H&E染色操作流程

H&E染色操作流程1H&E操作流程封片复染显色链霉亲和素反应滴加二抗反应40分钟滴加一抗灭活内源性生物素修复抗原灭活内源性过氧化物酶风干1小时质量控制程序对照福尔马林固定、石蜡包埋HER2及ER蛋白免疫组织脱蜡及回水脱蜡及回水准备H&E染色切片H&E操作流程苏木素染色封片复染显色链霉亲和素反应滴加二抗反应40分钟滴加一抗灭活内源性生物素修复抗原灭活内源性过氧化物酶风干1小时质量控制程序对照福尔马林固定、石蜡包埋HER2及ER蛋白免疫组织脱蜡及回水脱蜡及回水准备H&E染色切片•用苏木素逆向染蓝细胞核–逆向染色是指对组织过分染色，然后再退色•用自来水冲洗–冲洗多余的染液苏木素染色(H&E)H&E操作流程退色苏木素染色封片复染显色链霉亲和素反应滴加二抗反应40分钟滴加一抗灭活内源性生物素修复抗原灭活内源性过氧化物酶风干1小时质量控制程序对照福尔马林固定、石蜡包埋HER2及ER蛋白免疫组织脱蜡及回水脱蜡及回水准备H&E染色切片退色•退色是选择性对指定的组织染色（例如，细胞核）•这是苏木素伊红染色过程中很重要的一步，需小心处理•用显微镜观测退色效果•用自来水冲洗干净，终止酸性作用H&E操作流程Scott蓝化液染蓝退色苏木素染色封片复染显色链霉亲和素反应滴加二抗反应40分钟滴加一抗灭活内源性生物素修复抗原灭活内源性过氧化物酶风干1小时质量控制程序对照福尔马林固定、石蜡包埋HER2及ER蛋白免疫组织脱蜡及回水脱蜡及回水准备H&E染色切片•Scott蓝化液的碱性令被苏木素染色的组织在显微镜下显示为蓝/紫色•pH值的改变令染液和组织结合物不溶于水Scott蓝化液染蓝H&E操作流程Scott蓝化液染蓝退色苏木素染色封片复染显色链霉亲和素反应滴加二抗反应40分钟滴加一抗灭活内源性生物素修复抗原灭活内源性过氧化物酶风干1小时质量控制程序对照福尔马林固定、石蜡包埋HER2及ER蛋白免疫组织脱蜡及回水脱蜡及回水准备H&E染色切片伊红染红•伊红常用作对比染色，为除细胞核外的组织染色•如需要，伊红染色后可再次退色伊红染色H&E操作流程伊红染红Scott蓝化液染蓝退色苏木素染色封片复染显色链霉亲和素反应滴加二抗反应40分钟滴加一抗灭活内源性生物素修复抗原灭活内源性过氧化物酶风干1小时质量控制程序对照福尔马林固定、石蜡包埋HER2及ER蛋白免疫组织脱蜡及回水脱蜡及回水准备H&E染色切片•这是与脱蜡回水相反的步骤•用合成树脂材料封存组织（例如DPX或Eukitt封片剂)脱水、清洗及封片苏木素•太多？太少？决不能太晚•如苏木素太少可再染一次•如苏木素太多可再退色伊红•伊红染色可显色为不同程度的红色，从粉红到红•如有需要可再染一次或再退色H&E:要点安全指引察看左旋柠檬烯，二甲苯，乙醇，伊红苏木素，及DPX的安全资料表染色时使用镊子，戴手套和护目镜，穿试验服，小心盖玻片碎片H&E染色疑难排解问题：脱蜡不够彻底•原因–烤片时间过短–恒温箱温度不够–二甲苯或左旋柠檬酸中有水分–组织下有水泡–试剂重复使用次数太多问题:染色不均匀•原因–脱蜡不彻底–风干时间不够–烤箱温度不够–二甲苯或左旋柠檬酸中有水分–组织下有水泡–试剂重复使用次数太多–固定及/或处理程序不佳H&E染色疑难排解H&E染色疑难排解问题:组织脱片•原因–风干时间不够–操作染色步骤时不够仔细–载玻片上有油垢–烤箱温度不够–没有按说明制备试剂–固定及/或处理程序不佳H&E染色疑难排解问题:苏木素着色太深•原因–退色不够–组织问题–处理手法不佳–组织里含钙H&E染色疑难排解问题:苏木素着色太浅•可能原因–退色时间太长–组织问题–处理手法不佳–过渡脱钙–苏木素重复使用次数太多–苏木素不成熟H&E染色疑难排解原因：伊红对比染色效果不佳•可能原因–试剂重复使用次数太多–组织问题–处理手法不佳–退色时间太长–脱水太快H&E染色疑难排解问题:盖玻片下有气泡•可能原因–脱水太快–DPX里有气泡–组织下有气泡–水泡H&E染色疑难排解问题:细胞核染成了黑色•可能原因–封片前组织干透了