微生物发酵操作规程

微生物发酵操作规程一.培养基的配制培养基为微生物的生长繁殖提供营养物质，为微生物生长提供碳源、能源、氮源等。本项目培养基的主要成分为豆粕、葡萄糖、玉米粉、无机盐等，与水按比例混合配制。培养基配制过程主要包括罐体空消、原料称量和投料、实消三部分，其中原料称量和投料采用人工方式，该过程将产生少量的粉尘，须有防护措施。空消主要是在投料运转前，采用高温蒸汽对管路、混合罐体等进行灭菌操作。空消结束后，先向罐内加水，待水加至上搅拌桨以后开启搅拌装置，将称量好的原料人工投加至罐内进行搅拌，搅拌均匀后的物料含水量在70%左右。投料结束后，关闭加料口，将控制柜切入“灭菌”状态，进行实消。实消过程中，首先采用蒸汽间接加热（夹套进蒸汽）到70~95℃左右，再将直接蒸汽通入内层培养基进行加热灭菌，当罐压升至0.1~0.12兆帕，料温升至121~125℃时，保持罐压和温度30min后结束灭菌。灭菌后的培养基采用冷却塔循环水冷却，利用压力差或物料泵泵入种子罐和发酵罐内。二．菌种制备项目所需菌种从中国农业微生物菌种保藏中心购得，分装于瓶中入厂。根据不同菌种的培养条件，活化后使用不同的保藏方式对菌种保存。三．接种发酵培养发酵培养工艺主要包括一级种子罐、二级种子罐和发酵罐培养三部分，其中一级种子培养目的在于大量繁殖活力强的菌体，二级种子培养为获取发酵所需要的足够数量的菌体。接种发酵前，先利用高温蒸汽对管路、各接种罐、发酵罐等进行空消灭菌处理，灭菌时间为1h，灭菌结束后使用无菌空气吹干冷却备用。接种过程在无菌室内进行，首先将菌种按工艺要求并入三角瓶内，采用火焰封口接种方式，根据不同菌种的生长周期按不同的的接种量，倒入一级种子罐内，通风搅拌培养，将种子液通过转种管道转入二级种子罐，通风搅拌培养，镜检观察菌体生长状态，然后通过转种管道将种子液转入发酵罐中，进行通风深层发酵，发酵结束后，将发酵液加热到80℃，保温30min，转入混合储罐内进入下一工序。四．发酵参数控制1.pH调节根据不同菌种的适宜生长pH，在发酵罐操作界面上设定后，自动加酸碱调节；pH探头每次使用前应校正，发酵结束后取下放于保护液中；2.DO控制不同菌种有所需的最低溶氧值，发酵过程中应控制在最低溶氧值以上，溶氧控制应由转速、通风量调节；DO探头每次使用前应校正；3.温度调节根据不同菌种设定好发酵温度，自动调节温度；发酵过程中根据需要，可以调节不同温度；4.通风量控制根据DO大小及罐压调节；5.罐压罐压控制在0.05~0.08左右；