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ELISA试剂盒可能出现的问题及解决方法问题及现象原因解决办法1整块板最终反应未产生颜色或整体吸光度值偏低1.室温过低或试剂未回至室温。2.试剂失效。3.试剂过失效日期。4.试剂开启时间过长，污染。5.移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸头内壁挂液太多或者内壁不清洁。6.反应时间不足。7.洗涤时冲击力太大，洗涤液浸泡时间太长，洗涤次数增加。1.控制室温并确保试剂回至室温。2.与我公司联系。3.更换新批号的试剂盒。4.试剂开启后尽快用完。5.校正移液器，吸头要配套，每次装吸头要吻合紧密。移液不宜过快，排放应完全。吸头内壁要清洁，最好一次性使用。6.准确计时。7.减少洗涤冲击力，按说明书要求浸泡时间，准确记住洗涤次数8.蒸馏水水质有问题。9.样品添加了防腐剂，抑制了酶的反应8.测定蒸馏水配剂对酶联免疫的影响9.样品中不能添加防腐剂2整行或整列板孔最终反应产生颜色深，无梯度10.手工洗板时相对应的吸头与移液器接触不严，导致未吸上洗涤用水或吸上的水量不够。11.洗板机洗板时相对应的管路阻塞，导致未注入洗涤用水或水量不够。10.洗板前检查吸头是否接牢固，是否高矮一致并且在一条直线上。如果在安装吸头时感觉不易安装牢固请不要使用。曾发现过有的国内厂商的吸头不直，不易安装牢固，请不要使用，避免造成实验失败。11.检查管路是否阻塞，出水不畅并疏通，检查注水量是否充分。3标准曲线不成良好的S型，请与盒中的质检报告曲12.加完酶标记物之后的手工洗板步骤失败。洗涤用水被板孔中游离的酶标记物污染。12.注意加洗涤水的移液器吸头尖必须置于微孔板上方约1厘米处打出洗涤水，绝对避免注入板孔中的液体接触到或溅到移液器管尖上而将板孔线对比13.加完酶标记物之后的洗板机洗板步骤失败。洗涤次数不够及注水量不够。14.洗板后未立即进行下一步操作，中间间隔过长。15.当板孔中含有两种以上的试剂时未能充分混均。中游离的酶标记物带回到洗涤用水中。13.洗板机洗板：注水量应该约300ul，注水后的液面应该接近板平面并且应该洗5次以上。14.洗板后立即进行下一步操作，不要中断实验去从事其它事情。15.轻轻振荡板并在桌面上做圆周运动以混均或用振荡器混均。4零标准的吸光度值低于第二标准的吸光度值16.洗板后未立即进行下一步操作，中间间隔过长导致板孔干燥。16.洗板后立即进行下一步操作，不要中断实验去从事其它事情。5整块板最终反应颜色的吸光度值都很高17.酶标记物污染了盒内的其它试剂，例如吸过酶标记物的吸头再次使用17.不要重复使用吸头。18.参考第7条。19.控制室温。18.加完酶标物之后洗板机洗板时洗涤次数不够及注水量不够。19.室温过高。20.加样顺序不正确。21.底物受光时间较长。20.加样及加试剂的操作，a先加样品或标品到板孔底部；b再加酶标记物到孔底部。21.底物避光保存，现用现配。6平行性不好22.加样及加试剂量是否准确23.加样及加试剂的操作是否正确，a样品或标品到板孔底部；b加酶标记物到孔底部24.洗板问题22.使用较好的移液器及吸头。23.正确操作。24.参阅上面第12，13条7样品的高阳性率25.样品处理去处脂肪或蛋白不彻底25.认真执行操作说明书中关于样品处理的每一步骤。8重复性差26.样品体积多少不一，加样时间有长26.重复某一样品尽可能与第一次接近有短27.样本加入后未混匀28.移液器加样量不一致29.测量波长不对30.酶标仪重复性差31.操作过程中个别孔液体外溅32.不同批号试剂盒组分混淆33.瓶盖相互交叉使用，显色时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致34.洗涤不正确35.其它杂物掉入孔内36.不慎加酶或底物于孔壁上，有残留27.加样后在混匀器上充分混匀，或参阅上面第15条。28.尽可能使用同一移液器并装紧吸头。移液时用力及抽吸速度一致29.按说明书严格操作30.校对酶标仪31.稳拿稳放，防止外溅32.不同批号试剂盒不能混用33.重复测定标本，各项条件应尽可能保持一致，以消除可能产生的误差34.参阅上面第12，13条35.用记号笔圈上便于分析36.用吸水纸吸干壁上残留的酶或底物37.不慎多加或少加酶37.多加时显色深，少加则浅，用记号笔圈上，便于分析9出现白板38.蒸馏水有问题39.洗涤液配制时有误40.终止液误当洗涤液稀释41.漏加酶或底物38.与好的蒸馏水同时比较39.按说明书配制40.每次配制时均应看清标签标明物质41.严格按照说明书操作，注意不要漏加10花板42.操作不慎43.洗板机孔堵，残留液较多，加洗液及抽取洗液不均匀42.严格按照操作说明书进行43.检查洗板机并进行调整