11发酵操作规程

单体车间发酵岗工艺操作规程SLJH-C-23第一版第2次修改第1页共24页发酵岗位工艺操作规程1.目的及适用范围1.1本规定的目的是严格工艺操作，提高工作质量，保证安全文明生产。1.2本规定适用于发酵工序消毒、接种、移种、温度控制、压力通气量控制、冷冻、取样、加热放罐、输送的过程控制。2.相关文件:无3.发酵岗位使用专业术语3.1延滞期：培养基接种以后，细胞并不立即生长繁殖，其细胞数在一定时期内无明显增加，这一阶段称为延滞期。延滞期是细胞在环境改变后表现出来的一个适应阶段，这是一个静态到动态的过程，须缓慢控制，即用低转速来控制好溶氧。3.2对数生长期：细胞经过延滞期后适应了新环境，生理状态也较为活跃，细胞开始迅速繁殖，由于细胞以分裂方式繁殖，细胞数目呈几何级数增加，故称对数生长期。进入对数生长期可提高转速满足菌种对氧的高呼吸要求。3.3稳定期：随着细胞的生长繁殖，培养基中营养物质渐趋耗尽，而代谢产物的逐渐增多，以及菌生长引起周围环境条件（如PH值、温度等）的变化，使的细胞的繁殖速度逐渐降低，当细胞的繁殖速率与死亡速率相等时，细胞生长进入稳定期，细胞浓度达到最大。3.4衰亡期：培养基中营养成分耗尽，代谢产物大量堆积，这时能够继续繁殖的细胞数越来越少直至为零，而死亡的细胞则越来越多，即活细胞数显著下降，故此时期称为衰亡期。3.5球状菌：球状菌又可细分为单球菌、双球菌、四连球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌。3.6杆状菌：单体车间发酵岗工艺操作规程SLJH-C-23第一版第2次修改第2页共24页3.6.1按菌的长短细分为长杆菌和短杆菌。3.6.2按菌的粗细细分为粗杆菌和细杆菌。3.6.3按菌的相连个数细分为单杆菌、双杆菌、链杆菌。3.7螺旋状菌：螺旋状菌又可细分为弧菌和螺旋菌。注：芽孢菌（又称内生孢子）不具有分类学上的意义，其只是细菌（一般为杆菌，球菌也有）在生长过程中细胞内部产生了一些圆状或椭圆状的空心，以抵抗不良环境对其的影响。4.职责：4.1认真执行本公司各项管理规定和规章制度。4.2严格按单体操作规程和设备操作规程操作，严禁超温、超压，违章操作。4.3对本岗所有设备安全负责，定期对设备进行维护保养，冬季做好管线、设备的防冻凝工作。4.4控制好发酵的温度、压力、转速，发酵的染菌率。按时做好取样、镜检等工作。4.5提供足量的发酵液，保证公司生产正常进行。4.6做好本岗运行记录、日志，认真详细交接班，做好班前班中巡回检查并挂牌，发现问题及时处理、汇报。4.7对停水、电、汽、风等事故及时处理。4.8正确使用消防设施，定期对消防设施进行维护保养。4.9保持值班室及卫生区干净整洁、无杂物。4.10领导交办的其他工作。5.发酵操作工艺流程单体车间发酵岗工艺操作规程SLJH-C-23第一版第2次修改第3页共24页发酵工段工艺流程图5.1种子罐的操作流程5.1.1种子罐的空消5.1.1.1打开加料口，用自来水将种子罐冲洗干净，封闭加料口。打开种子罐排污阀，打开种子罐进气阀门，将冲洗水全部压出。5.1.1.2检查各阀门开关情况，关闭其它所有阀门，打开夹套排污阀。5.1.1.3首先通三路蒸汽，打开空气进气一侧蒸汽一次阀、二次阀，随后打开相应的抗生素阀放掉冷凝水后关闭小抗生素阀。接着打开空气进气二次阀以及移种管一侧的蒸汽一次阀、二次阀。打开相应的排污阀放掉冷凝水后关小抗生素阀，打开移种出料一次阀；打开取样口一侧蒸汽一次阀、冷冻水进冷冻水进蒸汽进蒸汽一级冷确器二级冷却器冷冻水出冷冻水出蒸汽排凝来自动力空气排空氮气蒸汽蒸汽蒸汽蒸汽排污蒸汽取样口20℃进水28℃进水排污20℃进水去发酵液储罐20℃进水32℃进水32℃进水28℃进水丝网分离器二级储罐一级储罐三级储罐旋分总过滤器单体车间发酵岗工艺操作规程SLJH-C-23第一版第2次修改第4页共24页二次阀，打开相应的排污阀，放掉冷凝水后关闭排污阀，打开取样阀。