药分实验讲义(含四个实验)

1药物的性状、鉴别与检查实验一葡萄糖的性状、鉴别和检查一、目的要求1.掌握药品性状测定方法和性状的正确描述。2.掌握药品的常用鉴别方法和原理。3.掌握药品中一般杂质检查的项目、方法原理和限量计算方法。4.了解药品鉴别、检查的目的和意义。二、基本原理1.氯化物检查法氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银作用，生成氯化银微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下用同法处理生成的氯化银浑浊程度相比较，测定供试品中氯化物的限量。Cl－＋AgNO3AgCl↓＋NO3－2.硫酸盐检查法药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡而显白色浑浊液，同一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在同样条件下，用同法处理生成的浑浊比较，判断药物中含硫酸盐的限量。SO42－＋BaCl2BaSO4↓＋2Cl－3.重金属检查法重金属是指在弱酸性（pH3~3.5）溶液中，能与硫代乙酰胺或在弱碱性溶液中与硫化钠作用生成硫化物的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、铋、砷、锑、锡、锌、钴、镍等。在药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅又易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。由于硫代乙酰胺（thioacetamide）在弱酸性（pH约3.5）溶液中水解，产生硫化氢，可与金属离子作用，呈有色硫化物的均匀沉淀，可与对照标准按同法处理比较。CH3CSNH2＋H2OCH3CONH2+H2SPb2＋＋H2SPbS↓4.砷盐检查法中国药典主要采用古蔡氏（Gutzeit）法检查砷盐。其原理是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中的微量砷盐作用生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞（或氯化汞）试纸，2产生黄色至棕色的砷斑，与定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，可判定药物中含砷盐的限量，其反应如下：AsO33－＋3Zn＋9H＋AsH3↑＋3Zn2+＋3H2OAsH3＋2HgBr22HBr＋AsH(HgBr)2黄色AsH3＋3HgBr23HBr＋As(HgBr)3棕色五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但生成砷化氢的速度较三价砷慢，故在反应液中加入碘化钾及酸性氯化亚锡将五价砷还原为三价砷，碘化钾被氧化生成的碘又可被氯化亚锡还原为碘离子。AsO43－＋2I－+2H＋AsO33－＋I2＋H2OAsO43－＋Sn2＋＋2H＋AsO33－＋Sn4＋＋H2OI2＋Sn2＋2I－＋Sn4＋溶液中的碘离子，与反应中产生的锌离子能形成络合物，使生成砷化氢的反应不断进行。4I－＋Zn2＋ZnI42－氯化亚锡与碘化钾存在，可抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑，在试验条件下，100g锑存在不会干扰测定。氯化亚锡又可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续地发生。三、实验方法本品为D-（+）-吡喃葡萄糖一水合物。1.性状（1）外观与臭味本品为无色结晶或白色结晶性或颗粒性粉末；无臭，味甜。（2）溶解性本品在水中易溶，在乙醇中微溶。（3）比旋度取本品约10g，精密称定，置100ml量瓶中，加水适量与氨试液4d，溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，在25℃时，依法测定（中国药典2000年版二部附录ⅥE），比旋度为+52.5°至+53.0°。2.鉴别（1）化学方法取本品约0.2g，加水5ml溶解后，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。OOHOHOHOHOHH2O（Glucose，C6H12O6·H2O，FW＝198.17）·葡萄糖3（2）光谱方法本品的红外吸收图谱应与对照的图谱一致。3.检查（1）酸度取本品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）4d，应显粉红色。（2）氯化物取本品0.60g，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准氯化钠溶液（10gCl－/ml）6.0ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较，供试溶液不得比对照溶液更浓（0.010%）。（3）硫酸盐取本品2.0g，加水溶解使成约40ml（溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性）；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液（100gSO42－/ml）2.0ml，置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5ml，用水稀释使成50ml，充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较，供试溶液不得比对照溶液更浓（0.010%）。（4）重金属取50ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液（10gPb/ml）一定量与稀醋酸溶液（pH3.5）2ml后，加水稀释成25ml。取本品4.0g，置于乙管中，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml；若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其它无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深（含重金属不得过百万分之五）。（5）砷盐取本品2.0g置试砷瓶中，加水23ml溶解后，加浓盐酸5ml，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴。在室温放置10分钟后，加锌粒2g，迅速将瓶塞塞紧（瓶塞上已置有醋酸铅棉花及溴化汞试纸的试砷管），并在25~40℃的水浴中反应45分钟，取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与标准砷溶液一定量制成的标准砷斑比较，颜色不得更深，应符合规定（0.0001%）。