）或无水亚硫酸氢钠（）。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中24小时。在溶液颜色退到淡黄色时，加入0.5克活性炭，用力摇荡1分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光（瓶外用黑纸或暗盒遮光）。如溶液变成红色，即失去染色能力。碱性品红是较强的核染色剂，在孚尔根氏（Feulgen's）反应中作为组织化学试剂，以检查DNA。6、染色体染色剂配方一醋酸-洋红染液取45毫升冰醋酸，加蒸馏水55毫升，煮沸后徐徐加入洋红1克，搅拌均匀后加入1颗铁锈钉，煮沸10分钟，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。配方二醋酸-地衣红染液取45毫升醋酸，跟55毫升蒸馏水相混，加热，徐徐加入地衣红粉末1～2克，搅拌溶解后，缓缓煮沸2小时。冷却后过滤，贮存在棕色瓶里。配方三龙胆紫染液取1克龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100毫升，保存在棕色瓶内。配方四甲苯胺蓝染液取0.5克甲苯胺蓝，溶解在100毫升蒸馏水中，即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。7、线粒体染色剂配方一詹钠斯绿B(Janu'sgreenB)酒精饱和溶液取125毫升詹钠斯绿B，加入到62.5毫升无水酒精中，搅拌，即成烟鲁绿B酒精饱和染液。（1）取詹钠斯绿酒精饱和染液按1：30000比例加蒸馏水稀释，用来染原生动物线粒体。(2)取詹钠斯绿酒精饱和液，按1：10000比例加蒸馏水稀释，用来染新鲜蛙血线粒体。配方二詹钠斯绿B中性红染液先配制詹钠斯绿B和中性红酒精饱和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法：取125毫升中性红，加入到50毫升无水酒精中，搅拌。在10毫升生理盐水（两栖类生理盐水浓度为0.65%；哺乳类生理盐水浓度为0.9%）中，加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.7～1毫升，中性红酒精饱和液2毫升，混合。詹钠斯绿B稀释液是活体染液。8、脂肪染色剂苏丹Ⅲ染液取0.1克苏丹Ⅲ，溶于20毫升95%酒精中，即成0.5%苏丹Ⅲ染液。这染液能染脂肪，还能染木栓、角质层。9、血液染色剂配方一瑞氏（Wright's）染液取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研钵内，加少量甲醇研磨，使染料溶解，然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存，即可使用。新鲜配制的染液偏碱性，放置后呈酸性，染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.4～6.8。因此，染色时加入缓冲液，可维持一定的酸碱度，使染色效果更好。这种染液除能染血液，还能染疟原虫。瑞氏染料可以自制。在100毫升0.5%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝，溶解后放在锅内，蒸上1小时，取出冷却后过滤。在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升，随加、随搅拌，使混合液呈紫色。静置一夜后，用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物，在室内风干或放在干燥箱内，充分干燥后研磨成粉末，即成瑞氏染料。配方二甲基紫染液取甲基紫0.5克，加到100毫升生理盐水中，溶解后加入冰醋酸0.02毫升。10、吸虫染色剂梅耶氏（Mayer's）明矾-洋红染液取铵明矾（硫酸铝铵）5克，溶于95毫升蒸馏水中，再加入0.5克洋红酸，加热溶解，冷却后过滤。在滤液中加入少量防腐剂，如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚（石炭酸）等，以防生霉。这种染液适合于染小型动物材料，如吸虫等寄生虫的整体，也能染高等植物的表皮和蕨类植物的原叶体。11、活体染色剂配方一中性红染液先配成1%中性红水溶液（1克中性红溶于100毫升蒸馏水中）。取这种溶液1毫升，用0.6%生理盐水（或蒸馏水）稀释到50毫升，即成0.02%中性红水溶液，贮存在棕色瓶里，放在黑暗处。本染液用来显示原生动物的食物泡以及动植物组织中活细胞的内含物等。配方二尼罗蓝（NileBlue）染液取0.1克尼罗蓝，溶解于1000～1500毫升蒸馏水中，即成尼罗蓝染液。这种染液能把原生动物大核染成绿色，食物泡染成蓝色。配方三亚甲蓝染液取0.1克亚甲蓝，溶解于1000毫升蒸馏水中，即成亚甲蓝染液。这种染液用于原生动物的活体染色。12、透明骨骼标本染色剂配方一茜素红染液（Ⅰ）取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。在这种混合液中方入少量茜素红，制成茜素红饱和溶液。配方二茜素红溶液（Ⅱ）取1克茜素红，溶于100毫升95%酒精中，搅拌，然后跟900毫升1%氢氧化钾溶液相混，即成深紫色的茜素红染液。（七）固定液和保存液用固定液固定动植物整体或它的一部