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悬液芯片多重分析的领先者Bio-Plex悬液芯片技术应用指南多重分析的领先者Bio-Plex悬液芯片技术应用指南多重分析的领先者1Bio-Plex悬液生物芯片系统...................................12Bio-Plex技术进展.................................................23什么是Bio-Plex技术.........................................34综述Bio-Plex悬液芯片技术在生命科学与医学研究中的应用................................................................65Bio-Plex磁性和非磁性测定人细胞因子Ⅰ组的方法比较..............................................................166多重磷蛋白分析非小细胞肺癌细胞下游表皮生长因子受体蛋白磷酸化和吉非替尼抑制的检测........187利用Bio-Plex磷酸化蛋白试剂盒研究采取西妥昔单抗治疗的癌症病人的表皮生长因子受体信号........21目录8两种基于磁性微球人细胞因子蛋白检测平板的研发与验证..................................................................249一种新型磁性微球复合免疫球蛋白同型分析方法的开发和验证..........................................................2710一种高精度和高灵敏度的人类细胞因子磁性微球检测方法的研发与验证...........................................3111利用Bio-Plex人细胞因子27-Plex检测平板(Bio-PlexHumanCytokine27-PlexPanel测定Caspase-1依赖的细胞因子分泌物.....................3412Bio-Plex检测试剂盒订购指南.............................3713Bio-Plex术语......................................................40Bio-Plex悬液芯片技术应用指南11多重分析的领先者完整的产品特点Bio-Plex系统由一个完整的实验流程所必需的所有产品组成从样品准备试剂和稀释试剂到复杂的数据分析软件完全整合的系统确保了精确的,可重现的检测结果,并通过统一的服务和技术支持保证了系统的测试效率验证工具Bio-Plex悬液芯片系统符合21CFR的实验工具定制的多重混合服务现场维护检测开发试剂盒软件预混的检验经验证的仪器Bio-Plex悬液芯片系统组件4.平面显示器5.PC6.反应试剂盒7.清洗工作站8.细胞裂解试剂盒9.单重预混合多重检测试剂盒10.COOH羧基微球1.芯片阅读仪2.微孔板平台3.高通量液流系统(HTF)11.校验试剂盒12.维护校正校验(MCV)板13.校正试剂盒12345111012138967Bio-Plex®悬液芯片系统Bio-Plex系统将先进的软件包系统校检工具微球体偶联试剂和即用型细胞因子与磷酸化蛋白测试试剂盒整合在一起形成一个功能强大的芯片技术平台这个系统为蛋白与核酸研究人员提供了灵活的复合式测试方案可在单个样品中同时分析多达100种生物分子这一目标通过悬液芯片技术得以实现它由100种不同颜色标记的一系列微球体(xMAP技术)组成每个微球体可偶联一种对应不同靶分子的特异反应物反应物可以是酶底物受体抗原或者抗体多重检测获得的数据整合在一起有助于揭示生命分子间的相互关系及信号转导途径1多重分析的领先者2Bio-Plex悬液芯片技术应用指南42Bio-Plex悬液芯片技术应用指南多重分析的领先者2Bio-Plex技术进展创新与经验10多年的承诺支持与参与Luminex公司最大的合作伙伴全球超过2000台的安装引领生命科学与临床诊断研究硬件软件检测服务与支持Bio-RadlicensedxMAPtechnology.Bio-Radreceivedpatentdaebcitengamnouseinimmunoassays.ReleasedBio-PlexManager2.0software21CFRPartII.LaunchedBio-Plex100systemforlifescienceresearchofferingcytokineassays.ReleasedBio-PlexManagersoftware.Launchedphosphoproteinassays.ReceivedFDAclearanceforANAscreen/BioPlex®2200system.InstalledBioPlex2200systematfirstcustomersite.LaunchedBioPlexvasculitispanel;23IVDassaysnowclearedbyFDA.LaunchedBio-Plex200systemforlifescienceresearch.Launchedfirstmagneticresearchassays:Bio-PlexPro™andPrecisionPro™assays.Launchedthreemagneticresearchassaypanelsfordiabetes,angiogenesis,andacutephasemarkers.AnnouncedBio-PlexProwashstation.Launchedover80Bio-PlexPromagneticcytokineassays.ReleasedBio-PlexManager5.0software.ReleasedBio-PlexManager3.0softwarewithhighandlowPMTsettings.200520042006200320072002200820012009200020101997CommitmenttoxMAPTechnologyBio-Plex悬液芯片技术应用指南3多重分析的领先者3什么是Bio-Plex技术整合专用的仪器和软件容易使用的系统熟悉的96孔板检测流程同步定量分析一滴样品中多达100种不同的蛋白质多肽DNA片段和/或RNA片段Luminex公司xMAP技术授权的基于微球的技术可以进行任何含氨基化合物的微球偶联的灵活研究平台用于溶液中的相互作用或检测使用微球的基于荧光检测技术Bio-Plex系统技术的背后是使用了微球任何定位在固相底物上的检测都在微球上进行反应发生在微球表面时微球处于悬浮状态在10ul样品中悬浮的微球可超过一百万个微球内部染上两种不同的荧光染料红色和红外红色和红外两种荧光染料各使用了10种不同的浓度这样就产生了100种不同颜色比例的微球并进行编码从1号到100号微球上的检测颜色编码微球11091100多重分析的领先者4Bio-Plex悬液芯片技术应用指南44Bio-Plex悬液芯片技术应用指南多重分析的领先者3特异性抗体偶联到不同颜色的微球上每种颜色的微球指向一种特异的分析物这样微球的颜色就解决了分析物对特异性抗体的识别偶联好不同抗体的不同颜色微球混合与待检样品进行温育检测样品悬浮时微球表面的探针分子与目标分析物结合未结合的分析物将在一系列的清洗步骤中去除抗体偶联到微球上捕捉目标分析物11091100132567881325678813256788Bio-Plex悬液芯片技术应用指南5多重分析的领先者1生物素标记的检测抗体结合到目标分析物上温育后未结合的检测抗体在一系列的清洗步骤中去除绿色激光532nm绿色报告激光测量微球外荧光报告分子以测定分析物浓度荧光标记的链亲和霉素藻红素(SA-PE)报告分子结合到生物素标记的检测抗体上温育后未结合的荧光报告分子在清洗步骤中除在Bio-Plex系统上测定反应好的待检样品染色的微球在鞘流路中序列推进仪器中红色激光635nm分类激光测量微球内在染料并识别微球编码和分析物绿色激光532nm绿色报告激光测量微球外荧光报告分子以测定分析物浓度捕捉检测抗体捕捉荧光报告分子仪器检测悬液芯片技术的优点减少时间减少实验花费较少劳动力节约样品量只需50ul或更少以及在同一孔里进行多重分析更好的重现性以近似相同的液相动力学进行最少样品的操作比荧光检测的比色方法更宽的动态范围和更高的灵敏度新生物标志物的快速筛选具有每孔而不是每块板的检测对照3多重分析的领先者6Bio-Plex悬液芯片技术应用指南41Bio-Plex悬液芯片技术应用概述悬液芯片技术自发明以来的十几年中主要应用于三个领域基因组学蛋白质组学和临床诊断检测在蛋白质组学领域的应用悬液芯片技术显示出其巨大的优势其操作与免疫检测技术ELISA几乎相同已经广泛应用于蛋白质的表达谱蛋白质翻译后修饰如磷酸化糖基化以及对蛋白质功能和相互作用的筛查研究中主要领域有各种疾病生理过程的细胞因子表达谱分析聚焦蛋白质组学focusedproteomics研究转化医学病理与药理和新药筛选等在核酸检测方面平板的DNA芯片技术广泛的综述Bio-Plex悬液芯片技术在生命科学与医学研究中的应用基因组学(Genomics)基因分型Genotyping•基因多态性分析•基因突变分析基于寡核苷酸微球的悬液芯片技术是高效率高通量的SNP分析平台Yeetal.2001也是进行寡核苷酸配基检测lannoneetal.2000单碱基突变分析Chenetal.2000以及聚合酶介导的寡核苷酸单碱基延伸检测Caietal.2000的有效手段也证明该技术是进行疾病特异性突变分析的有效手段(DunbarandJacobson2000,Wardetal.2002)基因表达(GeneExpression)•疾病标志物•发育过程•基因调控悬液芯片技术最适合进行较小通量的多重基因检测如单次反应在100个以内这只需要1小时即可完成96个样品的多重检测蛋白质组学(Proteomics)蛋白表达谱分析(ProteinProfiling)•多重细胞因子检测对刺激和非刺激细胞检验组和对照组的细胞因子定量分析已经是悬液芯片技术最普遍的应用这些因子包括细胞因子趋化因子生长因子和脂肪因子等是一群细胞信号蛋白对这些蛋白的同步检测能揭示细胞组织或机体免疫反应的复杂机理(CarsonandVignali1999,deJageretal.2003)翻译后修饰细胞信号转导蛋白同步检测细胞内多重磷酸化蛋白是理解胞内信号转导所必需的使用悬液芯片技术是更加高效的磷酸化蛋白的检测手段(Gaoetal.2003)蛋白功能与相互作用(Iannoneetal.2001)•受体-配体结合•酶活性•蛋白-蛋白相互作用•抗体交叉反应与特异性•抗原表位扫描临床诊断(ClinicalDiagnostics)分子诊断(Colinasetal.2000)•SNP•疾病相关突变检测•HLA分型多重免疫诊断•血库(Smithetal.1998).•传染性疾病筛查•疫苗免疫效果筛查(Bellisarioetal.2001,Prevostetal.2003).•自身免疫检测•过敏反应检测•生物标志物检测如激素调控蛋白多肽等等(Bellisarioetal.2000,deJageretal.2003,Lukacsetal.2003).悬液芯片技术的应用用于高通量基因表达的平行分析但是由于一些特殊的DNA应用的出现研究的范围可能仅限于某一类功能基因组如某一类疾病的研究SNP分析验证病原体检测microRNA等这类应用显然无需巨大通量的DNA固相芯片而液相芯片更加合适操作更加简便芯片组的选择也更加灵活而在临床诊断领域悬液芯片是很好的疾病筛查诊断和监控的工具现已有广泛的应用包括呼吸道病原体肠道疾病病原体的筛查和检测和