细菌的生理生化实验

实验六细菌的生理生化实验实验目的巩固微生物无菌接种技术；了解细菌鉴定中常用的生理生化实验的原理和方法微生物的生理生化反应微生物细胞在酶的催化下进行各种各样的生理生化反应把微生物细胞在一定的条件下培养，通过观察生理现象和检查代谢产物，可以了解微生物的代谢过程和代谢的特点由于不同的微生物可能具有不同的酶，代谢途径和代谢产物可能也有不同，生理生化反应是微生物分类鉴定的重要指标之一。淀粉水解实验淀粉培养基+淀粉培养基+接种+变色圈，水解圈培养24h加卢哥氏碘液I-KI结果：有水解圈—淀粉水解实验阳性，用+表示；无水解圈—淀粉水解实验阴性，用-表示；糖发酵实验原理：丙酮酸裂解生成乙酰CoA与甲酸，甲酸在酸性条件下在甲酸氢解酶作用下可进一步裂解生成H2和CO2——产酸产气缺少甲酸氢解酶——产酸不产气步骤：配制糖发酵培养基——接种——培养（约24h)——观察结果结果：紫色无气泡，既不产酸也不产气用-表示；黄色无气泡，产酸不产气，用+表示；黄色且有气泡，产酸产气，用0表示。甲基红实验（M.R实验）原理微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸——pH下降——加入指示剂甲基红——红色步骤：配制蛋白胨水培养基——接种——培养（约24h)——加入指示剂甲基红1~2滴——观察结果结果：红色——M.R实验阳性，用+表示；不变色——M.R实验阴性，用-表示；V.P实验V.P实验步骤：配制蛋白胨水培养基——接种——培养（约24h)——5~10d40%KOH,5~10d5%a-奈酚和少量肌醇，取出塞子，用力震荡，保温（37度15~30min）——观察结果结果：红色——V.P实验阳性，用+表示；不变色——V.P实验阴性，用-表示。实验内容以组为单位进行淀粉水解实验、糖发酵实验、V.P实验和M.R实验。实验菌种：淀粉水解实验、糖发酵实验：大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌V.P实验和M.R实验：大肠杆菌、产气杆菌注意事项：实验报告：1、列表记录实验结果2、思考题：第4小题四大类细胞型微生物菌落的鉴定初步鉴定确证：显微镜观察微生物菌落特征的记录和描述菌落形态：形状，边缘情况大小：表面状况：湿润、粘稠或干燥，隆起或扁平，厚或薄，是否粉末状质地：致密或疏松蔓延程度：与培养基结合程度颜色（正面、反面、边沿、中心）气味示例将菌株在查氏琼脂平板上25℃培养7d后菌落直径18~19mm，圆形，边缘齐整不蔓延，表面丝绒状并具放射状沟纹，较厚，中央稍凸起，，菌丝初为浅黄褐色近于淡粉红色，老后颜色变深，有黄色渗出液，背面呈黄褐色。