甲醛含量的测定

1甲醛含量的测定一、仪器与设备：分光光度计，精密天平，恒温水浴锅，量瓶（50ml、100ml），刻度吸管（0.5ml、2ml、5ml），移液管（5ml、25ml），量筒，试管，锥形瓶（250ml5个，100ml），称量瓶，高温炉，酸式滴定管（50ml，校正曲线或校正值），干燥器（内装变色硅胶），玻璃漏斗（3个），恒温水浴锅。二、试剂与溶液：吐温80（AR），乙醇（AR），醋酸（AR），醋酸铵（AR），乙酰丙酮（AR），甲醛溶液（40％）（AR），NaOH滴定液(1mol/L)，盐酸滴定液(1mol/L)，K2MnO4，基准草酸钠，硫酸，H2O2试液（AR），溴麝香草酚篮指示液，甲基红－溴甲酚绿混合指示液，酚酞指示液，基准无水Na2CO3。三、试剂和指示剂配制：⑴甲基红－溴甲酚绿混合指示液：①取甲基红0.1g置于100ml乙醇溶液中，摇匀，得0.1％甲基红的乙醇溶液；②取溴甲酚绿0.2g置于100ml乙醇溶液中，摇匀，得0.2％溴甲酚绿的乙醇溶液；③取0.1％甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2％溴甲酚绿的乙醇溶液30ml，摇匀，得甲基红－溴甲酚绿混合指示液。⑵酚酞指示液：取酚酞1g置于100ml乙醇溶液中，摇匀。⑶NaOH滴定液(1mol/L)：①取NaOH适量，加水振荡使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。取澄清NaOH饱和溶液56ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀；②NaOH滴定液的标定：取在105℃干燥2～3h至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾，精密称量6g，加新沸过的冷水50ml，振摇，使其尽量溶解，加酚酞指示液2滴，用NaOH滴定液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1mlNaOH滴定液相对于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度即得。⑷盐酸滴定液(1mol/L)：①取盐酸90ml，加水适量使成1000ml，摇匀，即得；②用NaOH滴定液滴定，处理使其F值由1.05～1.10变为0.95～1.05(滴定液要澄清，置玻璃瓶中贮存)；③标定：a、无水Na2CO3干燥前应用乳钵研细，分别置于3个称量瓶中，每个称量瓶中称入1.5g样品，厚度0.5cm；b、置高温炉内，分开排列，在270～300℃下干燥2h，闭塞，置装有硅胶的干燥器中，冷却30min(夏天温度高时，可放置40min)，称供试品与称量瓶合重，准确至0.0001g，记录数值；c、继续在270～300℃下干燥1h，取出，在干燥器中放置30min，称量，记录数值，若两次差值在0.3mg以上，则重复c操作，直至差值在0.3mg以下；d、将供试品迅速倾入锥形瓶中，再称量空称量瓶重量；e、加水50ml使溶解，加甲基红－溴甲酚绿混合指示液10滴，用盐酸滴定液(1mol/L)滴定至溶液由绿色转变为紫红色，置电炉上煮沸2min，冷却至室温，继续滴定溶液由绿色变成暗紫色。每1mlHcl滴定液相当于53.00mg无水Na2CO3。计算公式为：F=W/(V×T)×100％〔W为Na2CO3用量，mg；V为Hcl滴定液用量；T=53.00〕Na2CO3+2HCl=2NaCl+H2O+CO2⑸(酸性)高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)：①取K2MnO43.2g置1000ml水中，煮沸15分钟，密塞，静置2日以上，用垂熔玻璃滤器或滤膜（1.2µm）滤过，摇匀，即得；②标定：取在105℃干燥至恒重的基准草酸钠约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水250ml与硫酸10ml，搅拌使溶解，自滴定管中迅速加入本液约25ml，待褪色后，水浴加热至65℃，继续滴定至溶液显微红色并保持30秒钟不褪；当滴定终了时，溶液温度应不低于55℃，每1ml高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)相当于6.70mg的草酸钠。根据本液的消耗量与草酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得；③贮藏：置玻璃塞的棕色玻瓶中，密闭保存。2MnO4－+5C2O42－+16H＋=2Mn2＋+10CO2↑+8H2O要点：①温度：90℃草酸分解（分解反应受酸、热催化）。60℃反应速度缓慢。②酸度：[H+]=0.5～1.0，酸度低则生成MnO2沉淀；酸度高则草酸分解。③滴定速度：开始要慢，第一滴褪色后加第二滴，以后可以逐渐加快Mn2+催化。⑹稀硫酸：取硫酸57ml，加水稀释至1000ml，即得。本液含H2SO4应为9.5％～10.5％。