抗菌素抗性标记及筛选原理大多数质粒载体都是用抗菌素抗性标记,包括氨苄青霉素抗性(Ampr)、卡那霉素抗性(Kanr)、四环素抗性(Tetr)、链霉素抗性(Strr)和氯霉素抗性(Cmlr))等。i)氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)是青霉素的衍生物,通过干扰细菌细胞壁合成的末端反应,杀死生长的细菌。细菌质粒Ampr基因编码b-内酰胺酶,特异地切割氨苄青霉素的b-内酰胺环。ii)氯霉素(chloramphenicol,Cml)通过与50S核糖体亚基结合,干扰细胞蛋白质的合成并阻止肽键的形成。杀死生长的细菌。细菌抗性原理是Cmlr编码乙酰转移酶,特异地使氯霉素乙酰化而失活。iii)卡那霉素(kanamycin,Kan)通过与70S核糖体结合,导致mRNA发生错读。杀死细菌。而Kanr编码的氨基糖苷磷酸转移酶,对卡那霉素进行修饰,阻断其与核糖体结合作用。iv)链霉素(Streptomycin,Str)通过与30S核糖体亚基结合,导致mRNA错译。杀死细菌。Strr编码一种氨基糖苷磷酸转移酶对链霉素进行修饰,阻断其与核糖体30S亚基结合作用。v)四环素(Tetracycline,Tet)通过于30S核糖体亚基结合,干扰细胞蛋白质的合成并阻止肽键的形成。杀死生长的细菌。Tetr编码特异性蛋白质,对细菌的膜结构进行修饰,组止四环素通过细胞膜进入细菌细胞内。抗生素抗性筛选原理是:不带有抗菌素抗性基因的受体菌不能在含有抗菌素的培养基(选择培养基)中生长。当带有抗菌素抗性基因的载体进入受体菌后,受体菌才能生长。