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哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.0哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库疾病样本采集和处理技术规范版本号1.0哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.0疾病样本采集和处理技术规范背景研究样本的采集、运输、和存储贯穿于大多数临床试验研究的始末。由于研究样本中含有大量的研究数据，是整个研究的关键因素。因此，研究样本的科学化管理显得尤为重要，是关系到整个临床试验和科学研究能否顺利进行的前提条件。研究样本管理是一项非常繁琐复杂的工作，包括血浆，血细胞和尿液的采集、运输和存储。此项工作要求相关工作人员具备极强的工作责任心，严谨的工作作风和端正的工作态度。撰写此SOP有助于相关工作人员更好地理解、掌握研究样本管理的一系列工作流程，能够更及时，有效地完成每一阶段的研究样本的采集、运输和存储工作。术语与定义1）全血：将人体内血液采集到采血袋内所形成的混合物称为全血，即包括血细胞和血浆的所有成分。2）血浆：血浆的作用相当于结缔组织的细胞间质。是血液的重要组成分，呈淡黄色液体（因含有胆红素）。3）血清：指在凝血过程中，血浆中的纤维蛋白原转变为不溶的血纤维。血纤维交织成网，将很多血细胞网罗在内，形成血凝块。血液凝固后，血凝块又发生回缩，并释放出淡黄色液体，称为血清。4）血清促凝管：用于医学检验中生化学，免疫学，血清学，各种病毒检测及血库检测血液标本的采集与盛装。管壁经特殊处理，防止挂壁及溶血现象；它既是采血管，又是检测管。5）EDTA（ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸）抗凝管：用于临床血液学检测，并适合各类血液细胞分析。采血管内壁喷涂有防止挂壁的药剂，同时添加了抗凝剂。EDTA抗凝剂对血球的凝集及细胞的哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.0形态影响较小，可以抑制血小板的聚集。6）条形码：条形码是指由宽度不同、反射率不同的条和空,按照一定的编码规则编制成的,用以表示一组数据的符号,通过条形码扫描枪等设备,可以快速读取条形码所表示的信息,准确性和可靠性较高。条形码技术是目前应用最广泛的自动识别技术之一。7）入库：将研究样本冻存管上的条码信息录入电子数据库，同时将该样本精准定位于冰箱存储位置的过程。8）出库：记录研究样本取出次数和目的，同时掌握冰箱空间占用状况的过程。1获取知情同意书主管医生需提前向受试者详细介绍研究信息、样本采集原因等相关信息。征得患者本人同意后，在自愿的前提下由本人签署知情同意书（未满十八岁的患儿须征得法律监护人同意并由监护人签署知情同意书）。知情同意书一式两份，研究单位及受试者各保留一份。1.1存档知情同意书主管医生将获取的受试者知情同意书，交由专人将原始文件存档保存，以便日后考核查阅。2血液标本的采集2.1设备和耗材2.1.1设备-80℃冰箱、离心机2.1.2耗材乳胶手套、吸管、注射器、5ml无菌真空采血管（EDTA抗凝，可以直接离心）、哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.05ml无菌真空采血管(血清促凝管，可以直接离心)、印有条形码或管壁记录患者信息的专用冻存管。2.2标本采集程序2.2.1采血地点心内科导管室2.2.2血液标本采集操作程序：(1)选择本次造影穿刺的血管(2)在穿刺部位肢体下放一次性垫巾，用复合碘棉签消毒穿刺部位。(3)穿刺：推荐使用真空采血技术。摘掉动脉穿刺针上的保护套，进行动脉穿刺，穿刺成功后，用贴好标签的负压真空管采集动脉血，拔出针头，按压5分钟。(4)采血量根据科研项目决定,通常为5-10ml(不少于5ml)，需抗凝的血标本收集后，将采血管轻柔倒置数次，以便采集的血液与抗凝剂充分接触，不可以震动以免造成溶血。(5)将收集完毕的采血管置于导管室旁边的4℃冰箱；并于采集后2小时内在导管室旁进行血清、血浆及全血分离处理后冻存管-20℃保存并当晚低温转移至实验室样本库。2.3标本的分离处理2.3.1血清样本及血凝块(1)使用红帽管(不含抗凝剂)收集血标本后，4℃下放置60min；(2)在4℃条件下，3000rpm离心10分钟；(3)将上层血清分装入500ul带有条形码的冻存管中，每管250ul，分装10管，丢去血凝块。2.3.2血浆样本及余血(1)根据项目规定的血浆采集所用的抗凝剂随项目要求，无特殊要求的标本使用紫帽管(含2%EDTA-K2抗凝剂)收集血标本后，立即将试管轻轻颠倒5～6次，使血液与抗凝剂充分混匀；哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.0(2)在4℃条件下在3000rpm离心10分钟；(3)将上层血浆分装入500ul冻存管中，每管250ul，分装10管，余血装入500ul冻存管中，每管500ul，分装4管2.3.3标本的储存将分装完成后的冻存管放入相对应的冻存盒中，-80℃冰箱保存。