实验三--不规则抗体

实验三不规则抗体的筛选与鉴定什么是不规则抗体?•指ＡＢＯ血型以外的抗体，即抗Ａ和抗Ｂ以外的抗体.也包括ABO亚型抗体，如抗A1、A2、A3等不规则抗体有何临床意义?•引起各类免疫性输血反应•缩短输入RBC的存活时间•新生儿溶血病不规则抗体筛选方法有那些?•盐水介质法•间接抗球蛋白试验•低离子强度介质聚凝胺法•酶技术•凝胶微柱法再结吸收、放散等血清学手段，对抗体的特异性作分析一、不规则抗体筛选实验--盐水法.凝聚胺法【实验原理】•应用特定的筛选细胞（1，2，3号），与被检者血清在两种介质（盐水，低离子介质凝聚胺）中反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。【标本、试剂与器材】•1.标本被检者不抗凝全血；•2.试剂符合国家标准的1、2、3号筛选谱细胞、0.9%氯化钠、凝聚胺试剂盒•3.器材试管、滴管、记号笔、离心机等.【操作步骤】表一123待捡血清1滴1滴1滴2～5%1号筛选谱细胞1滴2～5%2号筛选谱细胞1滴2～5%3号筛选谱细胞1滴1.盐水法按表一加样后,1000×g离心15s，轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集结果，记录结果.2.凝聚胺按表一加样后,依次加入低离子介质溶液、凝聚胺溶液,1000×g离心15s，弃上清夜,摇动试管,看是否形成凝集(如没有凝集形成需重做),加悬浮液,观察凝集是否散开,记录结果【结果判断】•1、2、3号筛选谱细胞管出现±～4+凝集者为抗体筛选阳性结果。【方法评价与注意事项】•1.被检者自身血清加自身红细胞管应无凝集；若出现凝集则提示存在自身免疫性抗体；•2.在盐水、低离子凝聚胺介质中，1、2、3号筛选谱细胞只要有一个或一个以上管出现±～4+凝集，表示被检者血清中存在不规则抗体，需进一步鉴定抗体特异性；•3.无凝集，表示被检者血清中不存在不规则抗体。•4.低离子凝聚胺出现凝集，而盐水介质无凝集，则提示不规则抗体为IgG性质。二、不规则抗体鉴定试验--凝胶微柱法【实验原理】•对不规则同种抗体筛选试验阳性的被检者应检查其抗体特异性。根据谱细胞（1-10号共10个鉴定细胞）与被检者血清在三种介质（盐水、酶、抗人球蛋白）中反应结果加以判定。【标本、试剂与器材】•1.标本被检者不抗凝全血；•2.试剂符合国家标准的1-10号鉴定谱细胞、凝胶微柱卡；•3.器材台式离心机、37℃水浴箱、血液细胞洗涤离心机。谱细胞（PanelCell）•由8～12个人份的已知血型表现型的O型RBC配套组成•具有各种不同的抗原成分，分布各具特点，与抗体反应出现不同的格局•能检出常见抗体和稀有抗体•每种抗原在谱细胞上保持一定的阴阳比率•为了证实单价抗体，使用的相应抗原RBC应为1个以上【操作步骤】•1.向凝胶卡内依次加0.8-1%1～10号鉴定谱细胞50ul,•2.每孔加被检者血清25ul,•3.37℃温15min,•4.专用离心机离心10min,观察结果．【结果判断】【方法评价与注意事项】•1.被检者自身血清加自身红细胞管应无凝集；若出现凝集则提示存在自身免疫性抗体；•2.±～4+凝集为阳性结果，表示待检血清中有不规则抗体，结合谱红细胞反应格局，确定抗体特异性；•3.无凝集，表示被检者血清中无不规则抗体。•4.凝胶微柱出现凝集，而盐水介质无凝集，则提示不规则抗体为IgG性质。