血细胞分析仪

血细胞分析仪教学目标1、掌握血细胞分析仪的库尔特原理2、掌握白细胞、红细胞、血小板直方图的临床意义。3、了解血细胞分析仪的质量控制教学重点、难点教学重点：1、血细胞分析仪电阻抗原理2、细胞直方图的分析教学难点：细胞直方图的分析授课内容概述血细胞分析仪检测原理血细胞分析仪类型血细胞分析仪检测项目血细胞直方图1.显微镜计数：原理简单、方便实用比较费时费力、影响因素较多。2.血液分析仪检测项目多速度快精度高信息含量大易标准化、规范化概述血液分析仪发明者库尔特先生35岁的美国人库尔特发明了粒子计数技术；50年代初期，血细胞计数仪开始应用于临床。科技为人类健康服务，热心社会公益事业。库尔特先生1913-1998COULTER：全自动细胞分析仪COULTER：细胞分析仪第一台细胞计数仪瓶瓶罐罐+管道+电极+示波器库尔特（美国通用电气公司员工）在上海工作时所拍照血细胞分析发展史1.1953年美国Coulter公司研制成功第一台电阻抗是血细胞分析仪；2.六十年代已普遍应用到临床，当时可检测RBC、Hb、WBC、MCV、MCH、MCHC等项目；3．七十年代，增加了PLT；4．七十年代末至八十年代开发了DC及RDW及MPV等新项目；5．九十年代以来，RET、NRBC、淋巴细胞亚群分析等指标。现代分析仪进展1．自动化程度越来越高；2．提供参数越来越多；3．精密度越来越高；4．速度越来越快；5．越来越注重环保；6．质控功能得到加强；7．智能化程度越来越高。一血液分析仪检测原理血液分析仪检测原理大致分为两类：①电阻抗法（库尔特原理）②光散射法（其中电阻抗法是血液分析仪的设计基础）血液分析仪主要能完成两大功能：①细胞计数功能②细胞分类功能（一）电阻抗法原理（库尔特原理）1库尔特原理库尔特原理是利用电阻抗法测量细胞的数量和体积。其内容为：血细胞是电的不良导体，当一个细胞通过计数小孔时，会导致小孔两端电阻的变化，将其转化成脉冲，感应器通过检测脉冲的数量及大小，从而计算出通过小孔的细胞数量及体积。2库尔特原理图细胞计数池中，小孔内外两个电极和稀释液构成一个电流回路，在负压作用下，细胞通过小孔，电极能感应到一个瞬间的电阻变化，并将其转换成脉冲，脉冲的数量代表细胞数量，脉冲大小反映细胞体积大小。脉冲检测器3电阻抗法仪器的主要组成电阻抗法仪器的主要组成包括：1.信号发生器（脉冲检测器）2.放大器（微伏放大为伏级的脉冲信号）3.阈值调节（计数不同细胞有不同阈值）4.甄别器（除去假脉冲信号）5.整形器（波形调整为标准一致的平顶波）6.计数系统（不同脉冲区分出不同细胞并计数）红细胞直方图红细胞计数和血细胞比容测定与白细胞计数相似。100200300400(fl)%WBC直方图血小板直方图随红细胞在一个系统中进行检测。直方图在2～28fl（不同仪器不一）。102030(fl)%（二）白细胞系检测原理1.电阻抗法标本单个白细胞按体积大小分类溶血素稀释液电阻抗法淋巴细胞单个核细胞中性粒细胞仪器将体积为35～450fL的血细胞，分为256个通道（channel）。每个通道：1.64fl。根据细胞大小，分别置于不同的通道中，显示血细胞体积分布直方图(Histogram)。白细胞检测原理根据电阻抗的原理，不同体积白细胞(35-450)fL产生脉冲大小的明显差异而区分相应的三群细胞：35—90f1160fl以上90～160f1经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生了变化！！！以细胞的有形成分作为细胞的大小第一群（35～90fl）小细胞区：淋巴细胞（体积最小）。第二群（90～160fl）单个核细胞区，（中间细胞）：单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等。