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第1页共28页文件类型工艺规程版本号V3.0文件名称人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)生产工艺规程文件编号SC-STP-003编写人审核人批准人起草日期审核日期批准日期颁发部门质量管理部文件生效日期分发部门生产部颁发份数1份受控编号目录1．产品名称、剂型、规格、定义、组成及用途2．批准生产日期和批准文号3．依据4．生产工艺流程图和生产环境洁净区域划分5．液体配制6．操作过程及工艺条件7．工艺卫生和环境卫生(包括对净化级别要求)8．质量监控9．本产品工艺过程中所需的SOP名称及要求10．原辅材料、半成品和成品的质量标准和检验方法及贮存注意事项11．纯化水的制备和质量控制12．包装材料、标签、说明书质量标准和检验方法13．需要进行验证的关键工序及其工艺验证的具体要求14．包装要求、标签、说明书(附样本)与产品贮存方法及有效期15．主要原辅、包装材料消耗定额、能源消耗定额、收率、物料平衡的计算方法16．设备一览表：主要设备生产能力17．技术安全及劳动保护18.劳动组织、岗位定员与产品周期19．综合利用和三废处理人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)生产工艺规程DiagnosticKitforAntibodytoHumanImmunodeficiencyVirus(ELISA)第2页共28页1．产品名称、剂型、规格、定义、组成及用途中文名：人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)汉语拼音名：RenLeiMianYiQueXianBingDuKangTiZhenDuanShiJiHe(MeiLianMianYiFa)英文名：DiagnosticKitforAntibodytoHumanImmunodeficiencyVirus(ELISA)规格：96人份/盒；48人份/盒剂型:体外诊断试剂定义、组成及用途：本品系用纯化基因工程表达的人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）抗原和人类免疫缺陷病毒-2（HIV-2）人工合成肽抗原包被的微孔板和酶标记HIV-1/HIV-2及其他试剂配套组成，应用双抗原夹心法原理（ELISA）检测人血清或血浆中的抗HIV抗体。2．批准生产日期和批准文号批准生产日期：2003年2月20日。最后补充申请批准日期：2006年10月17日。批准文号：国药准字S20050065。3．依据：《中国生物制品规程》2000版、YBS00922005。4．生产工艺流程图和生产环境洁净区域划分人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)生产工艺流程图及区域划分(带*号为关键工序)原水软化第3页共28页5.液体配制本工艺适用于人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)产品的批量范围为10万人份至100万人份，各种配方按照基础标准配方放大。配制过程应于48小时内完成，过滤及灌装过程均应于8小时内完成。5.1包被液的配制5.1.1标准配方：按照一万人份理论量计。Na2CO31.59g一般生产区十万级洁净区一万级洁净区包被封闭板子*真空包装板子试剂盒组装*试剂盒入库阴、阳对照制备阴、阳对照过滤塑料瓶阴、阳对照分装*标稀、酶稀过滤组分溶液分装*粘贴标签PH/电导外观/EIA检验电导/PH检验区域划分及说明EIA检验清洁外包质控要点其它物料HIV抗原酶第4页共28页NaHCO32.93g纯化水800.00ml纯化水定容至1000.0ml5.1.2配制方法：按照标准配方内容准确称取Na2CO3、NaHCO3加纯化水800.00ml，搅拌使充分溶解后，使用数显酸度计测量液体的批PH值应在9.7～9.8范围内，使用纯化水定容至1000.00ml，混合均匀2～8℃保存备用,有效期14天。