4标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液（1g/ml）2ml，置另一试砷瓶中，加浓盐酸5ml与蒸镏水21ml，照上述方法，自“加碘化钾试液5ml………”起依法操作，即得标准砷斑。四、操作要点与实验注意事项1.纳氏比色管的选择与洗涤比色或比浊操作，一般均在纳氏比色管中进行，因此在选用比色管时，必须注意使样品与标准管的体积相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色，管上的刻度均匀，如有差别，不得相差2mm。比色管洗涤时避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁划出条痕影响比色或比浊。2.平行原则比色、比浊、砷盐检查时，样品液与标准液的实验条件应尽可能一致，平行操作。若未按平行原则操作即实验条件不同时，配制样品液与对照液，易导致二管显色或产生浑浊时间不一。3.严格按操作步骤进行试验，注意各种试剂的加入次序。如氯化物检查时，加适量蒸馏水使成约40ml后，再加AgNO3试液。4.比色、比浊前应使比色管内试剂充分混匀，主要利用手腕转动360°的旋摇操作来完成。比色方法是将两管同置于白色背景上，从侧面观察；比浊方法是将两管同置于黑色或白色背景上，自上而下地观察。比色管旋摇操作时应注意安全，以免碰破比色管。5.重金属检查中，应注意：（1）根据杂质限量计算公式，计算出标准铅溶液的取用量。（2）样品管中“加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml”实验时宜采用“加水适量溶解样品，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，再加水使成25ml”，更便于操作，加醋酸盐缓冲液前，注意比较样品管与标准管的溶液颜色，若样品管带色，应在对照标准管中滴加少量稀焦糖液，使两管的颜色一致，然后依法操作。如在标准管（甲管）加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取该药品项下规定的二倍量的供试品和试液，加水使成30ml，将溶液分成甲乙二等分，乙管中加水稀释成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，经滤膜（孔径3m）滤过，然后甲管中加入标准铅溶液一定量，加水使成25ml；再分别在乙管中加硫代乙酰胺试液2ml，甲管中加水2ml，依法比较，即得。（3）标准铅溶液应在临用前精密称取标准铅贮备液新鲜配制，以防止铅的水解而造成误差。6.砷盐检查中，应注意：5（1）取用的标准管与样品管应力求一致，管的长短、内径一定要相同，以免生成的色斑大小不同，影响比色。（2）预先安装好试砷管。醋酸铅棉花用于吸收硫化氢（锌粒及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中即产生硫化氢），从而免除了与溴化汞作用生成硫化汞色斑的干扰。（3）锌粒的大小以通过20目筛为宜，过细则作用太快，过粗则作用太慢，为此可采用锌粒与锌粉各一半加入的方式。（4）加锌粒后，应立即将试砷管盖上，塞紧，以免AsH3气体逸出。如果试砷管口试纸未装就加锌粒加塞，易发生砷化氢逸失，应重做。（5）样品操作中“加水23ml溶解后，加浓盐酸5ml与水适量使成28ml”为简化操作，正常操作为“加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml与溴化钾试液0.5ml，置水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时补充蒸散的水分，放冷，加盐酸5ml与水适量使成28ml”。7.正确使用吸量仪器，爱护精密仪器。五、思考题1.鉴别检查在药品质量控制中的意义及一般杂质检查的主要项目是什么？2.比色、比浊操作应遵循的原则是什么？3.计算重金属检查中，标准铅溶液的取用量。4.古蔡氏检砷法中所加各个试剂的作用与操作注意点是什么？5.古蔡氏检砷法，能适用于所有的药物吗？为什么？药物的含量测定实验二阿司匹林的质量分析一、目的要求1.掌握质量检验的项目与方法。2.掌握阿司匹林分析的操作条件及要点。二、基本原理阿司匹林原料药中的主要成分为乙酰水杨酸，其Ka为3.27×10－4，故能用标准碱液直6接滴定，计量点时pH值为8.2（按0.1mol/L浓度计），以酚酞为指示剂指示终点。三、实验方法本品为2-（乙酰氧基）苯甲酸。含C9H8O4不得少于99.5%。1.性状本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭或微带醋酸臭，味微酸；遇湿气即缓缓水解。本品在乙醇中易溶，在氯仿或乙醚中溶解，在水或无水乙醚中微溶；在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液中溶解，但同时分解。2.鉴别（1）取本品约0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。（2）取本品约0.5g，加碳酸钠试液10ml，煮沸2分钟后，放冷，加过量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并发出醋酸的臭气。（3）本品的红外吸收光谱图应与对照的图谱一致。3.检查溶液的澄清度取本品0.50g，加入温热至约45℃的碳酸钠试液10ml溶解后，溶液应澄清。游离水杨酸取本品0.10g，加乙醇1ml溶解后，加冷水适量使成50ml，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液［取盐酸溶液（9→100）1ml，加硫酸铁铵指示液2ml后，再加水适量使成100ml］1ml，摇匀；30秒种内如显色，与对照液（精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，摇匀，再加水使成1000ml，摇匀，精密量取1ml，加乙醇1ml、水48ml与上述新制的稀硫酸铁铵溶液1ml，摇匀）比较，不得更深（0.1％）。易炭化物取本品0.5g，加硫酸［含H2SO494.5％~95.5%(g/g)］5ml后，与对照液（取比色用氯化钴液0.25ml、比色用重铬酸钾液0.25ml、比色用硫酸铜液0.40ml，加水使成5ml）COOHOCOCH3+NaOHOCOCH3COONa+H2OOHOOCH3O（Aspirin，C9H8O4，FW=180.16）阿司匹林7比较，不得更深。炽灼残渣取本品1.0~2.0g，置已炽灼至恒重的坩锅中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温；加硫酸0.5ml~1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700℃~800℃炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在700℃~800℃炽灼至恒重，即得。炽灼残渣限量不得过0.1％。100%样品重重残渣及坩锅重－空坩锅＝炽灼残渣重金属取本品1.0g，加乙醇23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，依法检查（见实验一），