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第四章抗体制药1．Ig分子是由二硫键连接起来的4条（两对）条多肽链构成的。2．单克隆抗体制备时对动物的免疫方法分为体内免疫和体外免疫。3．一般来说PEG的相对分子质量和浓度越大，细胞的融合率越高。1.Ig分子的抗原结合部位是由（VL和VH的CDR区）共同构成。2.制备单克隆抗体时一般采用与（骨髓瘤细胞）供体同一品系的动物进行免疫。3.生物药物检验要求（理化指标和生物活性指标缺一不可）。4.下列不属于基因产品液态保存的方法是（低浓度保存）5.前预防乙型肝炎使用的生物制品属于（疫苗）。单克隆抗体：由单一的B淋巴细胞克隆产生的，这种抗体是针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。双功能抗体：就是双特异性单链抗体，将抗A抗原抗体的轻链可变区基因与抗B抗原抗体的重链可变区通过短肽链接子连接构建成双链抗体的表达质粒，表达后形成双特异性抗体。多克隆抗体：病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体。抗体：是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。克隆化：指单个细胞通过无性繁殖而获得细胞集团的整个培养过程。免疫球蛋白：将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白。类型基本结构人-鼠嵌和抗体人IgC-小鼠IgV改型抗体小鼠CDR替换人CDRFab完整L链和FdFvVH和VL单链抗体（scFv）VH-或-VL单域抗体VH或VL最小识别单位（MRU）一个CDR人-鼠嵌和抗体：由于抗体同抗原结合的功能决定于抗体分子的可变区（V），同种性免疫原决定于抗体分子的稳定区（C）,如果在基因水平上把鼠源性单克隆抗体的重链（H）和轻链（L）可变区分离出来，分别与人Ig的重链的稳定区（C）基因连接成人-鼠嵌合体的H和L链基因，再共转染骨髓瘤细胞，就能表达出完整的人-鼠嵌合抗体。Fab抗体：用胃蛋白可将IgG的重链在铰链区的C端处裂解，获得两个完全相同的抗原结合片段，在Fab片段之间仍保留有铰链区与二硫键，为Fab双体，具有完整的双价抗体活性，但相对分子质量减少了1/3，为10000，在人体内产生的抗鼠蛋白的排斥反应也相应降低30%，由于仍保持抗体分子的立体构型，因此在人体任然很稳定，成为小分子抗体的锥形。单链抗体：是由一段弹性链接肽把抗体可变区重链（VH）与轻链（vl）相连而成，是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能单位。单域抗体：抗体的VH-或-VL是具有结合抗原特异性的小抗体片段。改形抗体：Ig分子中参与构成抗原结合部位的区域是H和L链V区中的互补决定区（CDR区），而不是整个可变区。H和L链各有三个CDR，其它部分称框架区。用鼠源单抗的CDR序列替换人Ig分子中CDR序列，则可使人的Ig分子具有鼠源单抗的抗原结合特异性。可消除免疫源性。又称CDR移植抗体。（单克隆抗体）免疫导向疗法障碍有：1，单克隆抗体均是鼠源性抗体，应用于人体内可产生人抗鼠抗体，加速了排斥反应，难以维持有效药物作用靶组织时间；2，完整的抗体分子，即Ig的相对分子质量过大，难以透穿肿瘤组织。改造：1，降低单克隆抗体的免疫原性；2，降低单克隆抗体的相对分子质量。免疫学的三大类抗体诊断药物：血清学鉴定用的抗体制剂、免疫标记技术用的抗体制剂和体内导向诊断药物。第五章植物细胞工程制药1．与动物细胞和微生物细胞相比，植物细胞具有细胞壁、液泡和质体。2．植物细胞的悬浮培养分为静止和振荡。3．植物组织和细胞培养物的生长主要取决于生长素和分裂素的比例。4．大多数植物细胞的培养基中的氮都是以NH4+和NO3-形式提供的。5．常用的对植物组织培养的表面灭菌剂是次氯酸钙、次氯酸钠和氯化汞。6．植物培养细胞重量的增加主要取决于对数期，而次级代谢产物的累积则主要在稳定期。