流感嗜血杆菌

肠道杆菌(entericbacilli)※一大群居住在人和动物肠道中生物学性状近似的Ｇ－杆菌,广泛分布于水、土壤或腐物中。※分类学上的地位:《伯杰氏系统细菌学手册》(第９版)的第Ⅰ大类的兼性厌氧Ｇ－杆菌。※多数是肠道的正常菌群,少数为致病菌※至少有30个菌属，120多个菌种肠道杆菌共同特点形态结构G—中小杆菌，无芽孢，多数有周鞭毛（除志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。及菌毛培养特性需氧或兼性厌氧营养要求不高，普通培养基可生长，菌落相似，形成灰白色中等大小S型菌落。生化反应发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；乳糖发酵试验：非致病菌+，致病菌-（除外变形杆菌）。触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为亚硝酸盐。EMB（伊红——美兰培养基），乳糖、伊红、美兰选择作用（弱选）大肠埃希菌（非致病菌）乳糖发酵产酸伊红结合美兰形成紫黑色金属光泽化合物有色的乳糖发酵菌落伤寒沙门菌等（致病菌）乳糖不发酵伊红美兰不能结合无色的乳糖不发酵菌落EMB平板上的E.coliSS培养基（沙门志贺培养基）乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等抑制剂选择抑制作用（强选）大肠埃希菌产酸桃红色乳糖发酵菌落伤寒沙门菌无色乳糖不发酵菌落胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌，提高肠道致病菌检出率乳糖发酵中性红呈红色乳糖不发酵微生物检验1.分离培养2.鉴定（1）初步鉴定：①确定肠杆菌科的细菌，应采用葡萄糖氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌加以鉴别；②肠杆菌科细菌的分群，多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，将肠杆菌科的细菌分为三个类群；③选择生化反应进行属种鉴别。KIA和MIU将细菌初步定属。（2）最后鉴定：根据生化反应的结果初步定属、种，再根据血清凝集反应才能作出最后判断。甲基红试验原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色反应。此为甲基红试验阳性。培养基：葡萄糖蛋白胨水试剂：甲基红试剂结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色：－应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基红试剂培养基变红甲基红试验甲基红试验V-P试验原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。培养基：葡萄糖蛋白胨水结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色：－应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰V-P试剂培养基变红V－P试验脱酸葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基红试剂培养基变红乙酰甲基甲醇二乙酰V-P试剂培养基变红脱酸靛基质试验原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。培养基：蛋白胨水试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+培养基液面为黄色：－应用：用于肠道杆菌的鉴定靛基质试验原理色氨酸酶色氨酸靛基质（吲哚）玫瑰靛基质（玫瑰吲哚）对二甲基氨基苯甲醛靛基质试验尿素酶试验原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。培养基：尿素培养基试剂：酚红指示剂结果：培养基变红：+培养基不变色：-应用：肠杆菌科属间鉴定尿素酶试验原理尿素尿素酶氨+CO2培养基pH升高酚红呈碱性变色枸橼酸盐利用试验原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐作为唯一碳源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是指示剂呈碱性反应。培养基：枸盐酸盐培养基试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色）结果：培养基变蓝：+培养基不变色：－应用：肠杆菌科属间鉴别枸橼酸盐利用试验原理枸橼酸盐铵盐碳酸盐氨培养基pH下降溴麝香草酚蓝呈碱性变色培养基变蓝培养基22埃希菌属埃希菌属（Escherichia）有6个种，只有大肠埃希菌（E.coli）是临床最常见、最重要的一个菌种。①大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群；②在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即可成为机会致病菌，引起肠道外感染；③一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人类胃肠炎；④在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的卫生学检测指标。