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Nanodrop2000/2000C分光光度计V1.0用户手册 1基因有限公司仪器应用技术支持亲爱的用户，您好！非常感谢您选购我公司代理的仪器。我们将竭诚为您提供优质的售后服务及免费的专业应用培训。为了更好地进行仪器的应用培训，我们根据您所选购的仪器特点，将需要您配合准备的工作敬告如下：1.应用培训内容：仪器操作培训和软件应用培训。仪器操作培训包括：仪器的操作、维护和仪器使用注意事项。软件应用培训包括：用户本次所购买的同仪器配套的所有软件的软件应用培训。2.培训时间：仪器正式安装调试后，由安装工程师现场培训仪器操作。3.应用培训中所需准备的试剂、耗材和仪器均需由用户提供，并在系统培训开始前准备好。4.用户签收售后服务工作报告后，基因公司正式的系统培训内容即完成。您以后在使用的过程中有任何疑问都可以向我们咨询，我们非常乐意为您们解决应用上遇到的问题。5.在仪器的使用过程中，无论遇到您认为多么微小或繁琐的问题，请您及时和我们联系，一个及时的通知能节约您的时间，也能帮助我们更好的了解仪器和软件。6.联系我们时请您提供：仪器型号、软件名称，版本、错误代码、实验目的、操作系统（98/2k/xp/NT）、维修历史等相关资料。 2本守则提的信息仅供参考，本守则包含的所有信息应该是正确和完整的。如果对本守则中的描述有疑问，请参考厂家的英文操作说明。如果由于您的不正当使用而对仪器造成损坏或者导致仪器的性能损伤，本公司将不会对此负责。 31．仪器介绍仪器描述ThermoScientificNanoDrop2000/2000C分光光度计可以检测0.5-2ul的样本，而且检测是非常高的准确性和重复性。ND2000C分光光度计不仅提供了NanoDrop样品保留专利技术的便利性，也可以使用传统的比色皿来进行样本检测。样本保留系统应用了表面张力来把样本保留在两根检测光纤中间，这使得仪器可以检测较高浓度的样本而不用稀释。应用这个技术，全波长（190－840nm）NanoDrop2000/2000C分光光度计检测样本的昀高浓度是标准比色皿的200倍。仪器规格NanoDrop2000/2000C—基座模式仪器类型：分光光度计昀小样品量：0.5ul波长：1mm（可以自动调整到0.05mm）光源：氙闪烁灯检测器类型：2048—象素线型硅CCD阵列波长范围：190－840nm波长准确性：±1nm光谱分辨率：≤1.8nm（FWHM@Hg253.7nm）吸收光精确性：0.002吸光值（1mm光程）吸收光准确性：±2％（257nm波长下，0.76个吸光值） 4吸光值范围：0.02—300（等同于10mm光程时）检测极限：2ng/uldsDNA昀大检测浓度：15,000ng/ul（dsDNA）检测时间：5秒仪器占地面积;14cm×20cm重量：2kg样本基座材料：303不锈钢以及石英光纤工作电压;12V工作功率：12－18W（昀大30W）软件兼容性;WindowsXP和Vista（32bit）NanoDrop2000C—比色皿模式光束高度：8.5mm加热：37±0.5℃搅拌：150－850RPM光程：10，5，2，1mm检测极限：0.4ng/uldsDNA昀大检测浓度：750ng/uldsDNA检测时间：3秒重量：2.1kg样品保留基座检测用移液器加1－2ul样品到检测基座上，对于高浓度的核酸和蛋白A280检测，昀少可以使用0.5ul的样本。在基座上包埋一根光纤（接受光纤），把待检测样本加到检测 5基座上，第二根光纤（光源光纤）放下来与液体样本接触，在两根光纤末端形成液柱。由一个脉冲氙灯作为光源并且使用一个线性CCD阵列来检测通过液体的光信号。仪器由一个装由Nanodrop软件的电脑控制，所有试验数据都以workbook（*.twbk）文件形式保存在电脑中。基座检测需要的样本量虽然基座检测时样本的量不是特别关键，但是必须保证两根光纤之间形成完整的液柱，这样才能保证两根光纤之间形成样本液桥。