第三群（160fl以上）大细胞区：嗜中性粒细胞（体积最大）。（二）光散射法血液分析仪检测原理光散射法组合应用电学、光学、细胞化学多项技术检测血液细胞，可得出较准确的细胞计数和分类计数的结果。这些测试原理的改进主要体现在对白细胞分类部分的改进，即电阻抗法的白细胞三分群发展为多项技术对白细胞五分类。1、白细胞检测（1）容量、电导、光散射（volume，conductivity，scatter,VCS）法原理细胞体积技术（测量细胞大小）电导性技术（测量细胞内部结构）光散射技术（测量细胞形态、细胞核和细胞颗粒）。体积电导光散射VCS可显示3种细胞散点图DF1（体积值和散射光值）DF2（体积值和电导值）DF3（体积值和电导值）（2）电阻抗与射频法（能透入细胞内，测量核的大小及颗粒的多少）。RF:射频电流细胞内部结构信息DC:直流电细胞大小的信息（3）激光与细胞化学法过氧化物酶检测通道嗜碱性粒细胞/分叶核检测通道。（4）多角度偏振光散射（multi-anglepolarizedscatterseparationofwhitecell,MAPSS）法0°：前角光散射（1°～3°），可粗略测定细胞大小。10°：狭角光散射（7°～11°），可测定细胞内部结构相对特征。90°：垂直光散射（70°～110°），测定细胞核分叶情况。90°：消偏振光散射（70°～110°），区分嗜酸性粒细胞与其他细胞。1．红细胞计数（RBC）和红细胞比积（Hct）1）RBC原理（脉冲数的多少）2）Hct/PCV原理（脉冲的高度与叠加）3）白细胞数的干扰4）红细胞体积分布直方图100200flRBC（三）红细胞测试原理红细胞检测原理红细胞计数和血细胞比容测定与白细胞计数相似。100200300400(fl)%正态分布,峰顶在82~96fl电阻抗法检测红细胞要注意白细胞增高干扰：稀释血液中含有白细胞，正常时，血液红细胞与白细胞的比例约为500：1～1000：l，因此，白细胞因素可忽略不计。当病理情况下，如白血病时，白细胞数明显增高，同时又伴有贫血时，使所得红细胞参数可产生明显误差。2.血红蛋白测定原理有关溶血剂1ICSH推荐的HICN法：最大吸收峰在540nm。血红蛋白衍生物是HICN，试剂反应时间长，5分钟，不适合全自动仪器。另外，氰化血红蛋白（CN-HB）：试剂成分氰化钾（剧毒）。2非氰化溶血剂（如SDS-HB）：SDS-HB与HICH-HB吸收光谱相似。(四)血小板检测原理根据电阻抗法，血小板随红细胞在一个系统中进行检测，在红细胞／血小板计数池中计数2fl～30fl的颗粒。血小板检测原理血小板计数（platelet,PLT）：随红细胞在一个系统中进行检测。直方图在2～30fl（不同仪器不一）。102030(fl)%呈偏态，峰顶5~10fl血细胞分析仪工作流程二、血细胞分析仪类型（一）单纯电阻抗法三分群血液分析仪特点(1)检测参数：约20项左右。(2)白细胞分类：只能对白细胞进行三分群。(3)直方图：3种直方图。(4)报警功能：以文字和(或)图标提示异常检测结果的信息。血液细胞分析仪（二）综合光学和电学等技术血液分析仪特点(1)检测参数：约20至40项左右(2)白细胞分类：能对白细胞进行五分类。(3)直方图和散点图：3种直方图和散点图。(4)报警功能：以文字和(或)图标显示异常检测结果的信息。注意：各类型血液分析仪不具备识别异常细胞形态的能力，故不能完全代替镜检。（三）全自动多功能血细胞分析仪检测速度为每小时110－150份标本工作模式：CBCCBC+DIFFCBC+NRBCCBC+DIFF+NRBCCBC+RETCBC+DIFF+RETCBC+DIFF+NRBC+RET三检测参数血液分析仪一般能检测20余项参数，功能较全的仪器最多的能检测40余项参数。