5.1.1.4罐内蒸汽压力升至0.05MPa后，旋开接种口外盖，插上针头，随后调整放空阀，使其有适量的蒸汽排出，罐内压力稳定在0.15～0.25MPa之间，消毒半小时以上。5.1.1.5种子罐消完后取下针头，旋上接种口外盖，关闭三路蒸汽及放空阀。打开移种出料一次阀和种子罐排污阀，将罐内液体压空后关闭移种出料一次阀和种子罐排污阀。5.1.1.6微开放空阀，打开空气进气一次阀、二次阀对罐体进行保压操作。（种子罐长久不用或染芽孢菌时，要加入适量的甲醛闷罐。）5.1.2种子罐实消种子罐经空消后，根据生产需求，可以上罐实消。5.1.2.1加水：打开加料口，加入自来水110升，依据所给定的标准加入各种无机盐、尿素、酵母膏等培养基，加料完成后关闭加料口。5.1.2.3更换接种口橡皮塞。5.1.2.4打开夹套排污阀，检查其他所有阀门是否处于关闭状态，打开夹套蒸汽一次阀和二次阀。对罐体进行预热，待温度升至90℃后关闭夹套蒸汽一次阀和二次阀。5.1.2.5打开放空阀，将种子罐内压力排掉，关闭放空阀。通三路蒸汽，压力上升到0.09MPa后开始调整放空阀，使其有微量的排汽，调整三路蒸汽进汽阀，使罐内压力稳定在0.08～0.11MPa之间，温度上升至118℃后开始计时，消毒20分钟后，关闭三路蒸汽阀。开空气进气一次阀、二次阀，通气量尽可能小，调整放空阀，使罐内压力在0.1MPa左右，关闭底部排污阀。5.1.2.6打开冷却循环水回水阀，打开冷却循环水进水阀，对罐体进行降单体车间发酵岗工艺操作规程SLJH-C-23第一版第2次修改第5页共24页温。罐温降至28℃后，关闭冷却循环水进水阀。关冷却循环水回水阀，等待接种。5.1.3种子罐的接种本操作由菌种室操作人员负责，本岗人员配合操作。5.1.4种子罐的培养5.1.4.1温度控制：28±1℃5.1.4.2由于随着微生物的增殖和发酵会发热、搅拌产热等，为使罐内温度始终保持最佳，需对罐内进行温度控制。5.1.4.3打开种子罐28度水回水阀，打开28度进水阀，检查种子罐排污阀是否关闭，检查种子罐20度水阀门是否关闭，检查夹套蒸汽阀是否关闭。打开28度水泵入口阀门，检查28度水泵出口阀门是否关闭，开启28度水泵，打开28度水泵出口阀门，使正在培养的种子罐温度控制在28±1℃，关闭种子罐28度水进水阀和回水阀。5.1.4.4种子罐降温：关闭种子罐28度水进水阀和回水阀，打开种子罐20度水回水阀；打开20度水进水阀，进行降温，温度降到29-30度，降温操作完毕。关闭种子罐20度水回水阀；关闭20度水进水阀。打开种子罐28度水回水阀和进水阀。5.1.4.5种子罐加热：关闭种子罐28度水进水阀和回水阀，打开排污阀，依次打开夹套蒸汽一次阀、缓慢打开夹套蒸汽二次阀，对罐体进行加热。根据蒸汽压力控制每次加热时间，每次加热时间不应超过20秒，关闭蒸汽二次阀，关闭蒸汽一次阀。温度恢复至正常范围后（时间为加热后5～10分钟左右），关闭夹套排污阀，打开种子罐28度水回水阀和进水阀。28度水罐加热：打开28度水罐盘管的排污阀，待盘管内无水流出后缓慢打开盘管上蒸汽阀门。待温度上升至25-26度时关闭盘管上蒸汽阀门，关单体车间发酵岗工艺操作规程SLJH-C-23第一版第2次修改第6页共24页闭盘管的排污阀。28度水罐降温：打开28度水罐盘管循环水的回流阀，打开循环水的进水阀。待温度降至28度左右，关闭循环水的进水阀，关闭循环水的回流阀。5.1.4.6培养罐通气的目的无菌空气的通入是为细菌的生长提供足够的氧气。搅拌的目的除了使氧气溶解的更充分外，可使培养液中微生物均匀地分散在发酵罐内，促进传热和传质。5.1.4.7通气量、压力控制种子罐正常培养状态通气:通空气时空气进气一次阀全开，通过控制空气进气二次阀和大排气阀、小排气阀，控制通气量大小。