RNA干扰技术

RNA干扰技术前言真核细胞中存在着许多非编码RNA（non-codingRNA,ncRNA).这是一类不编码蛋白质但具有重要生物学功能的RNA分子。长链非编码RNA：复杂的生物学功能非编码RNA核内小RNA(snRNA)核仁小RNA(snoRNA)短链非编码RNA胞质小RNA(scRNA)催化性小RNA(核酶）小干扰RNA（siRNA)微RNA(miRNAs)目录CONTENTS一、相关试验二、RNA干扰技术的作用机制三、RNA干扰技术的特点四、RNA干扰技术的应用相关试验PART01感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comRNA干扰的发现•秀•丽•隐•杆•线•虫1995年，康奈尔大学的SuGuo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫的par-1基因时，发现了反义RNA和正义RNA都能切断par-1基因的表达途径。这与传统上对反义RNA技术的解释正好相反。携带了遗传信息，可以直接翻译成蛋白质的RNA。Eg:mRNA正义RNA反义RNA与正义RNA互补配对的RNA分子,不能直接用来翻译成蛋白质的RNA。感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comRNA干扰的发现1998年，华盛顿卡耐基研究院的Fire等首次在秀丽新小杆线虫中证明上述现象属于转录后水平的基因沉默。他们发现SuGuo博士遇到的正义与反义RNA均可阻断基因表达的现象，都是由于体外转录所得的RNA中污染了微量双链RNA而引起。纯化单链RNA：基因抑制效应十分微弱体外转录所得RNA纯化双链RNA：高效特异性阻断相应基因的表达RNA干扰(RNAi)感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comdsRNA及其产生方法RNA病毒入侵外源基因导入转座子转录基因组中反向重复序列（invertedrepeats)转录双链RNA（Double-strandedRNA,dsRNA),双链核糖核酸。RNA干扰技术的作用机制PART02感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comRNA干扰技术（RNAi)1.起始阶段2.效应阶段3.级联放大阶段RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是通过小干扰RNA(smallinterferenceRNA,siRNA)造成目的mRNA特异性降解,从而使基因转录后沉默的一种现象.RNAi的作用机制感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.com1）起始阶段dsRNA分子在细胞内被一双链RNA酶Ⅲ型内切酶也叫Dicer酶剪成21～23nt大小的小干扰RNA(siRNA)。感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.com1）起始阶段研究认为在3′端带有2个碱基突出的黏性末端,5′为磷酸基团的siRNA诱导的RNAi效应最强。感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.com2）效应阶段生成的siRNA和RNAi特异性酶，如AGO-2、RED-1、DNA-RNA螺旋酶等结合形成RNA诱导沉默复合体RISC。(RNA-inducingsilencecomplex,RISC)•RNA诱导沉默复合物形成感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.com2）效应阶段siRNA引导RISC识别靶mRNA,其中的反义链与靶mRNA互补结合,正义链则被置换出来。继而,RISC复合物中的核酸酶在靶mRNA与siRNA结合所形成的双链区的5’起始端下游7～10nt处切断mRNA。•效应阶段感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.com3）级联放大阶段感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.com3）级联放大阶段此阶段以siRNA中的一条链为引物，以靶mRNA为模板，在RNA依赖性RNA聚合酶（RNA-dependentRNApolymerase,RDRP)的作用下,扩增产生足够数量的新的二级dsRNA作为底物提供给Dicer酶,产生更多的siRNA,从而使效应阶段反复发生,一个完整的mRNA被降解成多个21～23nt的小片段,从而导致相应的基因表达沉默。感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comRNAi作用机制总结合效应扩剪dsRNAsiRNARNA诱导沉默复合体RISC反义链互补结合核酸酶切断mRNARDRP扩增dsRNA效应阶段反复RNA干扰技术的特点PART03感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comRNAi特点RNAi是转录后水平的基因沉默机制,有高度的序列特异性,19nt的dsRNA几乎可以完全抑制基因的表达,而其中的1nt突变后,它对基因的抑制作用就消失了,这种高度的序列特异性能够使dsRNA非常特异地诱导与之序列同源的mRNA降解,避免降解与目的mRNA同家族的其他mRNA从而实现对目的基因的精确沉默。高特异性感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comRNAi特点RNA存在级联放大效应,效应阶段可以循环发生,使相对很少量的dsRNA分子(数量远远少于内源mRNA的数量)就能产生强烈的RNAi效应(每个细胞仅需几分子siRNA就可产生RNAi效应),并可达到缺失突变体表型的程度。相比普通的siRNA,具有短发卡结构的双链RNA产生的RNAi效应更强。高效性感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comRNAi特点01高稳定性04050302浓度时间依赖性可传播性可遗传性靶基因位点的高选择性RNA干扰技术的应用PART04感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comRNAi的应用•在基因功能研究中的应用针对某已知基因,设计可诱导其沉默的dsRNA,通过合适的手段导入细胞或机体,使该基因表达水平下降或完全沉默,从而了解该基因的功能。感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comRNAi的应用在疾病治疗研究中的应用利用RNA干扰技术可以特异地沉默与疾病有关的内源或外源基因,或者沉默致病过程中与一些中间代谢产物的合成、分解有关的蛋白基因,而不会对个体的生长发育产生影响,这一特性为RNA干扰在疾病治疗上的应用开创了广阔的前景。感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.comRNAi的应用在植物抗病毒研究中的应用利用RNA干扰赋予植物病毒抗性，人为将与病毒同源的dsRNA导入植物体,基于植物体的RNA干扰机制对病毒基因组进行特异性切割降解,阻止病毒的复制扩散,从而保护植物体不受病毒危害。感谢您下载包图网平台上提供的PPT作品，为了您和包图网以及原创作者的利益，请勿复制、传播、销售，否则将承担法律责任！包图网将对作品进行维权，按照传播下载次数进行十倍的索取赔偿！ibaotu.com•文献查阅网址file:///C:/Users/xindi/Desktop/RNA干扰技术/RNA干扰技术的原理与应用_孙平.pdf=searchfile:///C:/Users/xindi/Desktop/RNA干扰技术/RNA干扰技术在几项研究领域的应用_燕飞.pdf感谢聆听