临床基因扩增实验室验收要求和要点

临床基因扩增检验实验室验收要求和要点宁夏回族自治区人民医院临床医学检验诊断中心2临床基因扩增检验实验室申报及验收程序二级以上医院填写《临床基因扩增检验实验室设置申请书》省卫计委医政处相应的卫生行政部门省临床检验中心初步技术审核合格者开始试运行（三个月），同时报省卫计委备案验收合格后，授予验收合格证书（证书有效期五年）（省级医疗机构）（地、市(县)级医疗机构）3验收依据《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》卫办医政发〔2019〕194号临床基因扩增检验实验室（血站核酸检测）工作导则《临床基因扩增检测实验室技术验收报告》4为什么要进行验收？方法敏感技术要求高存在问题多假阴性、假阳性不规范人员素质5验收要达到的目的保证检测质量防止实验室污染建立LAB内部质量管理模式尝试强制性实验室认可67质量管理的内涵写你所做的做你所写的记录你已做的分析你已做的8PCR实验室区域设计原则原则上应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这4个区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的分隔状态，不能有空气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例如使用实时荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。9PCR实验室的空气流向临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。10PCR实验室工作基本原则进入各工作区域应当严格按照单一方向进行各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品不得混用。不同工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。PCR实验室工作基本原则工作结束后，必须立即对工作区进行清洁。实验台表面应可耐受次氯酸钠等化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外灯（254nm波长），在工作完成后调至实验台上60～90cm内照射。由于扩增产物仅几百或几十碱基对（bp），对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间，最好是照射过夜。实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2019）。12PCR实验室技术验收内容实验室设置和设备设施和环境人员设备管理和质控物检测过程标本管理记录报告质量控制抱怨等十章共三十七条附件1临床基因扩增检验实验室技术验收表序号验收内容验收意见符合基但本有符缺合陷不符合缺此项暂不需考核评论与说明1实验室设置和设备1.1实验室的规范化分区:原则上应分为四个区,但如使用全自动扩增检测仪,区域可适当合并1.2各工作区的明确标记1.3实验室应配备开展临床基因扩增检测所需的所有仪器设备（包括质控物）。保证《临床基因扩增检验实验室管理办法》和《临床基因扩增检验实验室工作导则》的有关要求得到满足。14临床基因扩增实验室设置的一般原则各区独立注意风向因地制宜方便工作“十六字口诀”15理想的PCR实验室设置A产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊工作流向扩增区标本制备区试剂准备区16产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊工作流向扩增区标本制备区试剂准备区理想的PCR实验室设置B本图来自李金明教授17试剂准备区标本制备区扩增及产物分析区门门门门空气流向空气流向+空气流向++试剂准备区标本制备区扩增及产物分析区门门门门空气流向空气流向空气流向本图来自李金明教授18走廊走廊试剂准备区标本制备区扩增和产物分析区空气流向空气流向空气流向其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室本图来自李金明教授门试剂准备区标本制备区扩增及产物分析区门门门空气流向空气流向+空气流向++本图来自李金明教授20门试剂准备区标本制备区扩增区产物分析区外走廊门门门门试剂准备区标本制备区扩增及产物分析区外走廊门门门门AB错误的设置21临床标本的接收应在四个测定区域之外的地方或适合的地方。接收的标本应收集在原始容器中，不能接收从其它检测如生化、免疫检验等分出来的标本在核酸提取时，由基因扩增检验实验室人员将标本带入至标本制备区。(a)混匀器；(d)生物安全柜(c)水浴箱和/或加热模块(a)高速台式冷冻离心机(a)冰箱(2~8℃和-20℃或-80℃)；标本制备区1.5a.专用实验记录本、记号笔等。a.消耗品（带滤心吸头、一次性手套等）；a.专用工作服和工作鞋；a.可移动紫外灯；a.微量加样器；a.混匀器；a.冰箱；试剂贮存和准备区1.4(a)混匀器；(d)生物安全柜(c)水浴箱和/或加热模块(a)高速台式冷冻离心机(a)冰箱(2~8℃和-20℃或-80℃)；标本制备区1.5a.专用实验记录本、记号笔等。a.消耗品（带滤心吸头、一次性手套等）；a.专用工作服和工作鞋；a.可移动紫外灯；a.微量加样器；a.混匀器；a.冰箱；试剂贮存和准备区1.4(a)专用实验记录本、记号笔等。(a)消耗品（带滤心吸头、一次性手套等）；(a)专用工作服和工作鞋；(a)可移动紫外灯；(a)微量加样器；(a)专用实验记录本、记号笔等。(a)消耗品（带滤心吸头、一次性手套等）；(a)专用工作服和工作鞋；(a)可移动紫外灯；(a)微量加样器；23试剂储存和准备区功能：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。试剂准备区的仪器设备主要有冰箱、微量加样器、混匀器、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品（带滤芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记录笔。加样器应定期校准。24标本制备区功能：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。25标本制备区标本制备区内的仪器设备主要有生物安全柜、加样器、高速台式冷冻离心机、水浴箱和/或加热模块、混匀器、冰箱、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品（带滤芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记录笔。加样器应定期校准。如需处理大分子DNA，应当具有超声波水浴仪。加热模块和水浴应使用已经校准的温度计定期对所设置的温度进行校准。1.6扩增区(a)核酸扩增仪;(b)微量加样器；(c)可移动紫外灯；(d)专用工作服和工作鞋；(e)消耗品（带滤心吸头、一次性手套等）；(f)专用实验记录本、记号笔等。27扩增区功能：cDNA合成、DNA扩增及检测。扩增区的主要仪器就是核酸扩增热循环仪，该仪器需进行校准。28产物分析区功能：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。本区是唯一能打开扩增后反应管的地方。由于本工作区应设置为负压状态，空气流向为由外向内，以防止扩增产物气溶胶流出，故本区可无缓冲间。本区所使用的仪器设备可能有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱、测序仪等。酶标仪应定期校准，洗板机每次使用完都应进行清洗，其它如加样器和水浴箱可按有关方法进行校准。核酸扩增后产物的分析方法多种多样，如膜上或微孔板或芯片上探针杂交方法（放射性核素标记或非放射性核素标记）、直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、Southern转移、核酸测序方法、质谱分析等。本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，必须使用洗板机洗板，废液必须收集至1mol/LHCl中，并且不能在实验室内倾倒，而应当至远离PCR实验室的地方弃掉。用过的吸头也必须放至1mol/LHCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚烧。30规定应具有的SOP仪器设备的维护保养程序、仪器设备的校准程序、仪器设备的操作程序、临床标本的收集程序、临床标本的处理（核酸纯化）程序、临床标本的保存程序、核酸扩增及产物分析检测的操作程序、试剂的质检操作程序、消耗品购置验收质检程序、废弃物的处理程序、内务管理程序、室内质量控制程序、抱怨处理程序。31实验室设置和设备检查重点实验室的规范化分区及相应标识仪器设备及在用标识保持实验室空气流向的措施各区物品的专用标识2.设施和环境2.1实验室的设施、工作区域、能源、照明、采暖、通风等应便于检测工作的正常进行。通风问题较多：排风压力设置不合理表面上做到物理隔离，实际暗藏缝隙2.2实验室应配备温度湿度计、稳压电源等。湿度容易忽略2.3进入和使用实验室各区域应有明确的限制和控制。2.4应有实验室“内务管理”（如人员流动、清洁等）制度；2.5实验室应有关化学试剂管理、废弃血清处理、生物防护等的措施实验室清洁SOP要点目的:为了使实验室台面、地面和仪器设备在使用后，处于洁净和无感染性状态，以防止出现因仪器设备不洁影响检测或仪器使用寿命；防止因实验室台面、地面和仪器设备的生物传染危险性造成实验室人员感染，以及防止实验室交叉污染而出现假阳性结果等。适用范围应包括实验室地面、台面和仪器设备等的清洁。按实验室台面、地面和仪器设备分开来写各自的具体清洁方法，要具体而又有可操作性。应规定工作人员在清洁时，必须按试剂准备区标本制备区扩增(及产物分析)区方向进行，不得逆行规定每一工作区域的清洁必须使用专用的清洁用具，不得混用规定有潜在生物传染危险性材料溅出时的消毒清洁方法343.人员3.1实验室应配备足够数量的人员;这些人员必须经过培训，并取得上岗证。人员不够，缺能力评估3.2实验室应有培训计划和措施，保证其技术人员得到及时培训。无培训计划和措施3.3实验室应保存其技术人员有关资格证书（如上岗证）、培训、技能和经历、发表论文、科研成果等技术业绩档案。35检测技术人员要求---人员培训及能力评估培训：符合资质的人员还要接受实验室生物安全以及厂家的上岗前仪器设备操作、维护及校准等的培训。技术培训内容应覆盖工作人员所涉及的所有工作范畴，培训的评估结果是确定人员是否适合其岗位的依据。能力评估：实验室应建立操作人员能力评估机制。每年至少实施一次人员的能力评估，以评估其临床基因扩增检测工作的胜任程度。参照评估结果制定人员持续培训计划。操作人员的操作误差分析、检测过程变更可作为培训需求纳入培训活动，需记录人员的能力评估过程。应有培训和能力评估的记录4．设备管理和质控物4.1所有设备应有维护程序文件；*如果任一设备有问题应立即停止使用，并加上明显标识，如可能应将其贮存在规定的地方直至修复；*修复的设备必须经校准、检定（验证）或检测满足要求后方能再次投入使用；*实验室应检查由于上述缺陷对以前所进行的检测工作的影响。4.2加样器、温度计、扩增仪和酶标仪等应有明显的标识表明其校准状态。加样器、温度计：有些实验室不校准4.3应保存扩增仪等设备的档案，档案内容应包括：（a）设备的名称37设备管理所有设备应得到正确维护，应有设备维护程序文件；加样器、温度计、扩增仪等设备应有明显标识表明其校准状态；实验室应保存每一台仪器设备的档案材料，对档案材料的具体内容作详细规定。38检测系统的确认、运行与维护检测系统的确认实验室必须实施检测系统的确认活动。确认活动包括检测系统购置前的设计确认，使用前的安装确认、运行确认和性能确认，检测系统使用后的性能监控及再确认。除应提供厂商的安装确认报告之外，实验室还应对每个检测系统进行分析灵敏度、重复性等性能进行验证。