抗球蛋白实验

抗球蛋白实验主要内容•前言•实验原理•实验方法•临床应用•注意事项前言•1908年，CarloMoreschi首先描述该试验。•1945年，Coombs、Mourant和Race建立了抗球蛋白试验方法,故该试验又称为Coombs试验。前言•抗球蛋白试验中球蛋白指IgG、C3片段、C4片段、IgM、IgA等，但主要指IgG和C3片段。•IgG型抗体与红细胞表面相应抗原结合后致敏，但不产生可见的凝集反应，属不完全抗体。•IgG具有很好的免疫原性，用其免疫动物（或通过杂交瘤技术）可获得相应抗体，即抗IgG（亦称抗抗体）。抗球蛋白试验原理待检红细胞（表面可能包被有IgG或C3片段等球蛋白）待检血清（可能含有IgG等球蛋白）已知抗原的红细胞待检红细胞（表面未知的抗原）已知抗体的血清产生可见凝集反应为阳性，否则为阴性。抗球蛋白血清（广谱和或单价）桥联作用致敏分类•直接抗球蛋白试验：检测红细胞表面是否结合IgG、C3片段等免疫球蛋白。•间接抗球蛋白试验：检测血清中是否含有IgG等免疫球蛋白。直接抗球蛋白试验•检测红细胞上抗体（不完全抗体）：试剂•抗人球蛋白血清，分两类：广谱为抗IgG﹢抗C3抗体，单价分别为抗IgG抗体、抗C3抗体。•不完全抗D血清（IgG型）。•AB型血清。•5%RhD阳性红细胞悬液（3个人O型红细胞洗涤后制备）。操作步骤1、取受检查红细胞，以生理盐水洗涤3次，末次洗涤后，将上层盐水倒尽，再以滤纸将管口附着的盐水吸去，再配成5%红细胞盐水悬液(尽量除去血清，防止其含有的抗体产生干扰)。2、取上述5%受检者红细胞盐水悬液1滴，移入试管（10mm×60mm）内，加抗球蛋白血清1滴，混匀。操作步骤3、阳性对照：用不完全抗D血清致敏的5%RhD阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。4、阴性对照：正常人5%RhD阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。5、受检者以及阳性、阴性对照管同时以1000rpm离心1min，轻轻摇动，观察结果。间接抗球蛋白试验•检测血清中抗红细胞抗体（不完全抗体）：操作步骤反应物受检管阳性对照阴性对照血清（已知或受检）2滴--5%红细胞悬液（受检或已知）1滴--IgG抗D血清-2滴-AB型血清--2滴5%阳性红细胞悬液-1滴1滴操作步骤1、取3支试管，按上表分别加入相应的细胞、血清和试剂，混匀，置37℃水浴1h（致敏），用生理盐水洗涤3次。末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去（尽量除去血清，防止其含有的抗体产生干扰）。每管再各加生理盐水1滴，混匀。2、每管各加适当浓度抗球蛋白血清1滴（桥联），混匀，1000rpm离心1min，观察结果。结果判读•阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，不凝集者为阴性。如阳性对照出现红细胞不凝集或阴性出现红细胞凝集结果，应分析原因重做。注意事项•离心过度，红细胞不易散开，容易导致假阳性。•红细胞洗涤时应迅速、连续，不应中途停止。•标本采集后最好立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失（直抗）。•抗球蛋白血清严格按说明书使用，否则可产生前带反应和后带反应，而误为阴性结果。注意事项•红细胞上吸附抗体过少或Coombs试验阴性自身免疫性溶血性贫血直抗试验可呈假阴性反应。•全凝集或冷凝集血标本及脐带血标本含有Wharton胶，且洗涤不充分；血液标本中有很多网织红细胞，且抗球蛋白血清中含有抗运铁蛋白时，都可使红细胞产生凝集，出现假阳性。•阴性结果应核实：在试管中再加1滴IgG致敏红细胞，若阳性则表示试管内的抗球蛋白试剂确未被消耗，结果可靠。抗球蛋白试验临床应用•新生儿溶血病（HDN）：胎儿红细胞已被母亲血型抗体（能通过胎盘的IgG型）致敏时。•自身免疫性溶血性贫血（AIHA）：自身抗体吸附在自身红细胞表面时。•溶血性输血反应：输入红细胞被受者不完全抗体致敏时。•药物性溶贫：甲基多巴类药物、青霉素等产生的不完全抗体吸附于红细胞时。抗球蛋白试验其他技术•抗球蛋白试验可以加入不同的介质，其中包括低离子介质、牛白蛋白、聚乙二醇、酶等，其目的可增加反应的敏感性。•可使用微柱技术进行抗球蛋白试验，试验结果判断方便，且灵敏度高。