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第三章细胞生物学研究方法习题一、选择题1正常细胞培养的培养基中长需加入血清，主要是因为血清中含有（C）A.氨基酸B.核酸C.生长因子D.维生素2冷冻蚀刻技术主要用于（A）。A.电子显微镜B.光学显微镜C.原子力显微镜D.激光共聚焦显微镜3建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞是通过下列哪种技术构建的？（A）A.细胞融合B.核移植C.病毒转化D.基因转移4关于光镜的使用，下列哪项有误？（C）A.观察标本时，应双眼同时睁开、双手并用B.按照从低倍镜到高倍镜到油镜的顺序进行操作C.使用油镜时，需要在标本上滴上香柏油，将聚光器降至最低，光圈全部开放。5为了实现细胞内某种蛋白质的亚细胞精细定位，可对该蛋白进行标记，下面哪种标记可行（C）A.GFP标记B.免疫荧光标记C.免疫电镜技术D.荧光染料直接染色6为了提高雌性乳牛出生的比例，可在体外将携带X染色体和Y染色体的镜子分离开，进行人工授精。最好的分离方法使（A）A.流式细胞分选术B.离心技术C.细胞电泳D.层析7为了观察病毒，可通过何种方法进行观察（B）A.相差显微镜观察B.负染色后用电镜观察C.激光共聚焦显微镜观察D.以上都错8以下哪些技术一般不用于分离活细胞？（CD）（可多选）A.流式细胞技术B.细胞电泳C.超速离心D.差速离心9某研究生为了研究一特定膜蛋白的胞质结构域的功能，需要制备和分离外翻的细胞膜泡，为了获得无污染的外翻膜泡，下列选项中，哪些是他在实验中有可能使用到的?（BD）（可多选）A.SDSB.凝集素C.流式细胞仪D.柱层析10绿色荧光蛋白GFP（GreenFluorescentProtein）基因与目的基因融合后，转入细胞后可以（ABD）（可多选）A.检测融合蛋白在细胞中的准确定位B.检测目的基因所编码的蛋白在细胞中的含量C.检测目的基因所编码的蛋白在细胞中的分子结构D.检测目的蛋白质在细胞中的表达量E.以上答案都不对二、填空题1流式细胞仪可以定量测定细胞中的DNA，RNA或某种特异蛋白的含量及细胞群体中上述成分含量不同的细胞数量。2从创新的观点看，1665年胡克发现细胞的两个主要创新点是切片技术和——光学显微技术创新。3体外培养的细胞，不论原代细胞还是传代细胞一般不保持体内原有的细胞形态。但大体可以分为两种基本形态:成纤维样细胞与上皮样细胞。三、判断题1显微镜成像质量好坏的重要指标是其放大倍数。（x）2光学显微镜和电子显微镜下都可以观察到彩色图像。（x）3虽然龟的最高寿命是175岁，而小鼠的的寿命只有几年，但它们的细胞在体外培养分裂的极限基本相同。（）4正常细胞培养中除了培养基外常加血清，主要是因为血清中含有大量的氨基酸。（x）5体外培养的细胞，一般保持体内原有的细胞形态。（x）6经冷冻蚀刻技术处理后的样品，在电子显微镜下所观察到的图像是样品本身所形成的。（x）7经流式细胞仪分离出来的细胞可继续培养。（）四、名词解释RNAi（RNAinterference）1、RNAi：RNA干扰是指与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象。其作用机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA（siRNA），这些siRNA结合其他元件形成“RNA诱导沉默复合物”（RISC），RISC与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。该方法已经发展成为基因治疗、基因结构功能研究的快速有效的方法Monoclonalantibody2、中文名称单克隆抗体。是指由一个被特定抗原免疫的B淋巴细胞与杂交瘤细胞融合后形成的杂交细胞产生的针对该特异性抗原的抗体。单克隆抗体具有高度特异性，在生物学研究和临床上都有广泛而重要的用途细胞工程3、细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，进行在细胞水平上的遗传操作及进行大规模细胞和组织培养的学科。当前细胞工程所涉及的主要技术领域有细胞培养、细胞融合、细胞拆合、染色体操作及基因转移等方面。根据设计要求，按照需要改造的遗传物质的不同操作层次，可将细胞工程学分为染色体工程、染色体细胞工程、细胞质工程和细胞融合工程。五、简答、思考题1细胞生物学研究成功的关键在于运用模式生物。试举出三种生物学上常用的模式生物，并逐一说明该模式生物在生物学研究中的用途和优势1、常用的模式生物及其在生物学研究中的用途和优势如下：（1）大肠杆菌用途：常用工程改良的大肠杆菌来大量扩增质粒和表达蛋白等。优势：大肠杆菌是原核生物的代表，它的基因组信息量少而全，是研究原核生物的良好模式生物。此外，大肠杆菌还是良好的生物学研究工具。（2）果蝇果蝇是昆虫的代表。用途：蟾宫果蝇俩进行基因和遗传研究。如遗传规律的分析、染色体特性研究、胚胎发育的基因调控和细胞分化机制研究、神经退行性疾病和学习、认知等领域的研究等。优势：果蝇基因组信息全面，而且现有全面的针对果蝇的系统研究工具，全世界积累了大量果蝇品系，这些都对果蝇研究提供了便利。（3）小鼠用途：常作为哺乳动物遗传学、组织学、胚胎学和细胞生物学导尿管的研究材料。优势：小鼠是哺乳动物的模式生物，与人的亲缘关系在各种模式生物中最近，在小鼠身上的实验一般放在最后，在得到初步结果后再到小鼠身上验证。2细胞生物学研究常用的技术有哪些？请列举3种不同的细胞生物学研究方法对现代生命科学研究的影响.2、细胞生物学研究的常用技术有（1）显微成像技术显微成像技术包括直接成像和间接成像，是细胞生物学最基本的研究方法，可分为光学显微技术和电子显微技术。光学显微技术包括普通双筒显微镜、荧光显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、倒置显微镜等。光学显微技术是研究细胞显微结构的重要工具。电子显微镜技术包括投射电子显微镜、扫描电子显微镜、电子数码显微镜等。电子显微镜是研究亚显微结构的主要工具。（2）细胞化学技术细胞化学技术包括酶细胞化学技术、免疫细胞化学技术、细胞分选技术、其中流式细胞技术是细胞生物学和现代生物技术中的重要研究方法。（3）细胞工程技术细胞工程技术是细胞生物学与遗传学的交叉领域，主要利用细胞生物学的原理和方法结合工程学的技术手段，按照人们预先的设计，有计划地改变或创造细胞遗传性。包括体外大量培养和繁殖细胞，或获得细胞产品、或利用细胞体本身。主要要内容包括：细胞融合、细胞生物反应器、染色体转移、细胞器移植、基因移植、细胞及组织培养。（4）分离技术分离技术包括细胞组分的分离和生物大分子的分离，为揭示生物大分子在细胞内的空间定位、相互关系及其功能的研究提供了有力的工具。3为什么用于光学显微镜观察的石蜡切片厚度可达20µm，而用于电子纤维筋观察的超薄切片的厚度必须小于0.1µm？如果把超薄切片之余载玻片上并在电子显微镜下观察，会有什么样的结果？3、事实上，光镜和电镜止痒的厚度都必须保证光线或者电子能够很好地穿透样品，电子穿透能力弱，为了保证成像效果，超薄切片的厚度必须小于0.1um。如果把切片置于载玻片上并在电子显微镜下观察，由于电子不能穿透玻片，因此，不能成像（即荧光屏呈黑色）