生长速率法

抑制病原真菌菌丝生长实验——生长速率法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的生物测定方法之一—生长速率法。二、实验原理生长速率法又叫含毒介质法，它是将供试药剂与培养基混合，以培养基上菌落的生长速度来衡量化合物的毒力大小。一般多用于那些不产孢子或孢子量少而菌丝较密的真菌。三、实验仪器与设备电子天平（感量0.1mg），生物培养箱，培养皿，移液管或移液器，接种器，卡尺，高压灭菌锅，超净工作台，酒精灯，纱布，打孔器等四、实验材料（1）供试农药通用名：戊唑醇(Tebuconazole)，化学名：(RS)-1-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-3-(1H-1,2,4三唑-1-基甲基)戊-3-醇。（2）供试病菌试验真菌应选择在人工固体培养基上菌丝能沿水平方向、有一定生长速率且周缘生长较整齐的真菌，如番茄灰霉病菌（Botrytiscinerea）、水稻纹枯病菌（Rhizoctoniasolani）、小麦赤霉病菌（Fusariumgraminearum）和番茄早疫病菌（Alternariasolani）等。（3）其他实验材料PDA培养基五、实验步骤1.药剂配制戊唑醇（98%原药）溶于丙酮配成5000ppm母液。设计5个系列浓度，有机溶剂最终含量不超过2%。2.药剂处理在无菌操作条件下，根据实验处理将预先融化的灭菌培养基定量加入无菌三角瓶中，从低浓度到高浓度依次定量吸取药液，分别加入上述三角瓶中，充分摇匀。然后倒入直径为9cm的培养皿中，制成相应浓度的含药平板。实验设不含药剂的处理作空白对照。3.接种将培养好的病原菌，在无菌条件下用直径为4mm的灭菌打孔器，自菌落边缘切取菌饼，用接种针将菌饼接种于含药平板中央，盖上皿盖，皿盖朝下，将培养皿置于适宜温度的培养箱中。六、结果调查与统计分析根据空白对照培养皿中菌的生长情况调查病原菌菌丝生长情况。用卡尺测量菌落直径，单位为mm。每个菌落用十字交叉法垂直测量直径各一次，取其平均值。根据测得的结果计算菌丝生长抑制率，计算该农药的抑制率，评价供试药剂对靶标菌生长的抑制活性。纯生长量=菌落平均直径-菌饼直径抑菌率（%）=[(对照菌落纯生长量-处理菌落纯生长量/对照纯生长量]×100%农药浓度（ppm）直径（mm）平均值抑制率52.51.250.630.310