次级代谢作用：由特异蛋白质调控产生的内源化合物的合成,代谢及分解作用的综合过程.初级代谢物：核酸、核苷、核苷酸、氨基酸、蛋白质及糖类。次级：生物碱、黄酮体、萜类、有机酸、木质素等。次级代谢产物：除了核酸、核苷、核苷酸、氨基酸、蛋白质及糖类以外，具有如下特征的成分成为次级代谢产物：有明显的分类学区域界限；其合成需在一定的条件下才能发生；缺乏明确的生理功能；是生命的多余成分。植物细胞工程：以植物细胞为基本单位，应用于细胞生物学、分子生物学等理论和技术，在立体条件下进行培养、繁殖或人为的惊细操作，使细胞的某些生物学特性按人们的意思发生改变，从而改良品种、制造新品种、加速繁育植物个体或获得有用物质的一门科学或技术。植物细胞全能性：植物体中任何一个具有完整细胞核的细胞，在一定条件下都可以重新再分化成原来的个体。分化：可以分为胚胎发生和器官发生两个阶段。前者是从精子与卵细胞结合开始，分化为幼胚，进而发育为成熟胚和种子。种子在适宜的条件下分化过程，形成根、茎、叶、花和果实。脱分化：已经分化的细胞、组织和器官在人工培养的条件下又变成未分化的细胞和组织的过程。再分化：通过脱分化诱导形成的愈伤组织在适宜的培养条件下可再分化成为胚状体或直接分化出器官。细胞培养：指利用单个细胞进行液体或固体培养，诱导其增殖及分化的培养试验。目的：得到单细胞无性繁殖系。外植体：指用于植物组织培养的器官或组织，植物的各部位如根、茎、叶、花、果、穗、胚珠、胚乳、花药和花粉等均可作为外植体进行组织培养。继代培养：由最初的外植体上切下的新增殖的组织，培养一代称为“第一代培养”，连续多代的培养就称为继代培养。植物激素：是植物代谢过程中形成的生长调节物质，在极低浓度（小于1微摩时即能调节植物的生育过程，并能从合成部位转运到作用部位而发挥作用。固体培养：是在培养基中加入一定量的凝固剂，经加热溶解后，分别装入培养的容器，冷却后凝结成固体培养基。生物反应器：人们通常将用于细胞大规模生产的装置称为发酵罐，而将主要用于生产次级代谢产物的装置称为生物反应器。1．影响植物次级代谢产物产生和累积的主要因素有哪些？影响次级代谢产物产生和累积的因素主要有：（1）、生物条件：外植体、季节、休眠、分化等；（2）、物理条件：温度、光（光照时间、光强、光质）、通气（氧气）、酸度和渗透压；（3）、化学条件：无机盐、碳源、物质生长调节剂、维生素、氨基酸、核酸、抗生素、天然物质和前体等；（4）、工业培养条件：培养罐类型、通气、搅拌和培养方式。2.各种植物细胞培养的生物反应器的特点是什么？（1）机械搅拌式生物反应器；优点是：反应器内的温度、PH值、溶氧及营养物浓度较其他反应器更易控制；缺点是：搅拌产生的剪切力对细胞造成伤害、抑制植物细胞生长和次级代谢物产生。（2）鼓泡塔生物反应器；优点：操作不易染菌，提供了较高的热量和质量传递，放大相对容易；缺点是：流体流动形式难以确定，混合不均，缺乏有关反应器内的非牛顿流体的流动与传递的数据。（3）气升式生物反应器；优点：在低剪切力下达到较好的混合和较高的氧传递效果，运动部件不易染菌，操作费用低；缺点：高密度培养时混合不够均匀；（4）转鼓式生物反应器；优点：在高密度培养时有较高的氧传递效率，缺点：难于大规模操作，放大困难。（5）固定化细胞生物反应器；优点：在一定程度上克服了植物细胞遗传和生理特性的不稳定，细胞大小的不一致性、高产细胞系的低产率等植物细胞培养中的突出难题，提高产物的产率。缺点：固定化细胞培养的先决条件是细胞代谢产物必须分泌到胞外，3.植物组织的固体培养有何缺点？（1）外植体或愈伤组织仅有一部分与培养基接触，造成培养基中营养物质的浓度差，导致生长的不平衡；（2）外植体的基部插入培养基中，因此该处呈现气体交换不畅，阻碍了组织呼吸作用的正常进行，同时也堆积生长过程中排出的有害物质。（3）容易出现极化现象，导致细胞群体的不均匀。（4）在培养过程中需要检测的一些生理特殊化指标不方便。4．植物细胞大规模培养的主要方法及其特点是什么？（1）成批培养法：最适于植物细胞培养的是气升式反应器。