ThermoScientificGeneJET胶回收和DNA净化微型试剂盒

1产品信息ThermoScientificGeneJET胶回收和DNA净化微型试剂盒#K0831,#K0832批号有效期分析证书根据本手册中提供的方法，通过从200µl反应混合液中分离3kb的DNA片段以及从1％的琼脂糖凝胶中回收3kb的DNA片段来对该试剂盒进行检测。所纯化和回收DNA的质量已通过分光光度检测和琼脂糖凝胶电泳方法的验证。质量授权人：JurgitaZilinskiene3目录页码试剂盒组成................................................................................................................................4储存和稳定性............................................................................................................................4产品介绍....................................................................................................................................4基本原理....................................................................................................................................5重要提示....................................................................................................................................5所需额外试剂和仪器................................................................................................................5纯化方案....................................................................................................................................6问题解决方案............................................................................................................................9安全信息..................................................................................................................................104试剂盒组成GeneJET胶回收和DNA净化微型试剂盒50preps#K0831250preps#K0832结合缓冲液5.5ml28ml提取缓冲液11ml55ml预漂洗缓冲液（浓缩）10ml44ml漂洗缓冲液（浓缩）2×7ml2×40ml洗脱液（10mMTris-HCl，PH8.5）1.5ml4×1.5mlDNA微型纯化柱&收集管50250储存和稳定性GeneJET胶回收和DNA净化微型试剂盒室温下（15-20℃）可储存12个月。产品介绍GeneJET胶回收和DNA净化微型试剂盒为三合一型试剂盒，旨在从PCR产物、酶切反应混合物及经Tris醋酸(TAE)或Tris硼酸(TBE)电泳缓冲液电泳的标准或低熔点琼脂糖凝胶中快速高效地回收及纯化DNA片段。试剂盒将方便的离心柱技术与硅膜的选择性结合能力相结合，无需繁琐的树脂纯化操作和有毒的酚氯仿抽提。GeneJET胶回收和DNA净化微型试剂盒能有效地去除PCR和其它反应混合物中的引物、引物二聚体、dNTPs、未结合的标记核苷酸、酶和盐分。试剂盒可用于纯化大小为100bp到20kb的DNA片段。对于400bp-4kb范围大小的DNA片段，回收率为90-100％。每个微型纯化柱拥有结合多至10µgDNA的能力，且从酶反应混合物中纯化DNA仅需3.5分钟，从凝胶中回收DNA仅需15分钟。回收的DNA可直接用于下游的常规实验，如测序、限制性酶切、PCR、qPCR、标记、连接、体外转录、blotting或原位杂交。5基本原理GeneJET胶回收和DNA净化微型试剂盒基于了DNA在离液盐存在下与硅膜结合的能力。DNA吸附到硅膜上，而其它物质则流穿离心柱。另外，通过电泳分离DNA片段后，从琼脂糖凝胶中切出目的条带，将其溶于提取缓冲液中，加入乙醇混合后转入DNA微型纯化柱中。依次加入预漂洗缓冲液和漂洗缓冲液以除去杂质，纯化的DNA可用洗脱缓冲液高效洗脱出来。纯化的DNA可用于下游各种类型的实验。重要提示首次使用前，按下列推荐体积向预漂洗缓冲液（浓缩）和漂洗缓冲液（浓缩）中加入无水乙醇（96-100％）：50preps#K0831250preps#K0832预漂洗缓冲液（1瓶）漂洗缓冲液（2瓶）预漂洗缓冲液（1瓶）预漂洗缓冲液（2瓶）浓缩液10ml7ml44ml40ml乙醇（96-100％）2.5ml35ml11ml200ml总体积12.5ml42ml55ml240ml加入无水乙醇后，请在试剂瓶做好已加入乙醇标记。