23生物学性状中等大小的G-杆菌、无芽胞、有周鞭毛、菌毛营养要求不高。肠道鉴别培养基形成有色菌落，SS平板上呈红色大菌落发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气，分解蔗糖因菌株而异，尿素酶试验阴性。吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC试验）为++--。克氏双糖铁琼脂（KIA）：斜面和底层均产酸产气，H2S（-）。动力-吲哚-尿素（MIU）培养基为++-。24志贺菌（Shigella)人类细菌性痢疾的病原菌，俗称痢疾杆菌一、生物学性状形态与染色：G–、短小杆菌、无芽胞，无鞭毛，无荚膜，有菌毛。培养特性：营养要求低，SS平板上呈无色半透明菌落生化反应：葡萄糖+，乳糖-H2S-，动力-可与沙门菌、大肠埃希菌区别。25培养——SS平板有色菌落无色菌落26抗原构造及分类：O抗原（分类依据）：包括群和型特异性抗原A群:痢疾志贺氏菌B群:福氏志贺氏菌C群:鲍氏志贺氏菌D群:宋内氏志贺氏菌K抗原无分类意义抵抗力：比其它肠道杆菌弱，粪便标本立即送检；易形成抗药性。沙门菌属是肠杆菌科中最复杂的菌属，有2000种以上血清型对人类有致病性肠热症——伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌食物中毒——鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌败血症——猪霍乱沙门菌最常见生物学性状形态染色符合肠杆菌特点，多为周毛菌，有菌毛伤寒杆菌的周身鞭毛培养特性EMB、SS上呈无色透明乳糖不发酵菌落麦康凯培养基上的伤寒杆菌菌落EMB培养基，上为E.coli，下为伤寒杆菌生化反应乳糖（-），葡萄糖（+），多数H2S+，动力+，尿素（-）抗原结构O抗原——特异性低、稳定、分群（组）H抗原——特异性高，不稳定，分型Vi抗原（毒力抗原）——不稳定，可阻止“O”凝集流感嗜血杆菌名称由来→于1892年由费佛博士在流行性感冒的瘟疫中发现。→曾误认为它是1889年流感大流行的原因。→直至1933年，发现流行性感冒的病毒性病原后，才消除了这种误解。与流感的关系嗜血杆菌属（Haemophilus）根据《Bergy’s鉴定细菌学手册》第九版（1994）记载，嗜血杆菌属列为群5中的亚群3，其中和临床有关的有9个种即：•流感嗜血杆菌（H.influenzae）•副流感嗜血杆菌（H.parainfluenzae）•溶血嗜血杆菌（H.haemolyticus）•副溶血嗜血杆菌（H.parahemolyticus）•杜克嗜血杆菌（H.ducreyi）•埃及嗜血杆菌（H.aegyptius）•嗜沫嗜血杆菌（H.aphrophilus）•副嗜沫嗜血杆菌（H.paraphrophilus）•迟缓嗜血杆菌（H.segnis）代表菌：流感嗜血杆菌（H.influenzae）1.初次分离为G—短小杆菌；2.陈旧培养基或恢复其病灶中，具有多形性（球杆、长杆或丝状）;3.无芽胞，无鞭毛，不能运动;4.毒力株（粘液型菌株）在营养丰富的培养基上，6～8h有明显荚膜，在陈旧培养物中荚膜消失。流感嗜血杆菌（H.influenzae）需养菌。培养较难。培养基中需加入血液，以提供X因子和V因子（巧克力色培养基）X因子——血红素V因子——辅酶Ⅰ或辅酶Ⅱ5%～10%CO2培养特性巧克力色平板上培养：经35℃，18～24h培养形成微小（0.5～0.8mm）无色透明，不溶血，呈露滴样小菌落。48h后形成灰白色较大的菌落。培养特性当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在同一血平板上培养时，由于金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，并弥散到培养基里，可促进流感嗜血杆菌生长，故在金黄色葡萄球菌菌落周围菌落较大，而离金黄葡萄球菌越远者则流感嗜血杆菌的菌落越小。卫星现象（satellitephenomenon）：取流感嗜血杆菌分别接种于兔血肉汤和10%兔血清肉汤，35℃孵育18～24h，观察生长情况。因流感嗜血杆菌生长需要X因子和V因子，故只能在兔血肉汤中生长。也可在MH琼脂平板上密划细菌，再贴上含X因子和V因子的纸片，结果有三种可能：a.仅需X因子，如杜克嗜血杆菌和嗜沫嗜血杆菌；b.仅需V因子,如副流感嗜血杆菌和副嗜沫嗜血杆菌；c.同时需要X因子和V因子，如流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌。X因子、V因子需要试验：生化反应：◆对糖发酵不稳定。一般分解葡萄糖只产酸，不分解乳糖或甘露醇，对麦芽糖、蔗糖或糊精的发酵不稳定。◆还原硝酸盐。有荚膜菌株产生吲哚。典型菌株不溶血。产生自溶酶，可被胆汁溶解。流感嗜血杆菌致病性◆致病物质为内毒素、荚膜、菌毛和酶类。◆通过呼吸道感染，引起原发性或继发性感染。◆原发性感染多由b型荚膜强毒株引起，为急性化脓感染，如脑膜炎、鼻咽炎、咽喉会厌炎、化脓性关节炎、心包炎及败血症等。◆继发感染主要在流感、麻疹、百日咳、肺结核等后发生，多为无荚膜菌株引起。如慢性支气管炎、中耳炎、鼻窦炎等微生物学检查方法微生物学检查方法抗原检测：检测体液或脓汁中的b型多糖抗原，用包被兔抗体的乳胶微粒凝集反应免疫荧光、荚膜肿胀试验亦可获得较高阳性结果分子生物学技术：PCR技术鉴定临床标本中的流感嗜血杆菌，并作为确定分离株的一种试验鉴定依据革兰阴性小杆菌、多形性培养采用巧克力色培养基，CO2培养血平板上有“卫星现象”X、V因子需求试验