2⑺H2O2试液：①取浓H2O2溶液加水稀释成3％的溶液；②H2O2溶液(AR)(含量30％)含量测定：精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，加稀硫酸20ml，用高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)滴定，只要颜色发生变化即为终点。每1ml的K2MnO4滴定液(0.02mol/L)相当于1.701mg的H2O2。要点：在稀硫酸溶液中，在室温条件下用高锰酸钾法测定过氧化氢的含量，其反应式为：5H2O2+2MnO4-+6H+＝2Mn2++5O2+8H2O⑻溴麝香草酚篮指示液：取溴麝香草酚篮0.1g，加0.05mol/LNaOH溶液3.2ml，使溶解，再加水稀释至200ml，即得。⑼20％吐温80乙醇溶液：取吐温8020ml，加乙醇使成100ml，即得。⑽醋酸－醋酸铵缓冲液（PH=6.25）：①醋酸（AR）12.9ml加水至100ml，即得醋酸液。②醋酸铵（AR）173.4g，加水至100ml，使溶解，即得醋酸铵液。③醋酸液40ml与醋酸铵液1000ml混合，置冷暗处保存。⑾乙酰丙酮试液：乙酰丙酮（AR）7ml，加乙醇14ml混合，置冷暗处保存。四、甲醛溶液（40％、AR）含量的测定：⑴将3份甲醛溶液置于3个小滴瓶中，精密称定滴瓶加甲醛的重量，向锥形瓶中滴入约38～40滴（相当于1.5ml≈1.6g）甲醛，再精密称取滴瓶加甲醛的重量；⑵加水10ml，加过氧化氢试液25ml与溴麝香草酚篮指示液2滴，滴加NaOH滴定液(1mol/L)至溶液显蓝色；⑶再精密加入NaOH滴定液(1mol/L)25ml，瓶口置一玻璃小漏斗，置水浴（98～100℃）上加热15min，不时振荡；⑷冷却，用水洗涤漏斗，加溴麝香草酚篮指示液2滴，用盐酸滴定液滴定至溶液显黄色；⑸空白试验（2份）：①、精密量取NaOH滴定液(1mol/L)25ml，置锥形瓶中，加水10ml，过氧化氢试液25ml与溴麝香草酚篮指示液2滴；②、用盐酸滴定液滴定至溶液显黄色；⑹计算：×100％（V空为两次空白溶液消耗盐酸滴定液ml数的平均值；V为供试品溶液消耗盐酸滴定液的毫升数；F为校正因子；T=30.03；W为样品重）⑺相对偏差：×100%相对偏差不得超过0.5％。五、对照品溶液的制备：取甲醛溶液精密称定（g），置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含甲醛1.0mg的溶液；精密量取上述溶液5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，若被测样品为油乳剂疫苗，则精密量取上述每1ml含甲醛1.0mg的溶液5ml，置50ml量瓶中，加20％吐温80乙醇溶液10ml，再加水至刻度，摇匀，即得。精密称定甲醛的量：W=（×100）mg六、供试品溶液的制备：⑴油乳剂疫苗：用5ml刻度吸管量取被测样品5ml，置50ml量瓶中，用20％吐温80乙醇溶液10ml，分数次洗涤吸管，洗液并入50ml量瓶中，加水稀释至刻度，强烈振摇，静置，分取下层清液备用，如下层不澄清，需经过滤弃去初滤液，取续滤液，即得。⑵其他疫苗：用5ml刻度吸管量取被测样品5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，如不澄清（同上）。七、不同品种灭活所用甲醛的数量各不相同，细菌加甲醛0.7％，病毒加甲醛0.3％，若为细菌毒液则将对照品溶液和供试品溶液各稀释7倍；若为病毒毒液则将对照品溶液和供试品溶液各稀释3T×F×（V空—V）W1.0mgP％∣A－B∣A＋B3供试品溶液的吸收度对照品溶液的吸收度倍。八、检查法：用0.5ml刻度吸管量取对照品溶液和供试品溶液各0.5ml，分别加醋酸－醋酸铵缓冲液10ml，乙酰丙酮试液10ml，摇匀，置60℃水浴15min（此时溶液呈黄色），冷水冷却5min，放置20min，照分光光度计，在410nm波长处测定吸收度。计算：甲醛溶液(40％)含量％(g／ml)=0.25××100%注意：A对需折算，方法为要求取0.2688g（含量为37.2％），若实际称取量为0.2823g，置100ml量瓶中，则该对照液浓度为×=0.1050mg/ml，吸收度为0.753，需折算为=0.717八、注意：⑴在精密称取邻苯二甲酸氢钾时应多称点，否则干燥后会低于所需要的质量，精确到小数点后四位；⑵邻苯二甲酸氢钾应在105℃干烤箱中打开称量瓶盖（斜放在称量瓶口）干烤2～3h之后，戴上手套取出放在装有变色硅胶的干燥器中，冷却30～40min，至室温称重；再放回干烤箱中干烤0.5～1h后，再放到干燥器中冷却30～40min至室温，再称重，两次差值小于0.0003g，即为合格；⑶在做平行样中需做4～6个平行样，以备最后标定时有误差。⑷高温炉的使用方法：称量瓶分开放置并开盖，温度调至低于所需最小温度30℃左右，高温炉自动升温，至红灯亮开始计时，2h之后，用钳子把称量瓶取出，立即放在干燥器中，冷却30至40min，精密称量，再次放在高温炉中，同上，干燥1h，同上，再称重，使差值小于0.3mg为止。记得称量瓶应该与放在高温炉第一次干燥时的位置相同，免得有差异。0.2823×37.2％×10001005500.753×0.10.1050