SeahorseXF实验流程(此为简略版实验流程,详细步骤参见培训手册)XF实验前一天1.种细胞:将细胞接种到SeahorseXF细胞培养板中,在生长培养基中过夜培养。注:细胞接种时间和培养时间可根据细胞处理要求进行选择。2.预热仪器:打开Seahorse仪器和电脑,并打开软件,使仪器升温至37℃,过夜预热。3.水化探针:在UtilityPlate中加入SeahorseXF校准液,将测试板放回UtilityPlate上,置于37℃无CO2培养箱中过夜水化探针。XF实验当天1.准备检测液:用SeahorseXFBaseMedium配制检测液,加入所需要的底物,将溶液加热至37℃,用NaOH调pH值至7.4,过滤,置37℃水浴中备用。注:检测液中所需要添加的底物及浓度取决于细胞类型和实验设计,或者与生长培养基保持一致。2.观察细胞:将细胞板从CO2培养箱中取出,在显微镜下观察细胞状态。3.细胞换液:将生长培养基换为检测液,然后将细胞放置在37℃无CO2培养箱中1小时。4.配药:根据试剂盒说明书,配制并稀释药物至所需浓度。5.加药:将稀释好的药物分别加入测试板上的A,B,C,D四个加药孔中。注:根据实验设计选择所用加药孔数量。6.设计实验模板:用软件记录实验条件和设计实验程序。7.上机:开始运行实验程序,将加过药的测试板和装有校准液的UtilityPlate一起放置到仪器托板上。8.仪器自动校准探针。9.换细胞板:当软件出现提示信息时,将UtilityPlate换为细胞板。10.实验完成时根据软件提示信息退出测试板和细胞板,并在显微镜下观察细胞状态。11.数据分析:采用wave软件和reportgenerator对实验数据进行分析。