检验合格的包被缓冲液按照所用抗体的稀释比例添加HIV（gp41&gp36）抗原，顺时钟方向搅拌40分钟充分混合均匀后备用。5.2封闭液的配制5.2.1标准配方：按照一万人份理论量计。三羟甲基氨基甲烷18.17g浓盐酸适量蔗糖120.00g曲拉通X-1001.50ml酪蛋白钠6.00g胰蛋白胨30.00g纯化水2500.00ml纯化水定容至3000.00ml5.2.2配制方法：按照标准配方内容准确称取三羟甲基氨基甲烷18.17g，加纯化水2500.00ml，搅拌使充分溶解后，加入浓盐酸适量，搅拌均匀，使用数显酸度计测量液体的PH值为7.3～7.5，再将称量好的其他配方组分依次加入上述溶液中，充分搅拌溶解后，使用纯化水定容至3000.00ml，2～8℃保存备用,有效期14天。使用时每孔0.3ml。5.3酶结合物的配制5.3.1标准配方：按照一万人份理论量计。三羟甲基氨基甲烷7.27g浓盐酸适量氯化钠1.20g2-氯乙酰胺1.20g4-二甲基氨基安替吡啉1.20g第5页共28页对乙酰氨基酚1.20g月桂醇醚2.40g曲拉通X-1001.20ml酪蛋白钠12.00gBSA12.00gProclin3001.20ml硫酸庆大霉素（8万单位/支）0.96ml胭脂红0.02g纯化水1000.00ml纯化水定容至1200.00ml5.3.2配制方法：按照标准配方内容准确称取三羟甲基氨基甲烷7.27g，加纯化水1000.00ml，搅拌使充分溶解后，加入浓盐酸适量，搅拌均匀，使用数显酸度计测量液体的PH值为7.1～7.3，再将称量好的其他配方组分依次加入上述溶液中，充分搅拌溶解后，使用纯化水定容至1200.00ml，按《316LSGP150K型不锈钢钹式液体精密过滤器标准操作规程》进行除菌过滤，过滤后液体2～8℃保存备用。检验合格的酶结合物缓冲液按照所用抗体的稀释比例添加HIVAg-HRP，充分混合均匀后2～8℃保存备用，分装时，48人份，6.0ml/瓶，96人份，12.0ml/瓶,有效期18个月。5.4标本稀释液的配制：5.4.1标准配方：按照一万人份理论量计。氯化钠6.30g月桂醇醚1.75g酪蛋白钠3.50g溴甲酚紫0.035gProclin3000.35ml硫酸庆大霉素（8万单位/支）0.56ml纯化水600.00ml纯化水定容至700.00ml5.4.2配制方法：按照标准配方内容准确称取各试剂组分，加纯化水600.00ml，搅拌使充分溶解后定容至700.00ml，使用数显酸度计测量液体的批PH值为5.5～6.5，按《316LSGP150K型不锈钢钹式液体精密过滤器标准操作规程》进行除菌过滤后，2～8℃保存备用。第6页共28页检验合格的标本稀释液分装时，48人份，4.0ml/瓶，96人份，7.0ml/瓶,有效期18个月。5.5HIV阴性对照5.5.1标准配方：按照一万人份理论量计。Na2HPO4·12H2O0.58gNaH2PO4·2H2O0.059gNaCl0.90gProclin3000.20ml纯化水60.00ml灭活HIV阴性血清20.0ml纯化水定容至100.00ml5.5.2配制方法：按照标准配方内容准确称取除灭活HIV阴性血清外其他各组分，加入纯化水60.00ml搅拌充分溶解后，再将量好灭活HIV阴性血清20.00ml加入到上述溶液中，用纯化水定容至100.00ml，混合均匀按《316LSGP150K型不锈钢钹式液体精密过滤器标准操作规程》进行除菌过滤后，2～8℃保存备用。检验合格的HIV阴性对照分装时，1.0ml/瓶,有效期18个月。5.6HIV阳性对照的配制：5.6.1标准配方：按照一万人份理论量计。三羟甲基氨基甲烷0.61g浓盐酸适量氯化钠2.00g2-氯乙酰胺0.10g4-氨基安替吡啉0.10g对乙酰氨基酚0.10g月桂醇醚0.05gBSA2.00gProclin3000.20ml硫酸庆大霉素(8万单位/支)0.08ml胭脂红0.002g纯化水60.00ml灭活人HIV阳性血清适量纯化水定容至100.00ml5.6.2配制方法：按照标准配方内容准确称取除灭活人阳性血清外其他各组分，加入纯化水60.00ml搅拌充分溶解后，使用数显酸度计测量液体的批PH值应为7.3～7.5，再将定量的灭活人HIV阳性血清加入到上述溶液中，用纯化水定容至100.00ml，混合均匀按《316LSGP150K型不锈钢钹式液体精密过滤器标准操作规程》进行除菌过滤第7页共28页后，2～8℃保存备用。