血型鉴定常见的疑难问题分析及处理

2020/5/231血型鉴定常见的疑难问题分析及处理2020/5/232概述随着输血医学的发展，输血安全问题日益引起各方面的关注，输血安全主要体现在两方面内容，一是经血传播疾病问题，二是血液免疫学方面的问题即血型血清方面的问题。2020/5/233概述血型血清学不同于一般的临床医学检验，有其自身特点。一般临床医学检验的工作流程十分明了，即接受临床医生的申请，按各项检验的操作规程完成其申请内容并反馈结果。而血型血清学方面的检查则与此有很大的不同，临床医生及各医院输血科向血站和血液中心血型参比实验室提出的检测申请不外有以下几种情况:2020/5/234血型参比实验室涉及的检测内容血型鉴定困难交叉配血困难输血反应原因分析其它：如母婴血型不合新生儿溶血病检测、coombs试验、血小板抗体检测等。2020/5/235ABO血型常规定型方法玻片法、纸片法试管法微量板法微柱凝集法2020/5/236疑难血型鉴定常用的辅助实验吸收试验放散试验（常用热放散）DTT（二硫苏糖醇）处理自身凝集红细胞唾液血型物质测定（中和试验）分子生物学技术进行基因型检测2020/5/237血型血清学的工作特点鉴定技术因不同情况而异，没有一个固定的格式，因此在试验过程中随时分析试验结果，选择最有效的方案(程序)是必要的。血型参比实验室必须全面分析病历情况，有选择的运用相应的实验手段来解决问题，另外在接受检测申请时，还应详细了解患者的既往史-性别、年龄、民族、临床诊断及临床症状和患者的输血史和用药史，如女性已婚患者还应询问其妊娠史。这些都对解决问题至关重要。2020/5/238血型血清学的工作特点例如：对于白血病患者，应考虑到由于疾病原因而引起血型抗原减弱的可能性；对消化系统的疾病的患者应考虑到由于产生“类B物质”而导致血型鉴定错误的可能性；对于多次输血的患者应考虑其体内产生免疫性抗体的可能性，等等。2020/5/239疑难血型鉴定共同特点:正反定型不。2020/5/2310ABO血型正反定型不符及其原因1.技术和管理错误2.正定型---红细胞自身相关问题3.反定型---血清自身相关问题2020/5/2311一、技术和管理错误（1）标本或试剂搞错，造成假阳性或假阴性结果。（2）器材不洁产生假阳性结果。（3）试剂污染或失效产生假阳性或假阴性结果。（4）离心过度或不足，产生假阳性或假阴性结果。2020/5/2313二、正定型---红细胞自身相关问题1.红细胞致敏直接抗球蛋白试验阳性的红细胞（如自身免疫性溶血性贫血患者的红细胞）在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集，产生假阳性结果。2.异常基因型ABO亚型的弱抗原常规方法难以检出，产生假阴性结果。3.Cis-AB型（顺式AB型）指从父母的一方同时得到A和B基因在一条染色体上，而另一条染色体上是从父母中另一方来的O基因。顺式AB细胞的B抗原较弱，类似B3亚型。2020/5/2314二、正定型---红细胞自身相关问题4.嵌合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集”现象。也可见于ABO不同型的骨髓移植术后。真正的嵌合体非常少见，可出现于双胞胎，在胚胎期由于血管的吻合使得2个胎儿的血液发生混合，2种血液都被机体认做自我，不产生抗体。人工嵌合状态可出现于输血后（如O型红细胞输给A或B型人），骨髓移植术后，交换输血及母体、胎儿出血。2020/5/2315二、正定型---红细胞自身相关问题5.疾病因素导致抗原减弱常见的如白血病、何杰金病、10号染色体转位、红细胞系统极度增生如海洋性贫血等病人ABO血型抗原可受到暂时抑制，抗原减弱检出困难。红细胞ABO抗原减弱与病程有关，病情缓解时抗原性会恢复。6.红细胞多凝集现象当病人感染细菌或病毒后，病毒或细菌产生的酶使红细胞上掩蔽的T抗原暴露激活，由于正常人血清中都含有抗-T抗体，因此可与正常人血清产生凝集反应，正定型试验假阳性。2020/5/2316二、正定型---红细胞自身相关问题7.获得性类B由于革兰氏阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。(肠梗阻、结肠、直肠癌或其他下消化道疾病时肠壁通透性增加，细菌多糖入血，使A型患者出现获得性类B现象)8.可溶性血型物质增多胃或胰腺恶性肿瘤患者血清中可能含有过多的可溶性血型物质，这些物质中和抗A（B）血清从而影响正定型结果。2020/5/2317二、正定型---红细胞自身相关问题9.红细胞发生自凝现象患者血清中的高效价自身冷凝集素使红细胞发生凝集。10.近期输血曾异型输血，使病人血液标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝集”现象。2020/5/2318三、反定型---血清自身相关问题1.血浆置换治疗后近期内进行大量的血浆置换治疗，影响抗体效价，造成反定型困难。2.