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Elisa操作注意事项：1，首先，应该先把要做的事情规划好，做什么实验，板子上样品及标准品该如何的排比放置。看看要用的工具以及试剂是否都已准备妥当。比如合适的移液器，稀释板是否洁净，有没有水珠残留，洗涤液是否够用。实验中所用到的液体，在用前应该先看看是否有沉淀，沉淀是杂物质还是液体本身析出来的洁净物质；用时将其摇匀。用来盛放血清稀释液或者酶标液，洗涤液的槽子用前一定要在每次洗涤前用洗衣粉洗涤，自来水冲洗无泡沫后用蒸馏水进行润洗三次，方可使用：用后要用自来水将其冲洗，如若不冲洗，酶标会渗透到材料中去。2，步骤：稀释血清：先取一定量的血清稀释液（一般稀释200ul为最低量），然后吸取血清按1/100进行稀释，（吸取血清时要注意Tip头不要深入到液面以下太深，其一是因为所取的量很少，Tip头插入液面以下太深，就会粘取很多，造成误差；其二避免对血清造成污染）要将稀释的血清顺序记下，并记录所用的板子，酶标液，稀释液等内容。3，血清温育：在将稀释好的血液加入到板子中时，要尽量同步，而且要使Tip头残留的液体尽可能的少。加样过程中，尽量将样品加到底部，避免黏到U型孔的周身壁面。（要设置标准孔的平衡孔）装入封口袋并封口，放置37C环境下，作用30min，此处最好定一个闹钟，随身携带。然后将下一步要用的酶标液从四度环境放置到室温，进行回温。并检查洗涤液。4，洗涤：血清温育后，轻轻的将血清液甩去。然后，用洗涤液进行洗涤。加液时，不能太快，要尽量的垂直加入。停留约十秒钟即可将液体甩去，洗涤三到五次，然后在非铅类印刷纸上把水拍干净。5，加酶标二抗：将酶标液加入到孔内，同样的要加到底部。然后，封口袋封装，37C作用30min。要注意将底物拿出进行回温。此时，还要注意在电脑上新建一个Excel表格，将相关的信息填进去。6，洗涤同第4步一样7，加底物，由于底物具有一定的粘性，在加底物的时候，可以让其沿壁面，缓慢的流到底部即可。因为，底物是倒数第二个环节，且下一步加终止液硫酸，因此沿壁面流下影响不大。加完底物，敞口放置在37°C，尽量避光，作用10min。此时可以先把终止液取出，并把酶标仪打开，选择到合适的波长。8，读数：读数时，先看看孔内液体是否有气泡存在，如果有，用针头将其消去。