实验室工作流程5ml促凝管（红色管）4℃静置1小时后3000转/分、4℃、10分钟离心后血液分为2层↓↘上层是淡黄色血浆下层为红色沉淀物约占60%约占40%↓↓将上层血清吸出丢弃↓分装到10管印有条形码或者标记有患者姓名、性别、年龄、病案号的冻存管中200ul/管分装后放入↓↓标明血清及盒号的冻存盒中↓↓-80℃冷冻保存5ml抗凝管（紫色管）3000转/分、4℃、10分钟离心后血液分为2层↙↘上层是淡黄色血浆下层为红色血细胞哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.0约占60%约占40%↓↓将上层血浆吸出将下层的血细胞吸出↓↓分装10管印有条形码或者标记有分装4管印有条形码或者标记有患者姓名、性别、年龄、病案号患者姓名、性别、年龄、病案号的冻存管中200ul/管的冻存管中500ul/管分装后放入↓↓标明血浆、全血及盒号的冻存盒中↓↓-80℃冷冻保存2.4数据备份保存血标本后填写采样记录表（详见附件）签上姓名和日期，并在电脑中记录。3研究样本的编码(1)根据研究需要设定编码规则，或直接使用预制编码冻存管来保存研究样本；(2)确保针对每一个研究样本，其编码唯一，代表特定的临床类型和流行病资料。使用专一性和统一格式的代码进行标本处理，储存和分类。4研究样本的入库(1)打开研究电脑，安装条码枪。(2)按需要入库的研究样本数量，准备足够的冻存盒。每个冻存盒，都需要在特定位置写上“冰箱号—架子号—冻存盒号”，如：“15-2-2”表示冻存盒存放哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.0在15号冰箱中第2个架子的第2号格。(3)点击启动研究样本库软件系统，登录页面。(4)使用条码枪扫描冻存管管身编号，开始录入样本。根据屏幕上的提示放入冻存盒中相对应的小孔中。(5)以接收研究样本盘点数为依据，确认需要入库的研究样本的相关信息，制作入库清单。内容包括：研究样本种类，入库样本数量、研究样本所属时期、存库冰箱位置。(6)装满一个冻存盒后，盖紧。把装好研究样本的冻存盒按编号放到铁架子中，在铁架子中间写上编号“冰箱号-架子号”，如：“10-4”。(7)把放有冻存盒的铁架子放入指定冰箱的指定位置上。及时归入-80°C冰箱中保存。5研究样本的出库5.1样本出库根据检测或科研需要，制定实验计划，从冰箱中取出已经完成入库的研究样本。(1)在研究电脑上打开研究样本库软件系统，登录页面。(2)根据软件页面要求，键入需要出库的研究样本编号或所在的冻存盒号，点击“出库”，完成出库工作。5.1样本出库完成科研实验或临床检测之后，部分研究样本需要二次入库。过程与首次入库相同，用条码枪扫描血样管上的条码后，屏幕上会出现此样本应该放入的“冰箱号-架子号-盒子号-孔号”，按照提示把研究样本放入对应的位置，点击“入库”，完成二次入库工作。6.其他(1)入库或出库研究样本时，每次应及时更新数据库的资料并留下取用记录。哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.0(2)利用数据管理系统整合与生物样本相关联的研究资料，如标本的保存时间，提供样本患者的随访情况，联系方式及样本使用等问题。(3)严格保护提供样本患者的健康信息，保障个人隐私权力不受侵犯。原则上，同一批标本应指定一人进行统一随访和联系，未经授权的人员不得与样本提供者进行联系。7.标本库样本相关数据的使用为确保能及时、公正、合理的使用生物样本和相关临床资料，课题研究者应向标本库提出申请，包括以下程序：(1)研究计划的科学性评价；(2)研究者签署有关生物样本和相关资料的保密协议；(3)样本转运协议；(4)研究符合伦理和法规，并附伦理委员会审核意见书；(5)填写《标本出库记录表》，由标本所有者和保管者签字；(6)按照双方约定，在文章发表、专利和成果奖励申请时的作者排序。哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.0样本出库审批课题名称课题负责人联系方式样本使用人联系方式样本收集时间样本使用数量样本用途（实验目的及方法）样本来源明细（样本种类、样本编号）实验室主任意见签字实验室常务主任意见签字实验室秘书意见签字样本库负责人意见签字☆样本为不可再生的宝贵资源，请各位妥善保管、合理使用。☆使用本库样本所得数据知识产权部分或全部归属于哈医大二院心内科。哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.0标本二次入库登记表日期二次入库（对应划√）样本类型样本名称样本编号入库人签名备注哈医大二院心血管疾病临床数据和标本资源库建设SOP版本号1.0姓名：___________病案号：___________科室：____________入院日期：___________样本捐献知情同意书尊敬的患者:感谢您对我院的信任，并祝您早日恢复健康！目前，心血管疾病的病因和发病机理不明，缺乏有效的治疗手段。作为全国先进的心血管疾病诊疗基地，进一步提高疾病的诊治水平是我们的义务。为了更多患者的健康，在您的诊疗过程中，出于诊治疾病需要化验的常规用量的血液、尿液、心包积液及手术的组织样本在诊断完成之后，可能被用于心血管疾病的研究，以提高今后对该类疾病的诊治水平，使用这些样本进行研究不会使您受到伤害。样本是战略性收集，将会被用于心血管疾病治疗相关的生物医药研究、寻找有助于判断预后好坏的因子等。因此，一些与临床疾病治疗相关的资料也同样被收集，有关您的所有医疗信息将是保密的。您有权不签署该知情同意书，您也有权在任何时候撤回您已经签署的同意书。无论您是否同意，均不会影响您在院期间的诊疗活动，也不会影响您和医护人员的关系。如果您同意，请签字。非常感谢您对心血管疾病研究做出的贡献，并表示崇高的敬意！我已经详细阅读以上条款，同意。病人/监护人/委托人签名：____________与患者关系：____________联系方式：____________日期：____________医生签名：_____________日期：____________