检验合格的HIV阳性对照分装时，1.0ml/瓶,有效期18个月。HIV阳性对照的配制和分装工作必须在专用的血清室内进行。5.7底物液A的配制：5.7.1标准配方：按照一万人份理论量计。过氧化氢脲0.38gNa2HPO4·12H2O25.06g柠檬酸·H2O6.53g纯化水600.00ml纯化水定容至700.00ml5.7.2配制方法：准确称取各组分，加入纯化水600.00ml，搅拌充分溶解后定容至700ml，测定溶液的PH应为4.95～5.35，2～8℃保存备用。检验合格后按48人份：4.0ml/瓶，96人份：7.0ml/瓶分装,有效期18个月。5.8底物液B的配制：5.8.1标准配方：按照一万人份理论量计。四甲基联苯胺-2HCl0.32g柠檬酸·H2O1.34g丙三醇35.0ml乙二胺四乙酸二钠0.28g纯化水600.00ml纯化水定容至700.00ml5.8.2配制方法：准确称取乙二胺四乙酸二钠，加入600.00ml纯化水中溶解后，再加入其他各组分，搅拌充分溶解后定容至700.0ml，测定溶液的PH应2.7～4.0，2～8℃避光保存备用。检验合格后按48人份：4.0ml/瓶，96人份：7.0ml/瓶分装,有效期18个月。5.9终止液的配制：5.9.1标准配方：按照一万人份理论量计。浓硫酸46.20ml纯化水653.80ml5.9.2配制方法：第8页共28页准确量取浓硫酸46.20ml，缓慢加入到653.80ml纯化水中，边加边搅拌至硫酸完全加入到纯化水中，室温保存备用。检验合格后按检验合格后按48人份：4.0ml/瓶，96人份：7.0ml/瓶分装,有效期18个月。5.1020×浓缩洗涤液的配制：5.10.1标准配方：按照一万人份理论量计。Na2HPO4·12H2O290.00gNaH2PO4·2H2O29.70gNaCl900.00g吐温-2050.00ml纯化水4500.00ml纯化水定容至5000.00ml5.10.2配制方法：准确称取各组分，加入纯化水定容至4500.00ml，搅拌充分溶解后，加纯化水定容至5000.00ml，测定溶液的PH应为6.2～6.6，室温保存备用。检验合格后48人份按照25ml/瓶，96人份按照50.0ml/瓶分装,有效期18个月。6.操作过程及工艺条件：6.1领料：领料员按照《生产指令》要求，填写领料单后，到库房领取本批生产所需原料、辅料、包装材料，送入备料间暂存，备料间管理员及时填写《物料台账》并建立货位卡。工艺要点：●所领取的物料应与生产指令内容一致。●及时建立货位卡和物料台账，明确物料进出及流向。6.2液体配制6.2.1领料：配制岗位操作人员按照经批准的“配液指令单”填写领料单后到备料间管理员处领取所需物料进行配制。工艺要点：●所领取的物料应与生产指令内容一致。6.2.2称量与配制：按标准处方的内容领取所要配制的液体所需的物料，准确称取各组分物料置于配制桶或适当容器中，加水适量溶解后混合均匀，测定液体的PH值应与所配制液体要求一致，用纯化水定溶至终体积后送入半成品库存放，半成品库管理员填写《请验单》通知QA取样后送交QC检验，合格后，送下工序使用。检验结果不明第9页共28页或不合格的液体不得使用。配制人员填写配制记录，半成品库管理员按照要求填写物料进出账目，并按照合格、待检、不合格管理各液体组分。工艺要点：●称量时与投料前必须核对原辅料品名，批号，规格，数量等，所用原辅料应贴有合格报告单。计算，称量，投料须执行双人复核。●在配制过程中应严格按照操作规程规定执行。●本工序是影响含量和含量均一度的关键工序，不得随意改变工艺参数。●不得低限投料。6.3包被6.3.1领料：包被岗位操作人员凭《包被指令》到备料间管理员处领取包被用酶标板、包被用HIV（1＋2）抗原