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AninternalstandardshouldbeusedwhenperformingMSquantitation.Anappropriateinternalstandardwillcontrolforextraction,HPLCinjectionandionizationvariability.InacomplexmatrixitisnotuncommonfortwodifferentstandardlevelsinSRMintegratedplots,atthelowerendofthestandardcurve,togivenearlyanidenticalresponse.Itisonlywhenaninternalstandardisusedthatthetwopointscanbedifferentiated.Someresearchersattempttopreparestandardcurvesandrunsampleswithoutaninternalstandardandfindmoderatesuccess.Oftenwithoutaninternalstandard%RSDsofreplicatescanbeashighas20%.Usinganinternalstandardthe%RSDscanbebroughtdowntoapproximately2%.Weruntriplicatesateachlevelofourstandardcurve.HowdoIchooseaninternalstandard?Thebestinternalstandardisanisotopicallylabeledversionofthemoleculeyouwanttoquantify.Anisotopicallylabeledinternalstandardwillhaveasimilarextractionrecovery,ionizationresponseinESImassspectrometry,andasimilarchromatographicretentiontime.Ifyouareperformingnon-clinicalPKquantitationitmaybedifficulttojustifysuchastandardsinceaspecialsynthesisofanisotopicallylabeledstandardcanbeexpensiveandtimeconsuming.Oftenifyouareworkingwithmedicinalchemiststheywillhavealibraryofcompoundanalogsthatcanbeusedasinternalstandards.Theseanalogsweremadeintheevolutionofthecompoundtobetestedandwillbesimilartothecompoundtobequantifiedandmoreimportantlywillbeslightlydifferentbyparentmass.Trytoavoidusingde-methylated(-14)orhydroxylated(+16)analogsasinternalstandardssincethesearethemostcommonmassshiftsobservedinnaturallyoccuringmetabolitesoftheparentcompound.Acommoninternalstandardisachlorinatedversionoftheparentmolecule.Achlorinatedversionoftheparentmoleculewillcommonlyhaveasimilarchromatographicretentiontimewhichisanimportantcharacteristicofaninternalstandard.Wehavefoundthatoneofthemostimportantcharacteristicsofaninternalstandardisthatitco-eluteswiththecompoundtobequantified.HowdoIuseaninternalstandard?Firstofallaninternalstandardshouldbeaddedatthebeginningofthesamplework-up,typicallybeforetheplasmacrashorsolidphaseextraction.Theinternalstandardshouldbeaddedatthesamelevelineverysampleincludingthestandards.AninternalstandardshouldgiveareliableMSresponse.Careshouldbetakenthattheamountoftheinternalstandardiswellabovethelimitofquantitationbutnotsohighastosuppresstheionizationoftheanalyte.HowmuchinternalstandardshouldIadd?,thisisanimportantquestion.Itpaystoknowroughlyhowmuchcompoundisinyoursample.Thiscanbeaccomplishedbymakingtrialanalysesofanearly,middleandlatetimepointwithperhapsoneortwostandardpoints.Thisinformationwillbeveryvaluablewhenbuildinganappropriatestandardcurveandinknowinghowmuchinternalstandardtoadd.Ifyouweretryingtoquantifysamplesintherangeof100fgto25pgandthelimitofdetectionwas100fgyoumightadd5to10pgofinternalstandardtoeverysample.Agoodruleofthumbistotargettheinternalstandardtothelower1/3oftheworkingstandardcurve.Thisisarangethatwillgiveacomfortableresponsewithoutinterferingwiththeionizationoftheanalyte.--------------------------------------------------------------------------------中文：什么叫内标法?怎样选择内标物?内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。在使用内标法定量时，有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积的比值?影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。化学方面的因素包括：1、内标物在样品里混合不好；2、内标物和样品组分之间发生反应，3、内标物纯度可变等。对于一个比较成熟的方法来说，色谱方面的问题发生的可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在，比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。进样量应足够小并保持不变，这样才不致于造成检测器和积分装置饱和。如果认为方法比较可靠，而色谱固看来也是正常的话，应着重检查积分装置和设置、斜率和峰宽定位。对积分装置发生怀疑的最有力的证据是：面积比可变，而峰高比保持相对恒定，在制作内标标准曲线时应注意什么?在用内标法做色谱定量分析时，先配制一定重量比的被测组分和内标样品的混合物做色谱分析，测量峰面积，做重量比和面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线。在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用的条件一致，因此，在制作标准曲线时，不仅要注明色谱条件(如固定相、柱温、载气流速等)，还应注明进样体积和内标物浓度。在制作内标标准曲线时，各点并不完全落在直线上，此时应求出面积比和重量比的比值与其平均位的标准偏差，在使用过程中应定期进行单点校正，若所得值与平均值的偏差小于2，曲线仍可使用，若大于2，则应重作曲线，如果曲线在铰短时期内即产生变动，则不宜使用内标法定量。外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。此法可分为工作曲线法及外标一点法等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。外标法externalstandardmethod色谱分析中的一种定量方法，它不是把标准物质加入到被测样品中，而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定，把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。外标物与被测组分同为一种物质但要求它有一定的纯度，分析时外标物的浓度应与被测物浓度相接近，以利于定量分析的准确性。--------------------------------------------------------------------------------定量分析中怎样选择内标法或外标法选一与欲测组分相近但能完全分离的组分做内标物（