黄酮含量的测定

《油脂检测实验》油脂中黄酮含量的测定吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有选择吸收的特性而建立的分析方法。光的电磁波性质射线x射线紫外光红外光微波无线电波10-2nm10nm102nm104nm0.1cm10cm103cm105cm可见光一、物质对光的吸收与吸收光谱光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出特征的颜色，这一过程与物质的性质及光的性质有关。物质对光的吸收物质对光的吸收满足Plank条件hchEEE02hS2S1S0S3E2E0E1E302EEhhhh吸收光谱AbsorptionSpectrum纯电子能态间跃迁S2S1S0S3hE2E0E1E3S2S1S0hAhhh分子内电子跃迁带状光谱锐线光谱A定性分析与定量分析的基础定性分析基础定量分析基础物质对光的选择吸收ABA)(maxA)(maxB在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。AC增大二、溶液的吸光定律透光率（透射比）透光率定义：0IITtT取值为0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%入射光I0透射光ItLambert–BeerLaw:KcbAK：吸光系数入射光波长物质的性质温度AKcbTlg吸收定律与吸收光谱的关系AC吸光定律A或吸收光谱ACmax吸光度的加合性多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光度具有加合性，即iiiiiiiicbbcAA对吸收定律偏离AC主要原因非单色光吸光质点的相互作用三、吸光分析仪的基本构造0.575光源单色器吸收池检测器显示I0It参比样品入射光I0透射光It请注意与定义比较未考虑吸收池和溶剂对光子的作用KcbA单波长单光束分光光度计0.575光源单色器吸收池检测器显示单波长双光束分光光度计比值光源单色器吸收池检测器显示光束分裂器实验七黄酮类物质含量的测定一黄酮的功效1、它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，如花青素、花色素可以抑制油脂性过氧化物的溢出2、黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，这些作用大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。3、黄酮可以增进伤口愈合和止痛，二原理提要黄酮类化合物是具有苯并吡喃环结构的一类天然化合物的总称，一般都具有4位羰基，且呈现黄色。黄酮类化合物的3—羟基、4—羟基或5—羟基、4－羰基或邻二位酚羟基，与铝盐进行络合反应，在碱性条件下生成红色的络合物。本方法对样品中黄酮类化合物进行提取纯化后，用分光光度法于510nm波长下测定其吸光度，与芦丁标准品比较，进行待测物中总黄酮的定量测定。三、器材与试剂仪器：分光光度计，恒温水浴，50ml具塞试管，10ml试管，移液器，漏斗，滤纸、125ml分液漏斗等。试剂：氯仿，20%Na2CO3，5%亚硝酸钠，10%硝酸铝，4％氢氧化钠，30%乙醇等。四．操作步骤（1）样品处理1）固体样品：称取1～2g干燥的固体样品，用滤纸包紧，置于索氏提取器中，加入50～100ml70％乙醇溶液浸润后，在80℃水浴下回流3h，至提取液无色为止。粗提液冷却后，减压抽滤，并用少量25％乙醇溶液洗涤滤渣，合并滤液。在50℃下减压蒸馏，除去其中的乙醇，直至索氏提取器内溶液呈无醇味。倒出容器内溶液，用30ml热水分3次洗涤，抽滤后，将滤液倒入分液漏斗中，以75ml氯仿分3次萃取脱脂，待完全分层后，收集各次下层水溶液并定容至50ml。2）液体样品：准确吸取1.0ml样品，定容至50ml后，直接以75ml氯仿分3次萃取脱脂，其余步骤同上。（2）标准曲线的绘制：准确吸取（0.1mg/ml）芦丁标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、⒋00ml（相当于芦丁0、50、100、200、300、400ug），移入10ml刻度比色管中，加入30％乙醇溶液至5ml，各加5％亚硝酸钠溶液0.5ml，振摇后放置5min，加入10％硝酸铝溶液0.5ml摇匀后放置6min，加1.0mol／L氢氧化钠溶液2ml，用30％乙醇定容至刻度。摇匀，放置15min，于510nm波长处测定吸光度，以零管为空白，以芦丁含量（ug）为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。（3）样品测定：根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积待测液，按标准曲线制备操作步骤于510nm处进行吸光度的测定（样液如有沉淀，应过滤后测定）。五.结果计算根据标准工作曲线，求出相当于样品吸光度的芦丁含量。黄酮含量（μg/g）=X×V/mX为由吸光度按标准曲线查的结果；V为粗提液总体积(ml)；m为称样质量(g)黄酮的标准曲线：y=0.8965x–0.0014R2=0.9997六、黄酮含量的测定流程图取3支10ml具塞试管（2支测定管，一支空白管）3支测定管加入粗提液5ml，1支空白管加同量30％乙醇各管加0.5ml5%NaNO2，摇匀，静置5min加0.5ml10%Al(NO3)3，摇匀，静置6min加2ml4％NaOH用30%乙醇定容，混匀，放置15min510nm下测定吸光度（以芦丁为标样制作标准曲线）黄酮铝络合物易受CO2作用使颜色有所变化，要求短时间完成操作，中间盖塞结果记录：记载表老师检查用品洗刷干净，检查摆放整齐、齐全报告老师，经检查同意可离去值日生负责注意:清理分光光度计、比色皿、台面。下一个实验：油脂中黄曲霉的测定