环境监控2-新版GMP

LOGO环境监测问题1、环境监测需要关注哪些方面？2、无菌制剂的B+A的区域，浮游菌和沉降菌都要做么？3、沉降菌、浮游菌动态监测如何开展（取样点、取样时间、取样位置）？4、动态测试时，沉降碟放在地面上，作为QA怎么认为？5、悬浮粒子监测中，等动力学取样的概念？如何确认？6、如何开展A级区单向流的确认？内容洁净区环境监测趋势分析和质量回顾环境监测结果超标案例分析一、洁净区环境监测洁净区洁净级别及标准洁净区的验证和监测洁净区环境监测方案环境监测仪器、设备、培养基1、洁净级别及标准-悬浮粒子注：1、摘自附录1无菌药品第九条，测试方法可参照ISO14644-1《洁净间以及相关环境控制第1部分：空气洁净度级别》2、A级洁净区空气悬浮粒子的级别为ISO4.8，以≥5.0μm的悬浮粒子为限度标准；B洁净区（静态）的空气悬浮粒子的级别为ISO5，同时包括两种粒径的悬浮粒子；C级洁净区（静、动态），悬浮粒子的级别分别为ISO7和ISO8；D级洁净区（静态）悬浮粒子的级别为ISO8。洁净度级别悬浮粒子最大允许数/米3静态动态≥0.5μm≥5.0μm≥0.5μm≥5.0μmA（1）352020352020B3520293520002900C3520002900352000029000D352000029000不作规定不作规定1、洁净级别及标准-微生物注：1、A区的微生物限度，对于B+A时可以完全执行；但对于C+A时，需要适当考虑，因为不是无菌区，所有物料、器具等是非无菌状态，所以接触蝶、5指手套等微生物难以连续符合要求，需要灵活处理。2、单个沉降碟的暴露时间可少于4小时，同一位置使用多个沉降碟连续监测并累积计数。级别浮游菌CFU/m3沉降碟（90mm）CFU/4小时接触碟（55mm）CFU/碟5指手套CFU/手套A1111B10555C1005025－D20010050－需要关注的技术标准-ISO14644-1《洁净间以及相关环境控制第1部分：空气洁净度级别》-ISO14698-1《洁净间以及相关环境控制第1部分：微生物控制》-医药工业洁净厂房设计规范GB50457-2008-洁净室施工及验收规范GB50591-2010-医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌、沉降菌的测试方法GB/T16292/3/4-2010注：GB/T16292/3/4-2010是参考ISO14644-1、ISO14698-1、JGJ71-1990《洁净室施工及验收规范》而制定的2、洁净区验证和监测-悬浮粒子A级区确认时的采样量不少于1m3采用等动力学的取样头*-A级：涵盖关键操作的全过程，包括设备组装；监测频率、取样量，及时发现人为干预、偶发事件及任何系统的破坏-B级：类似于A级区，采样频率、采样量可以调整-C级区：质量风险管理原则确定-D级区：一般不作要求，（必要时）-自净时间：15-20分钟，静态（指导值）悬浮粒子的要求A级区级别确认A/B级动态监测几点说明何为等动力学采样等动力学采样头又称等动力(学)采样。一种采集流动介质中样品的采样方法。采集气流中的悬浮颗粒物或流动水中的水样时，为使所采集的样品有代表性，必须使进入采样器的气流或水流速度与采样点附近的气流或水流的速度相同。这样才能使采集到的悬浮颗粒物浓度或水样中的组分与实际气流或水流中的完全一致。常用于采集烟道气中悬浮颗粒物(尘粒)和流动水体中的水样。在无菌检查附录中明确显示只有在单向流系统中才会采用等动力学采样头，大家知道在悬浮粒子计数器在进行采集的过程中，是通过气泵抽气并进行检测，不同仪器有自身单位时间内的采样量。为保证在进行采样过程中不造成单向流系统的流型发生紊乱，所以采用等动力学采样头。如果计算一个采样头是不是等动力学采样头的计算方法如下：悬浮粒子计数器单位时间的抽气量：V（ml/min）单向流的风速：45cm/s(0.45m/s)v=3.14*R^0.5*60*45计算等动力学采样头的半径。如果仪器的每分钟的采样量为28.3L等动力学采样头半径约为1.8cm。固定在线监测-等动力取样头示例A级区级别确认-悬浮粒子示例取样量取样点位置取样点数ISO14644-1B.4.2节有明确的采样量的计算公式：采样量（升）=(20/级别中最大粒子限度）×1000A级采样量=(20/20)×1000=1米3从上式中可见，级别要求越低，取样量就越小均匀分布：详见GB/T16292-2010附录A高度：80cm-150cm*取样点数：B.1.1公式NL=A，A为洁净区面积，例如10米×5米的区域，取样点应为7*（取整）GB/T16292-2010最少采样点数目表*取样量取样点数取样点位置注意：取样量、取样点数仅指在洁净级别确认时采用悬浮粒子采样点数目及布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中,某局部区域过于稀疏布置同上静态测试动态测试采样点数目不得少于最少采样点数目应根据产品的生产及工艺关键操作区设置数目最少采样点数目表面积m2洁净度级别10010000100000300000＜102~3222≥10~＜204222≥20~＜408222≥40~＜10016422注：1、大于100m2的洁净区功能间不再列出，很少见。2、对于100级的单向流洁净室（区），包括100级洁净工作台，面积指的是送风口表面积；对于10000级以上的非单向流洁净室（区），面积指的是房间面积。3、A/B级参照上述100级，C级参照10000级，D级参照100000级。悬浮粒子采样点布置规则1、平面采样点布置图:悬浮粒子采样点布置规则2、单向流区域:洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气流方向的工作面上，气流形式可参考图2.1、2.2。图2.1水平单向流气流形式图2.2垂直单向流气流形式悬浮粒子采样点次数限定GB/T16292-20105.4.2描述：对任何小洁净室（区）或局部空气净化区域，采样点的数目不得少于2个，总采样次数不得少于5次。每个采样点的采样次数可以多于1次，且不同采样点的采样次数可以不同。悬浮粒子数的检查SOP常规做法：一个房间只有2个取样点，每个取样点取样3次；一个房间取样点超过2个的，每个取样点取样2次。