流式细胞术在白血病和淋巴瘤中的应用

流式细胞术在白血病、淋巴瘤免疫分型中的应用免疫分型的作用区分淋系、髓系白血病区分淋系白血病中的T、B-ALL鉴定混合细胞性白血病的类型：T-M、B-M、T-B、T-B-M于治疗过程中监测MRD，评价疗效提示某些遗传学异常：CD56+APL---t（11；17）？CD19+AML---t（8；21）（q22；q21）？提示预后：CD7、CD11b、CD56等阳性的AML患者预后不良CD15阳性的AML患者CR率高免疫分型的原理正常造血细胞白血病细胞抗原表达遵循系列保守性出现抗原跨系表达髓系:CD33+,T系:CD7+髓系:CD33+CD7+抗原表达有一定的时序性出现抗原时序混乱表达原始细胞:CD34+CD11B-原始细胞:CD34+CD11B+各阶段细胞按一定的比例分布出现分化阻滞原幼细胞5%原幼细胞20%免疫分型需要掌握什么理论知识？正常造血细胞的抗原表达规律不同系列的细胞表达的抗原？同一系列不同阶段的细胞表达的抗原？每种抗原的表达强度？正常B系细胞分化图源于王建中等编著的《临床流式细胞分析》正常T系细胞分化图源于王建中等编著的《临床流式细胞分析》正常粒细胞分化图源于王建中等编著的《临床流式细胞分析》正常单核细胞分化图源于王建中等编著的《临床流式细胞分析》免疫分型中的重要抗原CD45正常成人骨髓标本成熟粒细胞：约占40-60%，表达CD11b、CD13、CD33、CD15、CD16、CD10、CD64,不表达CD34、HLA-DR、CD14、CD117有核红细胞：50%,表达GPA成熟单核细胞：约占2-8%，表达CD11b、CD64、CD14、HLA-DR，不表达CD34、CD117成熟淋巴细胞：约占20-40%T细胞：表达CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7,不表达CD10、CD34、TDT等B细胞：表达CD19、CD20、CD22，不表达CD10、CD34、TDT等NK细胞：CD3-(CD16+CD56)+正常幼稚B细胞：5.0%,表达CD10、CD19、CD22、弱表达CD20，少量CD10stCD34+TDT+幼稚髓系细胞：〈5.0％免疫分型常用的抗体AMLCD34、CD117、CD33、CD13、HLA-DR、CD11b、CD15、CD64、CD14、CD65s、MPO怀疑M6加做CD71、GPA怀疑M7加做CD61、CD41B-ALLCD34、CD10、CD19、CD20、CD22、c/mIg、TDT、cCD22/CD79aT-ALLCD34、CD10、CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7、HLA-DR、CD1a、TDT、cCD3NK细胞CD16、CD56、CD57浆细胞CD38、CD138、cκ、cλ、CD19、CD56免疫分型的步骤一第一步：初筛，初步筛选白血病类型CD7/CD19/CD33/CD10/CD117/HLA-DR/CD34/CD45CD7+CD19-CD33+/-HLA-DR-CD117+/-疑为T-ALLCD7+CD19-CD33+HLA-DR+CD117+疑为AML伴CD7+CD19+CD7-CD33-CD10+/-CD117-疑为B-ALLCD19+CD7-CD33+CD10+CD117-疑为B-ALL伴CD33+CD19+CD7-CD33+CD10-CD117+疑为AML伴CD19+CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR+疑为AMLCD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-疑为APL免疫分型的步骤二第二步：确诊，进一步确定白血病类型，并且将某一系别的白血病根据分化程度的不同再分为不同亚型根据初筛结果加做其他系别特异性标记T-ALL:CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD1a、TDT、cCD3B-ALL:CD20、CD22、c/mIg、TDT、cCD22/CD79aAML:CD13、CD11b、CD15、CD64、CD14、CD65s、MPO,怀疑M6加做CD71、GPA,怀疑M7加做CD61、CD41B-ALL免疫亚型亚型CD19CD34TdTCD10CyIgSmIgFAB分型earlyB-precursorALL+++（－）--L1、L2CommonB-ALL++++（－）-L1、L2PreB-ALL+－/+++（+）-L1B-ALL+－－－－/+（+）L3T-ALL免疫亚型分型CD7CD2TdTCD3c/mCD1aFAB分型急性早期T前体细胞白血病earlyT-precursorALL+－+－/+-L1、L2胸腺皮质T-ALL+++++L1、L2急性T细胞白血病T-ALL++－+-L1、L2示例：T-ALL初筛CD7+CD19-CD33+/-HLA-DR-CD117+/-示例：AML伴CD7+初筛CD7+CD19-CD33+HLA-DR+CD117+示例：B-ALL初筛CD19+CD7-CD33-CD10+/-CD117-示例：BALL+CD33初筛CD19+CD7-CD33+CD10+CD117-示例：AML+CD19初筛CD19+CD7-CD33+CD10-CD117+示例：AML初筛CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR+示例：AML-M3初筛CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-示例：AML-M3V初筛CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-混合细胞性白血病的免疫分型双表型：一种白血病细胞同时表达两个或两个以上系列标志。双克隆型：同时存在两种或两种以上异常细胞，分别表达各自的系列特异性标志。类型：T-M、B-M、T-B、T-B-M白血病中各种抗原的积分情况PointsB-lymphoidT-lymphoidMyeloid2CD79acCD22cIgMCD3TCRa/bTCRg/dMPO1CD19CD10CD20CD2CD5CD8CD10CD117CD65CD13CD330.5TdTCD24TdTCD7CD1aCD14CD15CD64混合细胞性白血病判断标准：每个系列积分或=2.5分示例：B-M型AL示例：T-M型AL示例：T-B-M型AL免疫表型的预后价值免疫分型在慢淋、淋巴瘤中的应用简介肿瘤性B细胞鉴别关键：κ、λ轻链出现单克隆表达或双阴性或表达强度明显异常。肿瘤性T细胞鉴别关键：CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7中出现抗原表达缺失或抗原表达强度的改变；CD45RA、CD45RO的表达情况出现异常；表达TDT、CD10等幼稚抗原；TCRVβ系列抗原出现单克隆表达。浆细胞肿瘤鉴别关键：CD138+细胞表达CD56，不表达CD19，出现cyκ、cyλ轻链的单克隆表达。NK细胞肿瘤鉴别关键：出现CD16、CD56、CD7、CD2等抗原的缺失，CD45表达强度的改变每种类型都必须关注异常细胞CD45表达强度、SSC、FSC的变化。示例：正常淋巴细胞正常T细胞正常B细胞正常NK细胞示例：B-CLL/SLL示例：MCL示例：HCL示例：Burkkit淋巴瘤示例：FL示例：脾边缘区淋巴瘤示例：NK-T淋巴瘤示例：T-NHL82.5%15.6%示例：细针穿刺B-NHL示例：脑脊液标本B-NHL示例：正常浆细胞示例：MM示例：浆样淋巴瘤流式细胞术检测BCR-ABL融合蛋白