两步培养法，使用两个反应器第一个用于细胞生物量的累积，第二个用于次级代谢产物的生产。（2）半连续培养法：在反应器中投料和接种培养一段时间后，将部分培养液和新鲜培养液进行交换的培养方法。是一种具有定时进出装置的成批培养系统。（3）连续培养法：生产能力较高，但技术条件要求苛刻。（4）固定化培养法：固定化的优点是细胞位置固定，易于获得高密度细胞群体和维持细胞间的物理化学梯度，利于细胞组织化，易于控制培养条件及获得次级代谢产物。5．植物细胞培养的培养基由哪些主要成分组成？植物细胞或组织培养基常含有无机盐、碳源、有机氮源、植物生长激素、维生素等成分。（1）无机盐有大量元素和微量元素，30毫克每升为界限，大量有氮、硫、磷、钾、镁、钙、氯、钠。微量有铁、锰、碘、钼、铜、锌、碘。（2）碳源常用碳源为碳水化合物、肌醇、甘油、乳糖和半乳糖。天然提取物如椰子乳、对愈伤组织的诱导和培养也有重要意义。（3）植物生长调节剂常见的植物激素有生长素、分裂素、赤霉素、脱落酸、乙烯。（4）有机氮源常用蛋白质水解物或各种氨基酸，有机氮源对细胞的早期生长有利，氨基酸的加入是为了代替或增加氮源的供应。（5）维生素通常是维生素自养型，但大多数不能满足需要。B族维生素还需加入生物素和肌醇。植物组织和细胞培养的生长过程主要取决于：生长素和分裂素的比例；植物细胞大规模培养：成批培养、半连续和连续培养（悬浮培养）及固定化培养。成批培养：将培养基一次性加入反应器中，接种、培养一定时间后收获细胞的操作方式。半连续培养法：在反应器中投料和接种培养一段时间后，将部分培养液和新鲜培养液进行交换的培养方法。连续培养法：利用连续反应培养器，在投料和接种培养一段时间后，以一定速度连续采集细胞和培养液，并以同样速度供给新鲜培养基以及使细胞生长环境长期维持恒定的方法。如上，植物次级代谢产物的积累主要在细胞生长的稳定期，表明细胞成块而趋于分化时，细胞块中各个细胞处于一定理化梯度之下此现象与完整植株相似，由此提出固定化培养技术。固定化培养采用的固定化反应器有：网状多孔板、尼龙网套和中孔纤维膜；也可通过净化空气代替搅拌。固定化培养法：将细胞固定在尼龙网套内或固定于中空纤维膜反应器的膜表面，或固定于网状多孔板上，放在培养液中进行培养，或连续通入新鲜培养基，进行连续培养又连续收集培养产物，可通入净化空气代替搅拌。常用的灭菌剂有：氯酸钙、次氯酸钠和氯化汞。三、培养条件的影响可分为培养环境的内在因素（包括营养成分、生物及非生物元素、pH、通气及混合程度、与接种有关的因素）和培养环境的外部因素（剪切力、搅拌频率、温度和光）等的影响。（1）接种和诱导：（2）培养基的组成：磷、氮、铜、碳源（种类及浓度）、植物生长调节剂、O2和pH等。2.两步培养法第一步使用适合细胞生长的培养，营养丰富，称为生长培养基；第二步使用适于次级代谢产物合成的培养基，较低含量的硝酸盐和磷酸盐，并含有较低的糖分或少量的碳源，称为生产培养基。3、培养环境的外部因素（1）温度：（2）搅拌频率（3）培养容器的影响：（4）光的影响：第六章酶工程制药1．酶的固定化方法为载体结合法、交联法和包埋法。2酶的载体结合法根据结合形式的不同分为物理吸附法、离子结合法和共价结合法。3．目前工业常的酶一般是以微生物为主要来源。4筛选产酶菌的方法主要包括以下菌样采集菌种的初筛、纯化复筛和生产性能鉴定等步骤5酶在医药领域有应用主要包括疾病诊断、疾病治疗、药物生产和分析检测四个方面的6．在固定化细胞中应用最多，最有效的方法是包埋法。7．酶和细胞的固定化载体主要有吸附载体、包埋载体和交联载体三类。8．选择酶和细胞固定化方法时应考虑应用的安全性、操作中的稳定性及固定化成本。9．根据固定化酶的反应系统，其活力的测定可以分为分批测定法和连续测定法两种。10．固定化酶的偶联率小于1，扩散限制对酶活力有影响；偶联率大于1，有细胞分裂或从载体排除抑制剂等原因。11．酶化学修饰的方法有表面化学修饰、酶分子内部修饰和结合定点突变的化学修饰。固定化酶固定化酶是指限制或固定于特定空间位置的酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。模拟酶：根