2、洁净区验证和监测-微生物沉降菌法--被动法定量空气浮游菌采样法--主动法表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）表面取样法（接触碟法）微生物监测方法浮游菌沉降菌环境表面人员1、平面采样点布置图:2、洁净区验证和监测-微生物ThemeGalleryisaDesignDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.Ⅰ空气沉降菌、浮游菌监测沉降菌法--被动法•单个沉降碟在空气中的暴露时间4小时*•只能给出定性和半定量的数据•应结合空气浮游菌的数据，对沉降碟的结果进行评价定量空气浮游菌采样法--主动法•撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪•应取一定体积的空气（取样体积应有代表性）•仪器应经过校验2、洁净区验证和监测-微生物ThemeGalleryisaDesignDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.Ⅱ环境表面监测：表面取样法接触蝶法：适用于平整表面取样面积25cm2培养基略有凸起，高于碟子边缘，便于取样培养基中应含有中和剂/保护剂棉签擦拭法：适用于不规则表面取样面积~25cm2定性或定量表面样应在无菌操作结束时取以最大限度地降低无菌制造过程中关键表面污染的风险2、洁净区验证和监测-微生物ThemeGalleryisaDesignDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.Ⅲ人员监测表面取样法（接触碟法），取样时间一般为：工作结束，离开洁净区前取样处理异常情况后（取样后重新更衣或更换手套）生产过程中随时监测特别注意：不得在刚消毒过后取样2、洁净区验证和监测-微生物ThemeGalleryisaDesignDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.无菌区人员更衣确认和监测图例每个手套(5只手指)胸口处衣帽结合处帽兜额头处靴子与工作裤接口处前臂2、洁净区验证和监测-微生物ThemeGalleryisaDesignDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.无菌区人员监测合格标准其它事项①每个受训者必须经过3次更衣试验确认合格后才能进入无菌操作区。②资格确认合格的操作员工每年需重复一次更衣试验。③当有已确认合格的人员有违反更衣程序趋向时，须重复l～3次更衣试验。④连续3次监测不合格人员，取消相关资质，需重新培训和进行更衣验证。⑤在连续10次监测中，如有4次不合格的人员，取消相关资质，需重新培训和进行更衣验证。采样点参考标准（CFU·皿）采样点参考标准（CFU·皿）手套≤3口罩≤10胸口≤5前额≤5前臂≤5靴子—裤子接合处≤5浮游菌测试需要注意的问题最少采样量洁净度别采样量L/次100级100010000级500100000级100300000级1001、最少采样量-GB/T16293-20105.4.2最少采样量-A/B/C/D级参照，供参考最少采样量洁净度别采样量L/次A级1000B级1000C级500D级100浮游菌测试需要注意的问题2、培养基选择---GB/T16293-20104.7大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或其他用户认可并经验证了的培养基*3、培养---GB/T16293-20104.10（1）培养皿倒置于培养箱中培养（2）采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿采样后，在30～35℃培养箱中培养，时间不少于２d；采用沙氏培养基（SDA）配制的培养皿经采样后，在20～25℃培养箱中培养，时间不少于5d。*GoodQuestion与2010版药典微生物限度中的培养方法为何不一样，比如霉菌、酵母菌培养温度、细菌的培养时间。浮游菌测试需要注意的问题4、采样点布置（1）浮游菌的采样点位置可参照GB/T16292-2010（2）采样点离地面0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。（3）送风口采样点位置离开送风面30cm左右。（4）采样点布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于稀疏，应根据具体车间的平面图、房间面积、关键操作点，来确定采样点位置。（5）采样点编号管理，同一房间内不同洁净级别（无菌灌装区B+A区域）编号不得重复。比如采用FY+房间号-两位数进行编号，质量检测中心313-01-039房间需要取两个点：FY313-01-039-01、FY313-01-039-02。浮游菌测试SOP沉降菌测试需要注意的问题洁净度别最少培养皿数（Φ90mm）100级1410000级2100000级2300000级21、最少培养皿数-GB/T16294-20105.4.2在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数最少采样量-A/B/C/D级参照，供参考洁净度别最少培养皿数（Φ90mm）A级14B级14C级2D级2沉降菌测试需要注意的问题2、测试时间-GB/T16294-20104.4.3要求：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间不大于4h。理解：动态测试时,生产时间小于4h培养皿暴露时间以实际生产时间计，当生产时间大于4h培养皿暴露时间4h（最低标准）。动态测试时，则需记录生产开始时间及测试时间。沉降菌监测SOP3、环境监测方案关键项目悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物取样计划的影响因素取样点的选择产品类型、生产过程、设施/工艺设计、生产批次、人为干扰、环境监测历史数据等主要取决于洁净室的设计和生产要求•洁净区应制定系统的环境监测方案，包括动态监测和静态监测环境监控整体要求洁净区监测年度洁净级别确认日常环境监测动态监测静态监测无菌生产区A/B最终灭菌C级的主要功能间C级区域D级区域美国药典微生物监测频率取样区域取样频