流式细胞术简单流程1-6-101BDFACSCalibur

实验简单流程广州必第生物科技有限公司直标抗体表面染色收获细胞洗涤，浓度调节封闭FC受体加入适量抗体，避光孵育洗涤加入适量PBS上机检测注意用到PE-CY7,APC-CY7时，可以使用BDStabilizingFixative339860固定再上机，以保证荧光强度红细胞裂解液可能会对一些表面分子有破坏作用，建议表面抗体标记后使用固定剂对一些抗体会造成荧光减弱，注意说明书提示同型对照加入量根据抗体量决定克隆号辅助试剂LysingsolutionCytofix固定剂可用1%多聚甲醛间接标记加入没有标记的一抗孵育后，洗涤加入二抗孵育，洗涤加入其他抗体洗涤，悬浮上机检测注意对照可以直接加入二抗即可一定先把间标试剂标完后再标记直标抗体不能同时进行多个间标抗体的标记可以达到信号放大的作用生物素的方法类似细胞内染色收获细胞洗涤，调节浓度标记表面抗体固定和破膜细胞内标记洗涤上机检测注意一定先标记表面抗体有一些固定破膜液处理时间过长会导致表面标记丢失或荧光变弱辅助试剂CytopermCytofixCytofix/permPerm/wash细胞周期收获细胞70%冰乙醇固定缓冲液洗涤RNA酶PI染色注意混匀可结合其他表面分子检测注意乙醇可能造成的影响不适合GFP同时检测试剂CycleTESTPlusPI/RNaseACBA溶解标准品逐级稀释混合捕获微球，分配至对应管加入检测抗体，对应检测对象孵育处理仪器设置样本，调节仪器设置洗涤上机注意严格按照说明书对血清样本需要增加相应步骤仪器设置模版和数据收集模版都可以在网上找到