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检样25g(ml)+225ml7．5％氯化钠肉汤BHI肉汤血平板，Baird-parker平板涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报告36±1℃24hr36±1℃24hr36±1℃24hr呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环。Why?血平板鉴定-菌落形态特征灰色到黑玉色，圆形，光滑突起，湿润，边缘常为淡色（米黄色或灰色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。Why?Baird-parker鉴定-菌落形态特征革兰氏阳性菌，球形，组成葡萄状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5μm～1μm鉴定-革兰氏染色镜检试管法鉴定-血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5mLBHI和营养琼脂小斜面，36℃±1℃培养18h～24h。吸取1：4兔血浆0.5ml放入灭菌试管中，再加入培养后的的BHI肉汤0.5ml，振荡均匀，放在36℃±1℃水浴锅，每半小时观察一次，至少观察6小时。阳性反应阴性反应不凝固少量、零散凝固明显的块状凝固巨大块凝固完全凝固，倒置不流动项目四金黄色葡萄球菌检验革兰氏染色一、革兰氏染色步骤涂片热固定初染媒染脱色复染革兰氏染色阴性革兰氏染色阳性菌体呈红色者为G－番红复染番红复染菌体仍呈深紫色者为G+乙醇(或丙酮)脱色细菌涂片草酸铵结晶紫初染卢哥氏碘液媒染二、革兰氏染色原理G＋菌细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。Gˉ菌肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。项目革兰阳性菌革兰阴性菌项目革兰阳性菌革兰阴性菌强度厚度肽聚糖层数肽聚糖含量糖类含量坚韧20-80nm15-51层占细胞壁干重的50%-80%约45%较疏松10-15nm1-3层占细胞壁干重的10%-20%15%-20%脂类含量磷壁酸外膜脂蛋白脂多糖1%-4%+---11%-22%-+++G+和G－细胞壁化学组成及结构比较1、G+细菌的细胞壁。厚而致密，由肽聚糖和磷壁酸组成，以金黄色葡萄球菌为代表。2、G-细菌的细胞壁。分两层，外层为脂蛋白和脂多糖层，内层为肽聚糖层，以大肠杆菌为代表。3、染色方法（1）单染色法用一种染料使微生物染色，如美蓝、孔雀绿、碱性番红、结晶紫和中性红等。（2）复染色法又称鉴别染色法是用两种或两种以上染料进行染色，有协助鉴别微生物的作用。最常用的鉴别染色法为革兰氏染色法。（3）特殊染色法针对一些特殊情况而进行染色的方法。