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高中生物选修一导学案编写人：高三生物组2018年4月1选修一生物技术实践专题二微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养一、课题背景1．研究和应用微生物的前提是。2．在实验室培养微生物，一方面需要，另一方面需要。二、培养基1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质称为培养基。2．种类：根据培养基的物理性质可将培养基可以分为、和半固体培养基。3．琼脂：是一种从红藻中提取的，在℃以上熔化，在℃以下凝固，在常规培养条件下呈现。琼脂是制备培养基时最常用的剂。4．营养构成：各种培养基一般都含有水、、和无机盐，另外还需要满足微生物生长对、以及的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加，培养霉菌时需将培养基的pH调至，培养细菌时需将pH调至或，培养厌氧微生物时则需要提供的条件。5．牛肉膏，蛋白胨来源于，含有、和等营养。三、无菌技术1．获得纯净培养物的关键是防止的入侵。2．无菌技术围绕着展开，主要包括以下几个方面：(1)对实验操作的、操作者的衣着和进行清洁和。(2)将用于微生物培养的器皿、和等进行。(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与___________相接触。3．无菌技术的目的：(1)防止，(2)避免。4．消毒和灭菌消毒灭菌概念使用较为的物理或化学方法杀死物体或的部分微生物(不包括_____和)使用的理化因素杀死物体_________的微生物(包括_____和)常用方法(1)消毒法（在℃煮(1)灭菌：直接在酒精灯火焰的高中生物选修一导学案编写人：高三生物组2018年4月2min）；(2)消毒法（在℃煮min或在℃煮min）；(3)消毒法（如用擦拭双手、用消毒水源；紫外线照射前，适量喷洒或溶液等消毒液。）(4)紫外线消毒法：可以杀死或中的微生物。灼烧，如（、接种针或其他用具）；(2)灭菌（在℃加热h）。适用于、的物品。如（（吸管、培养皿）和用具）；(3)灭菌：压力为kpa，温度为℃条件下，维持min。四、大肠杆菌的纯化培养(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：1．计算：依据是培养基的比例，计算配制某一体积（如100ml）的培养基时，各种成分的用量。2．称量：牛肉膏比较，可用玻棒挑取到上，同其一块称量。牛肉膏和蛋白胨易吸潮，称取时动作要，称后及时。3．溶化：和称量纸＋少量的水（）取出_________→加_________和_________→加(注意：不断用玻璃棒搅拌，防止_____________而导致_____________)。当_________完全熔化后→补加蒸馏水至100mL。调节__________后再进行灭菌。4．灭菌培养基：_________灭菌培养皿：_____灭菌5．倒平板：待培养基冷却至_____左右时，在附近倒平板。(二)纯化大肠杆菌1．微生物的接种技术最常用的是和，除此之外还包括和等方法。虽然这些技术方法各不相同，但是，其核心都是要防止，保证。①平板划线法：通过接种环在培养基表面的操作，将聚集的菌种逐步到培养基的表面。②稀释涂布平板法：将进行一系列的，然后将不同的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。两种接种方法都是为了将聚集在一起的微生物，在划线培养后或者在的菌液涂布后，可以分离得到由繁殖而来的肉眼可见的单个__________。高中生物选修一导学案编写人：高三生物组2018年4月32．菌落：①概念：。②菌落特征包括。3．系列稀释操作：（P19）1、2、3注意：移液管需要经过。操作时，和应在离火焰处。4．涂布平板操作：①将涂布器末端浸在体积分数为的酒精；②取少量滴加到培养基表面；③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，冷却S；④涂布时可转动，使菌液分布均匀。5．培养基灭菌合格与否的方法：①将接种后的培养基和一个的培养基都放入中，培养12h和24h后，分别记录观察。②P20培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因。。③如果你在培养基上观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？。6．如何记录实验结果？(三)菌种的保藏：（1）临时保藏：①将菌种接种到试管的，在温度下培养，当长成后，将试管放入冰箱中保藏，以后每个月，转移到培养基上。②适用范围：对于的菌种，可以采用临时保藏的方法。③缺点是：保存时间，菌种容易被或产生变异。（2）长期保存菌种的方法：法，在mL的甘油瓶中，装入mL甘油后，将mL转移到甘油瓶中，与甘油后，放在冷冻箱中保存。P15旁栏思考题：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？。P16旁栏思考题：请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手（1）、（2）需要；（3）需要。P17倒平板操作的讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？。高中生物选修一导学案编写人：高三生物组2018年4月42.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？。P18平板划线操作的讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？P19涂布平板操作的讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？。P20课后练习题1、2、3高中生物选修一导学案编写人：高三生物组2018年4月5专题二微生物的培养与应用答案课题1微生物的实验室培养一、1、防止杂菌入侵，获得纯净的培养物。2、为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，确保无处不在的其他微生物无法混入。二、1.营养基质生长繁殖2.液体培养基固体培养基水3、多糖9844固态固体凝固4、碳源氮源PH特殊营养物质氧气维生素酸性中性微碱性无氧5、动物原料糖维生素有机氮三、1.外来杂菌2、如何避免杂菌空间手消毒接种用具培养基灭菌酒精灯火焰周围的物品3、实验室的培养物被其他外来的微生物污染操作者自身被微生物感染4.温和表面或内部芽孢和孢子强烈内外所有芽孢和孢子5.煮沸消毒1005-6巴氏70-75308015化学药剂酒精氯气石碳酸煤酚皂物体表面空气灼烧灭菌接种环金属干热灭菌160-1701-2耐高温需保持干燥玻璃器皿金属高压蒸汽灭菌10012115-30四、（一）1.配方2.粘稠称量纸迅速盖上瓶盖3.牛肉膏加热称量纸蛋白胨氯化钠琼脂琼脂糊底烧杯破裂琼脂PH4、高压蒸汽灭菌干热灭菌5、50酒精灯火焰（二）1.平板划线法稀释涂布法斜面接种穿刺接种杂菌的污染培养物的纯度琼脂固体连续划线稀释菌液梯度稀释稀释度分离数次稀释度足够高一个细胞菌落2.在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体菌落的形状，大小，隆起程度和颜色等3、灭菌试管口移液管1-2cm4、70%菌液8-10S培养皿5、未接种37℃恒温箱不同（三）（1）固体斜面培养基培养合适的菌落4℃3-6新鲜频繁使用不长污染（2）甘油管藏法31灭菌1充分混匀－20℃P15无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。P16灭菌消毒P171、可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2、通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3、平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免高中生物选修一导学案编写人：高三生物组2018年4月6使培养基中的水分过快地地挥发。4、空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。P181、操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2、以免接种环温度太高，杀死菌种。3、划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。P19应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。