异常的血浆蛋白病人血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例和高浓度的纤维蛋白原等能导致缗钱状形成，造成假凝集现象，多见于如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、何杰金淋巴瘤、严重的肝病等患者。3.高分子聚合物的影响血浆增容剂（葡聚糖、PVP等）也会引起缗钱状凝集导致假阳性结果。2020/5/2319三、反定型---血清自身相关问题4.不规则抗体或自身冷凝集素的存在受检者血浆中含有ABO血型抗体以外的IgM类不规则抗体与试剂A、B、O细胞上的相应抗原起反应。5.低丙种球蛋白血症低丙种球蛋白血症病例(如白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制剂的患者、先天丙种球蛋白缺乏的患者、免疫缺陷的患者)可能会因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应。2020/5/2320三、反定型---血清自身相关问题6.年龄因素在未产生自己抗体的婴儿、由母亲被动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现不见凝集或仅见弱凝集反应等异常结果。7.骨髓移植术后ABO不同型骨髓移植患者术后。8.纤维蛋白原的影响使用血浆或凝固不完全的血清会形成很小的纤维蛋白凝集包裹的红细胞凝块。2020/5/2321小结（一）一、红细胞抗原增多（额外的反应）的原因红细胞致敏：直接抗人球蛋白试验阳性。红细胞多凝集现象红细胞发生自凝现象获得性类B其它：近期异型输血、嵌合体血型二、红细胞抗原减弱的原因异常基因型（ABO亚型等）Cis-AB型（顺式AB型）疾病因素导致抗原减弱（常见于白血型等血液病患者）可溶性血型物质增多（常见于胃或胰腺恶性肿瘤患者）2020/5/2322小结（二）三、血型抗体增多（额外的反应）的原因异常的血浆蛋白（串钱状假凝集）：多见于如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、何杰金淋巴瘤、严重的肝病等患者。高分子聚合物的影响：血浆增容剂（葡聚糖、PVP等）也会引起缗钱状凝集导致假阳性结果。不规则抗体或自身冷凝集素的存在纤维蛋白原的影响2020/5/2323小结（三）四、血型抗体减弱的原因血浆置换治疗后低丙种球蛋白血症年龄因素：婴儿、老年人抗体水平低。骨髓移植术后2020/5/2324正反定型不符一般处理程序一、询问、查阅病史患者的年齡患者的病史患者的近期输血史患者的近期用药史患者是否进行了骨髓移植患者以前的血型患者是否进行过血浆置换术2020/5/2325正反定型不符一般处理程序二、使用试管法重做试验并判断可能的原因试管法定型的优点1.可以反复离心看结果。2.可以随意延长抗原抗体反应时间，可以改变反应温度（4℃、37℃孵育），有利于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集素的干扰。3.可以观察红细胞混合外观现象。4.可以观察红细胞溶血现象。2020/5/2326ABO定型常见问题的解决方法ABO亚型*正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H*反定：A1c、A2c、Bc、Oc、自身对照*正反定型在不同温度下反应并比较凝集强度的变化*吸收放散试验*唾液血型物质检测*有条件者可作家系调查或PCR检测血型基因2020/5/23272020/5/2328ABO定型常见问题的解决方法A、B抗原减弱*延长孵育时间、4℃孵育*酶处理红细胞*吸收放散试验*唾液血型物质检测*既往血型调查2020/5/2329ABO定型常见问题的解决方法抗体减弱*延长孵育时间、4℃孵育*酶处理试剂红细胞*既往血型调查*免疫球蛋白水平测定2020/5/2330ABO定型常见问题的解决方法冷自身抗体*将血清和红细胞分别在37孵育后再混合*用37℃温盐水洗涤红细胞、45℃热放散3分钟*巯基试剂(DTT)处理红细胞*自身吸收去除血清中的自身冷抗体2020/5/2331ABO定型常见问题的解决方法室温反应的同种抗体*用谱细胞做抗体鉴定*选择没有相应抗原的A、B细胞做反定型2020/5/2332ABO定型常见问题的解决方法获得性B红细胞*询问病史*酸化抗-B血清（pH6.0)*唾液型物质检测*家系调查证明没有遗传基础2020/5/2334ABO定型常见问题的解决方法致敏红细胞造成的假阳性洗涤后的压积受检红细胞于56℃水浴放散10分钟，直至直抗试验阳性结果明显减弱或消失，再次洗涤放散后的细胞用于正定型试验。2020/5/2335ABO定型常见问题的解决方法*缗钱状凝集：洗涤红细胞、盐水替代试验*前带现象：稀释血清后再做试验2020/5/2336疑难血型举例2020/5/23372020/5/23382020/5/23392020/5/23402020/5/23412020/5/23422020/5/23432020/5/23442020/5/23452020/5/23462020/5/23472020/5/2352