Waters-1515-2414-凝胶渗透色谱(GPC)操作规程

Waters1515-2414凝胶渗透色谱（GPC）操作规程一、溶剂和样品准备1.选择溶剂：尝试和选择对聚合物具有良好溶解性的THF或者DMF作为溶剂；2.溶剂处理：采用溶剂过滤系统（真空抽滤）对色谱纯溶剂进行过滤和脱气处理；3.样品配制：选用处理后的溶剂配置待测样品溶液，样品体积≥4mL；样品浓度根据估算的分子量确定（Mw＝103～104，浓度为1.5～2mg/mL；Mw＝104～105，浓度为1～1.5mg/mL；Mw＝105～5x105，浓度为0.5～1mg/mL；Mw＝5x105～106，浓度为0.1～0.5mg/mL；Mw＞106，浓度为0.05～0.1mg/mL）；4.样品溶解：提供足够时间使聚合物完全溶解（一般在室温下静止过夜）；注：可轻微摇动样品以促进溶解但不可剧烈摇动；5.样品过滤：样品溶解后，采用一次性微孔滤膜（孔径0.22μm）对样品溶液进行过滤，保存滤液待用；注意：每个样品需要准备两个样品瓶（分别用于溶解样品和放置过滤后的溶液）和两个注射器（分别用于过滤和进样）二、仪器启动1.将经过真空抽滤的溶剂倒入溶剂存贮瓶中；2.依次打开稳压电源－计算机－泵－柱温箱－示差折光检测器开关；3.启动Breeze软件，输入用户名Breeze；选择1515-2414系统，确定；4.在Breeze软件系统中点击运行样品－点击流量图标设置泵流速0.2mL/min，注意：设置变化时间为2min，即以0.1mL/min缓慢增加流速，使色谱柱所受压力缓慢变化；5.在示差折光检测器面板上，点击TempºC设置温度40ºC（set/control）；再点击Home－Shift1－显示Purge图标；此时示差检测器为Purge流路，冲洗示差检测器的样品池及参比池；点击平衡系统/监视基线图标－调用PS-purge方法－点击平衡/监视器，监控基线；Purge时间为10h；6.10h后（此时基线已稳定），在运行样品界面点击设置泵流速1mL/min（设置变化时间8min，以0.1mL/min缓慢增加流速），平衡0.5h；7.在示差折光检测器面板上，点击Shift1，取消Purge（回到正常测样流路），平衡3～5min；再依次点击Diag－OptimizeLED(16~17正常)－Enter－Home；三、样品测试1.点击Breeze软件系统中的单进样图标－输入待测样品名－选择功能（宽分布进样）－选择方法组PS－输入进样体积（20μL）及样品测试时间（45min）－点击单进样，准备进样；此时窗口显示等待进样；2.选用1mL注射器，安装色谱专用平头针头，采用过滤后样品溶液润洗进样注射器后，再抽取过滤后的样品溶液；将针口朝上排出气泡（注意针头不要有液珠，否则会污染进样口，必要时用镜头纸擦拭）；将进样阀门拨到Inject位置（即垂直状态），将进样注射器插入进样器内并插到底（不用过于用劲），进样；进样结束后迅速将进样阀门拨到Load位置；此时窗口显示进样正在运行；注意：进样结束后，使用抽滤后的溶剂及时清洗针头；3.到设定的运行时间后，仪器自动停止数据采集，此时窗口显示单进样结束；20min后，按步骤1和2进下一个样品；注意：实验过程中及时观察溶剂存贮瓶中溶剂量；如需补加，必须在仪器停止数据采集时（最好在泵流速为0时）添加溶剂，且砂滤头必须在液面下。三、数据处理1.在Breeze软件系统中点击查询数据；2.在通道界面选中要处理的宽分布未知样－右键点击查看；3.在查看窗口点击文件－打开－处理方法－（选择最新工作曲线的方法名，THF体系选用33，DMF体系选用37）－点击处理参数图标－选择编辑现有的GPC方法并保留校正，确定－根据处理区间确定积分区域（其余不变）－点击下一步直至完成－复制曲线－点击工具栏中结果图标－查看样品的分子量、分子量分布指数、以及分布图，根据需要复制GPC曲线，以及调取相关数据（TEXT文本格式）；4.退出时点击文件－保存－全部；5.返回到Breeze软件系统中点击查询数据－在结果界面点击更新－出现刚保存的数据－选中该样品－点击工具栏中预览报告图标－点击文件－打印报告－相关数据即存储为PDF文件；6.实验结束后，请使用格式化U盘将相关数据文件及时拷出。四、关机对GPC仪器而言，不要时开时停。为此，建议第二天的测试者在上一位同学测试结束后，将溶剂过滤后加入到溶剂储存瓶中（溶剂量不少于100mL），调整变化时间将泵流量从1mL/min降至0.1mL/min，走Purge流路。同时还注意：废溶剂接收瓶有足够的空间且两根流路出口管均插入到废溶剂瓶中。如果直接关机，关机步骤如下：1.在样品测试结束后，必须在1.0mL/min流速下让流动相继续流0.5h；2.设置变化时间（10min），以0.1mL/min缓慢递减，将泵流速从1.0mL/min降至0；3.关闭泵、示差检测器、柱温箱的电源开关；4.在计算机上关闭操作程序；关闭计算机；5.关闭稳压电源。