每次使用前检查试剂盒所有溶液其是否出现沉淀。若出现沉淀，加热至37℃以重新溶解，冷却至室温（15-25℃）时再使用。由于结合缓冲液和提取缓冲液含有刺激性物质，接触皮肤和吞食有害，使用时请戴好手套。（参考第10页的安全信息）若回收的DNA片段直接用于测序，电泳时请勿重复使用电泳缓冲液。所需额外试剂和仪器不含核酸酶的水或TE缓冲液乙醇96-100％移液器离心机1.5ml或者2ml离心管金属浴或水浴锅（DNA凝胶回收时需要）一次性手套6纯化方案注：开始前请阅读第3页的重要提示。所有的纯化步骤在室温下（15-25℃）进行。如果DNA片段≥10kb，所有的离心步骤都不少于2分钟。A.从酶反应中纯化DNA的标准方案步骤过程1使用不含核酸酶的水或TE缓冲液将反应混合液的体积调至200µl。2加入100µl的结合缓冲液，通过移液器吹吸混合均匀。3加入300µl的乙醇（96-100％），通过移液器吹吸混合均匀。4将混合液转移至DNA微型纯化柱（预装入收集管）中，14000×g离心30-60秒。弃掉流穿液，将微型纯化柱放回收集管中。注：如果DNA片段≥10kb，将纯化柱以14000×g离心2分钟。5向DNA微型纯化柱中加入700µl漂洗缓冲液（用无水乙醇稀释，见第5页）。14000×g离心30-60秒，弃掉流穿液，将微型纯化柱放回收集管中。注：如果DNA片段≥10kb，将纯化柱以14000×g离心2分钟。6重复步骤5。7将空的DNA微型纯化柱再次以14000×g的速度离心1分钟，以完全除去残留的漂洗缓冲液。注：此步骤是为了避免回收的DNA中残留乙醇。若DNA中残留乙醇，可能会抑制下游的酶促反应。8将DNA微型纯化柱转入新的1.5ml离心管（未提供）。9向DNA微型纯化柱膜中心加入10µl洗脱缓冲液。14000×g离心1分钟。注：如果DNA片段≥10kb，洗脱体积可增大至15-20µl，以获得最大的DNA产量。可以使用更少量体积的洗脱缓冲液（6-10µl）以浓缩洗脱的DNA，但注意洗脱体积10µl会稍降低DNA的产量。当纯化较大量的DNA（5µg）时，洗脱体积可加倍或进行两次洗脱。10弃掉纯化柱，将纯化的DNA储存于-20℃。7B.PCR产物纯化、去除引物方案步骤过程1使用不含核酸酶的水或TE缓冲液将反应混合液的体积调至200µl。2加入100µl的结合缓冲液，通过移液器吹吸混合均匀。3加入300µl的乙醇（96-100％），通过移液器吹吸混合均匀。4将混合液转移至DNA微型纯化柱（预装入收集管）中，14000×g离心30-60秒。弃掉流穿液，将微型纯化柱放回收集管中。注：如果DNA片段≥10kb，将纯化柱以14000×g离心2分钟。5向DNA微型纯化柱中加入200µl预漂洗缓冲液（用无水乙醇稀释，见第5页）。14000×g离心30-60秒，弃掉流穿液，将微型纯化柱放回收集管中。注：如果DNA片段≥10kb，将纯化柱以14000×g离心2分钟。6向DNA微型纯化柱中加入700µl漂洗缓冲液（用无水乙醇稀释，见第5页）。14000×g离心30-60秒，弃掉流穿液，将微型纯化柱放回收集管中。注：如果DNA片段≥10kb，将纯化柱以14000×g离心2分钟。7重复步骤6。8将空的DNA微型纯化柱再次以14000×g的速度离心1分钟，以完全除去残留的漂洗缓冲液。注：此步骤是为了避免回收的DNA中残留乙醇。若DNA中残留乙醇，可能会抑制下游的酶促反应。9将DNA微型纯化柱转入新的1.5ml离心管（未提供）。10向DNA微型纯化柱膜中心加入10µl洗脱缓冲液。14000×g离心1分钟。注：如果DNA片段≥10kb，洗脱体积可增大至15-20µl，以获得最大的DNA产量。可以使用更少量体积的洗脱缓冲液（6-10µl）以浓缩洗脱的DNA，但注意洗脱体积10µl会稍降低DNA的产量。当纯化较大量的DNA（5µg）时，洗脱体积可加倍或进行两次洗脱。11弃掉纯化柱，将纯化的DNA储存于-20℃。8C.DNA凝胶回收方案步骤过程1用干净的手术刀或刀片切下200mg含有目的DNA片段的凝胶。切胶时尽量切出多余的凝胶。将含DNA的胶块置于1.5ml离心管。注：若回收的DNA片段用于克隆，须避免紫外照射损伤DNA。尽量减少紫外暴露时间或者紫外照射时将凝胶置于玻璃或塑料板上。2加入200µl的提取缓冲液，通过移液器吹吸混合均匀。3将凝胶混合物在50-58℃条件下孵育10min，直到胶块完全溶解。每隔几分钟颠倒离心管，以加快溶解过程。必须确保凝胶完全溶解。注：若凝胶浓度1％，延迟孵育时间至15分钟。4加入200µl的乙醇（96-100％），通过移液器吹吸混合均匀。5将混合液转移至DNA微型纯化柱（预装入收集管）中，14000×g离心30-60秒。弃掉流穿液，将微型纯化柱放回收集管中。注：如果DNA片段≥10kb，将纯化柱以14000×g离心2分钟。6向DNA微型纯化柱中加入200µl预漂洗缓冲液（用无水乙醇稀释，见第5页）。14000×g离心30-60秒，弃掉流穿液，将微型纯化柱放回收集管中。注：如果DNA片段≥10kb，将纯化柱以14000×g离心1-2分钟。7向DNA微型纯化柱中加入700µl漂洗缓冲液（用无水乙醇稀释，见第5页）。14000×g离心30-60秒，弃掉流穿液，将微型纯化柱放回收集管中。注：如果DNA片段≥10kb，将纯化柱以14000×g离心1-2分钟。8重复步骤7。9将空的DNA微型纯化柱再次以14000×g的速度离心1分钟，以完全除去残留的漂洗缓冲液。注：此步骤是为了避免回收的DNA中残留乙醇。若DNA中残留乙醇，可能会抑制下游的酶促反应。10将DNA微型纯化柱转入新的1.5ml离心管（未提供）。11向DNA微型纯化柱膜中心加入10µl洗脱缓冲液。14000×g离心1分钟。注：如果DNA片段≥10kb，洗脱体积可增大至15-20µl，以获得最大的DNA产量。可以使用更少量体积的洗脱缓冲液（6-10µl）以浓缩洗脱的DNA，但注意洗脱体积