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家兔肠缺血/再灌注损伤Ischemia-reperfusionInjuryinRabbit(I/R)中南大学病理生理学教研室【理论复习】缺血再灌注损伤的定义缺血再灌注与缺血再灌注损伤的区别影响缺血再灌注损伤发生的因素缺血再灌注损伤的发生机制掌握缺血再灌注损伤模型的复制，比较缺血损伤和缺血再灌注损伤的区别观察缺血再灌注损伤的表现，理解缺血再灌注损伤发生的机制【目的要求】【实验动物】家兔（性别、体重）【实验设计原理】通过肠系膜上动脉结扎，即SMAO(SuperiorMesenteryArteryOcclusion)来阻断部分肠的血液供应一段时间后再恢复血流灌注，以复制肠缺血/再灌注损伤的动物模型，探讨缺血/再灌注损伤的发生机制Ⅰ组：持续缺血组结扎肠系膜上动脉2hⅡ组：再灌损伤组结扎肠系膜上动脉1h，再恢复血流1h【实验分组】【实验方法与步骤】1.称重2.全麻（耳缘静脉注射3%戊巴妥钠1ml/kg）★注意：从耳缘静脉的远心端开始注射，速度不宜太快，排尽气泡★麻醉效果：角膜反射基本消失，钳夹家兔大腿肌肉无反应3.仰卧固定（背部交叉）、备皮颈部正中（甲状软骨下缘→胸骨上切迹）腹部正中（剑突下1.5cm起向下5cm）★注意：平贴皮肤剪毛，勿拎起皮肤！4.颈部正中切口行动脉插管切口范围：颈部正中，甲状软骨下缘→胸骨上切迹，长约5cm左侧颈总动脉：胸骨舌骨肌与胸锁乳突肌之间深面的颈动脉鞘内，与气管平行，颜色鲜红、较细、触之有搏动感，长约2-3cm注意：（1）钝性分离（2）辨清颈A鞘内的血管神经（3）血管插管的总原则先结扎远心端，后夹闭近心端，剪口部位尽量靠近远心端，成45度角朝向近心端剪一小口，约为管径的1/3-2/3，插管方向朝向近心端，插入2-4cm【插管的注意事项】插管内事先应加入少量肝素以防凝血；排净气泡，记录前应关闭三通管插管易滑脱，应双线固定，结扎牢靠勿使插管尖端与血管壁形成角度，避免刺破血管5.腹部正中切口：腹正中线自剑突下1.5cm起向下做5cm切口※6.寻找肠系膜上动脉：将家兔腹腔内脏左移，找到齐右肾门对侧垂直向腹主动脉分出的肠系膜上动脉，穿双线备用，注意避免损伤其他血管（缺血再灌组结扎时注意垫橡皮管）1.移动内脏时，动作要轻柔2.分离肠系膜上A时需小心细致，结扎时用稍粗的线，不要使用锐利器械，以免损伤血管造成大出血3.肠系膜上A夹闭要彻底，恢复血流灌流（复流）要完全【注意】6.分组进行试验并记录以下指标【结果分析】①峰表示：结扎肠系膜上A→血管床容量↓→有效循环血量相对↑→BP↑压力感受器(+)减压反射→BP↓②峰表示：松开肠系膜上A→血管床容量↑→有效循环血量相对不足→BP↓升压反射（再灌损伤还未来得及发生）有时②峰不出现，BP↓直到死亡③血压持续下降，有再灌注损伤②③①血压时间Ⅰ组：结扎→BP↑→BP↓趋于平稳（相似于结扎前），肠壁粉红→暗红（淤血）肿胀（水肿），无出血点Ⅱ组：结扎→BP↑→BP↓趋于平稳（机体自身调节）→再灌→BP↓，肠壁暗红、水肿、出血点，BP低于正常1/2时→休克※Ⅰ、Ⅱ组比较说明：缺血损伤与I/R是不同的损伤过程，后者损伤更严重【结果不明显可能存在的问题】（1）实验过程中是否发生了大血？（2）缺血是否完全？（3）再灌注是否通畅？（4）记录结果时基线是否改变？（5）个体差异【I/R的发生机制】（1）活性氧的作用（2）钙超载（3）白细胞的作用（4）高能磷酸化合物生成障碍（1）尽早恢复血流灌流，缩短缺血时间（2）再灌注时遵循低压、低温、低钙的原则（3）清除活性氧（4）Ca2+拮抗剂的使用（5）减少白细胞的激活和炎性介质的释放（6）补充能量及促进能量生成（7）启动细胞内源性保护机制【如何防治I/R】1、实验目的2、实验动物3、简单的实验步骤4、列表记录所有组的实验指标5、实验讨论6、实验结论【实验报告要点】