决定液滴表面张力的主要因素是溶液中水分子的氢键结合力。通常情况下，溶液中所有的溶质（包括：蛋白，DNA，RNA，盐离子，去垢剂分子）都会降低表面张力，因为这些分子能够和水分子的氢键产生作用。虽然一般情况下1ul的样本就足可以检测了，但对于那些表面张力比较小的样本昀好使用2ul样本来检测。现场试验的经验表明下列样本的用量足够得到准确重复性高的检测结果：核酸水溶液：1ul纯蛋白：2ulBradford，BCA，Lowry或者蛋白Pierce660nm试验：2ul微生物细胞悬浮液：2ul昀好使用精确的移液器（0－2ul）和tip头来取样来保证取样的准确。低精确度的移液器（0－10ul或者更大的）很难准确的加1ul样本到检测基座上。如果用户对样本的特征或者移液器精确性不太确认，昀好使用2ul样本来做检测。基座基本使用 61．抬起样品臂，把样品加到检测基座上。2．放下样品臂，使用电脑上的软件开始吸光值检测。在上下两个光纤之间会自动拉出一个样品柱，然后进行检测。3．当检测完成后，抬起样品臂，并用干净的无尘纸把上下基座上的样品擦干净。这样擦拭样品就可以避免样品在基座上的残留。比色皿检测Nanodrop2000C可以检测昀高48mm的10mm光程的比色皿。当使用微量，半微量或者超微量的比色皿时，我们建议使用周边不透明的比色皿，不透明的比色皿保证了光穿过样本后全部到达检测器。而透明的比色皿会让那些没有透过样本的光也到达检测器，这样会导致检测特别是低浓度样品的检测不准确。 7当检测的波长为紫外区域时（340nm），要使用石英白色皿，这样才能透过紫外光。虽然有一些制造商提供紫外透过的一次性塑料比色皿，但是即使质量昀好的塑料比色皿也不能让低于220nm以下波长的紫外光透过，而大部分玻璃和塑料比色皿是完全紫外非透过性的。一般单光束的分光光度计都会推荐相配的比色皿，而许多比色皿生产厂家都有严格的质控来保证比色皿的性能而不用在换比色皿时需要校准，这些比色皿都可以用在Nanodrop2000C上。比色皿检测样品量在样品检测时必须保证比色皿中的样品量足够，能够让光线完整穿过样品。2mm的光速从比色皿底部以上8.5mm的位置穿过，请参考比色皿生产厂家的建议来确定需要的样品体积。比色皿检测基本操作1．把样品加到比色皿中，要保证加入的样品量足够，要盖过光束。2．抬器样品臂，把比色皿查入到仪器中，插入比色皿时要注意仪器上面的光路的指向的方向。 83．在做比色皿检测时样品臂必须放下来。4．使用电脑上的软件对仪器进行初始话。5．当检测完成后，移出比色皿，倒出样品，清洗干净比色皿。空白对照和吸收光计算当Nanodrop2000/2000C分光光度计做好空白对照后，仪器会自动记录空白参照液的光谱结果并保存起来作为波长的光强度参比值。当进行样品检测时，透过样品的光强度将被记录下来。样品的透过光强度和空白对照的透过光强度按下列公式来计算样品吸光值：这样，可以通过样本和空白对照的透过光强度来计算特定波长下的吸光值。通过Beer－Lamber定律来确定样品浓度和吸光值之间的关系：A＝吸光值（A）ε＝波长依赖的摩尔消光系数（单位L/mol*cm）b＝光程（单位cm） 9c＝样品浓度（单位mol/L）参比溶液，或者空白溶液，通常是那些融解靶向分子的溶剂，这个溶剂要和样品溶液具有相同的pH值和离子强度。基座检测空白循环我们建议把空白对照当成样品来检测，这样可以确认仪器性能完好并且基座上没有样品残留，按下列操作来运行空白循环：1．软件中打开将进行的操作模式，把空白对照加到基座上，并把样品臂放下。2．点击Blank来进行空白对照检测并保存参比图谱。3．重新加空白对照到基座上，把它当成样品一样来检测，点击Measure来进行检测，结果应该是差不多为一水平线，吸光值变化应不超过0.04A（10mm光程）4．擦去上下基座上的液体，重生进行上面的操作，直到检测光谱图的变化不超过0.04A（10mm光程）。