常见血液分析检测报告的术语及英文缩写词。见下表：血液细胞分析仪红细胞体积分布宽度RDW概念外周血红细胞体积大小异质性，用变异系数来表示（CV）参考值11.6%～15.0%临床意义：（1）缺铁性贫血（IDA）早期诊断和疗效观察95%以上的IDA和RDW均异常（2）鉴别IDA和轻型β-地中海贫血均为小细胞低色素贫血，前者RDW增高；后者RDW基本正常。（3）MCV/RDW贫血分类法有助于贫血的形态学分类4）用于贫血病因学鉴别诊断：肾性贫血RDW正常；肝性贫血RDW增高鉴别缺铁性贫血和β-珠蛋白生成障碍性贫血1）共同点：小细胞性贫血，峰左移。2）鉴别点：a．RDW增高，峰底宽b．RDW正常，峰底窄bNfl100200a根据MCV、RDW进行贫血形态学分类MCVRDW贫血类型常见疾病举例增高正常大细胞均一性贫血部分再生障碍性贫血增高大细胞不均一性贫血巨幼细胞性贫血正常正常正细胞均一性贫血急性失血性贫血增高正细胞不均一性贫血再生障碍性贫血、G-6-PD缺乏症降低正常小细胞均一性贫血轻型β-地中海贫血增高小细胞不均一性贫血缺铁性贫血（一）．细胞直方图的应用1．WBC直方图/及“分类”计数1）初步估计细胞群体的变化2）技术因素或病理变化400100200300400fl100200300flfl分析仪各项参数及直方图临床意义1、白细胞直方图正常白细胞直方图异常白细胞直方图红细胞直方图概念正常红细胞主要分布在50-200fl。正常直方图上可见两个细胞群体：50-125fl区域有一个几乎两侧对称、较狭窄的正态分布曲线100200fl2．RBC体积直方图要注意观察图形峰的位置、峰底的宽度、峰顶的形状及有无双峰现象。1）缺铁性贫血2）轻型β－Hb合成障碍3）铁粒幼细胞性贫血4）叶酸缺乏的巨幼细胞性贫血5）其他红细胞直方图（1）正常红细胞分布：50～200fl（2）异常红细胞直方图血小板直方图电阻抗法在2-30fl范围内分析PLT，但大多数在2-15fl范围，正常血小板直方图，呈现左偏态分布。当血小板计数和血小板体积直方图呈现异常现象时，均应检查血液是否有血小板凝聚和微小血块，必要时作血涂片检查，观察是否有小红细胞、红细胞碎片或大血小板增多现象。2030fl103、血小板直方图正常血小板直方图呈左偏态分布：2～30fl分布，主要在2～15fl。异常血小板直方图MPV的变化：鉴别血小板减少①PLT↓而MPV↑：Plt破坏增多（如DIC、ITP等）②PLT↓而MPV↓：M增生不良、AIDS、M纤维化、再障、M瘤、白血病化疗、败血症等（三）血小板参数的临床意义先进技术预览图1．半自动分析仪把20μl血液样品在机外稀释，混匀后放在样品架上，按下计数键它就可以对15种血液指标和3个细胞直方图进行一次分析。测定完成后结果会立即在LCD上显示并将结果打印出来。这是一台用于临床实验室体外诊断的全自动血液分析仪，能每小时分析80份样品，打印出18份参数和3种细胞分布曲线图。操作简便，快速。图2．全自动分析仪图3．CD-3500血球计数分析仪．30个参数，10项白细胞分类，7个分布图，7个散射表示图．可以做网织红细胞分析，以及动物血液测试高达60个品种．采用最先进的激光技术和电阻法技术．20个质控程序，120个带25个参数的质控样品的SD.CV均值图4．HS血液常规检查流水线HST-330SE-9000/R-3000/SP-100从血球计数、白血球分类到网织红细胞测定以及标本的推片、染色，全面实现了自动化。实现了高效率的检测。小结本节课我们要求同学掌握电阻抗原理和血细胞直方图的临床意义，为临床实习打好基础！思考题电阻抗检测原理（白细胞分类原理）？