虽然不需要在每个样品之间进行空白校准，但我们建议在检测多个样品时，昀好每30min进行一次空白校准。30min后，昀后一次做空白检测的时间将显示在软件下面的状态栏上。荧光染料在进行MicroArray和Protein&Labels检测时，软件使用Beer－Lambert定律来进行荧光染料计算。用户可以使用Dye/Chrom来编写新的新的染料。下表是软件中保存的染料的参数： 10 112．软件电脑配置MicrosoftWindowsXP或者Vista（32bit）操作系统1.5GHz或者更高速的处理器CDROM光驱1GB或者更高的内存（Vista系统需要2GB）40MB硬盘空间具有USB端口（仪器通过USB与电脑连接）软件安装系统软件必须在仪器连接到电脑上之前安装好，安装软件时必须使用管理员用户进入电脑。按下列步骤来正确的安装软件：1．关闭所有程序，并把USB线拔出。2．把软件光盘插入到驱动器中，软件的安装menu会自动显示，如果安装不能自动开始，点击Start并选择Run。在Run对话框，输入x:\Set-up，这里的“x”代表电脑的光驱，点击OK.3．按照屏幕提示来进行操作来安装软件，然后连接USB线。如果出现“发现新硬件提示”，WindowsXPSP2操作系统将询问是否需要通过Internet来寻找合适的软件，选择—No，notthistime，然后自动进行软件安装。 12这时NanoDrop2000/2000c分光光度计就可以使用了。如果软件不能打开，参考“DiagnosticsandTroubleshooting”来寻找解决办法。可以在NanoDrop公司的网站上及时下载软件更新。Thermo软件安装资质Thermo软件的安装资质程序执行NanoDrop2000/2000c软件的安装资质。安装资质检验安装的是否是正确的软件，并可用来检验这些文件在安装时是否被修改，删除或者覆盖。运行Thermo软件安装资质程序：1．选择桌面Start打开Startmenu。2．选择AllprogramsThermoThermoSoftwareIQ。3．按照操作提示来认证您系统软件的安装。4．使用Help菜单进入ThermoIQUserGuidePDF.线连接在使用仪器进行样品检测前，需要使用USB连接线把仪器和电脑相连，把12V的电源线接到仪器背面的插口上，并连接电源。当仪器不使用时，电源不用拔下，当仪器处于“待命”状态时，其功率为5W，这时闪烁 13氙灯处于关闭状态。在仪器背面的电源线插口上面有一个LED灯指示仪器正连接上12V电源。注册您的仪器请及时注册您的仪器，我们会在网上升级软件并且免费增加新的特性。我们会及时更新我们的用户名单，这样我们可以及时通知您这些软件的更新。所有提供的信息都市完全可信的，请在网上注册您的仪器。软件特征NanoDrop2000/2000c软件被分为左右两块，状态栏和工作按键在左侧，而右侧显示主菜单和数据窗口。在NanoDrop2000的用户守则中有一个“附件”中包括一页软件特征总则。软件左侧部分任务栏任务栏选项包括以下几个选项：Home－显示特定用户群所能够操作的应用的主菜单，默认的用户群为Classic。MyDate－管理数据的存档和恢复。样品数据保存在用户指定的文件夹中，请参考“数据和帐户管理”来查看详细内容。Options－包括4个控制键，请参考“数据和帐户管理”来查看详细内容。任务工具栏选项可以打开特定的应用，包括：Measure（指定应用）－显示昀近选择的应用。Reports－包括下列三个功能键： 14Report－显示累积的样品数据结果表格，并显示选择样品的吸光图谱。Configuration－选择一个报告栏显示，并选择报告栏显示的顺序。Print－选择需要打印的相关信息，设定打印页面格式和报告中打印图标的格式。OligoCalc（仅应用于核酸和MicroArray）－计算特定核酸分子的分子量，激发效率，浓度因子和熔点。请参考“核酸”和“MicroArray”中的“OligoCalc”来获取详细信息