通气量控制在5～8m3/h，压力控制在0.05±0.01MPa。5.1.4.8种子罐冷冻状态、空消保压状态通气一般情况下，将大排气阀和小排气阀全部关死后，再将小排气阀开1/6～1/3丝（圈），全开空气进气一次阀，然后通过空气进气二次阀控制通气量大小使压力低于0.2MPa。冷冻、空消保压状态的通气量要尽可能的小。5.1.4.9搅拌控制5.1.4.9.1搅拌电机的开启顺序5.1.4.9.2依次检查搅拌电机、励磁电机开关、控制器是否关闭，励磁电机的变频是否归零。5.1.4.9.3开启顺序，依次打开搅拌电机开关、励磁电机的开关，调整励磁电机变频旋钮至所需转速。种子罐正常培养前24小时转速为零，正常培养24小时后调节转速至100r/Min，冷冻状态下搅拌维持100r/Min。5.1.5种子罐取样种子罐正常培养24小时后，进行取样镜检。取样时先开大取样蒸汽单体车间发酵岗工艺操作规程SLJH-C-23第一版第2次修改第7页共24页一次阀、打开取样蒸汽二次阀，使蒸汽均匀、充足地排出，对取样口进行充分消毒，消毒时间为10分钟，确认无冷凝水流出。消毒完毕后关闭取样蒸汽二次阀，打开取样阀门，待流出发酵液温度正常后取样40～50ml，取样完毕后关闭取样阀门。打开取样蒸汽二次阀对取样口进行消毒，消毒10分钟后关闭取样蒸汽二次阀，微开蒸汽一次阀做为蒸汽保护。5.1.6种子罐冷冻当种子罐培养合格，而不能及时进行移种操作时，为了抑制菌种的繁殖和生长，避免菌种在无培养基的情况下衰老、死亡，通过降低温度使菌种处于休眠状态，停止生长、繁殖延长保存时间。关闭28度水进水阀、回水阀，打开20度水回水阀、进水阀（20度水泵开启操作：打开20度水罐的出水阀，打开20度水泵进水阀，确保20度水泵出水阀处于关闭状态，开启20度水泵，打开20度水泵出水阀。20度水罐温度大于15度时，需要进行降温处理，打开螺旋板换热器冷冻水出口阀门，微开螺旋板换热器冷冻水进口阀门，直至20度水罐温度降至0-15度，关闭螺旋板换热器冷冻水进口阀门，关闭螺旋板换热器冷冻水出口阀门。）对罐体进行降温，罐内冷冻温度保持≤15℃。5.1.7种子罐的培养标准种子罐培养合格的标准：生物量3～5，镜检无杂菌，繁殖罐实消完毕后，降温到28℃。5.2繁殖罐的操作流程5.1.1繁殖罐的空消5.1.1.1打开人孔，用自来水将繁殖罐冲洗干净，封闭人孔。打开繁殖罐排污阀，开种子罐进气阀门，将冲洗水全部压出。5.1.1.2检查各阀门开关情况，关闭其它所有阀门，打开夹套排污阀。首先单体车间发酵岗工艺操作规程SLJH-C-23第一版第2次修改第8页共24页打开空气进气侧蒸汽一次阀、二次阀，随后打开相应的抗生素阀放掉冷凝水后关闭小抗生素阀。接着打开空气进气二次阀以及移种管侧的蒸汽一次阀、二次阀。打开相应的排污阀放掉冷凝水后关小抗生素阀，打开移种出料一次阀；打开取样口侧蒸汽一次阀、二次阀，打开相应的排污阀，放掉冷凝水后关闭排污阀，打开取样阀。此过程称为通三路蒸汽。5.1.1.3当罐内蒸汽压力升至0.05MPa后，旋开接种口外盖，插上针头。随后调整放空阀，使其有适量的蒸汽排出。罐内压力稳定在0.15～0.25MPa之间，消毒半小时以上。5.1.1.4种子罐消完后取下针头，旋上接种口外盖，关闭三路蒸汽及放空阀。打开移种出料一次阀和种子罐排污阀，将罐内液体压空后关闭移种出料一次阀和种子罐排污阀。5.1.1.5微开放空阀，打开空气进气一次阀、二次阀对罐体进行保压操作。（种子罐长久不用或染芽孢菌时，要加入适量的甲醛闷罐。）5.1.2繁殖罐实消繁殖罐经空消后，根据生产需求，可以上罐实消。5.1.2.1加水：打开加料口，加入自来水，依据所给定的标准加入各种无机盐、尿素、酵母膏等培养基。加料完成后关闭加料口。5.1.2.2更换接种口橡皮塞。5.1.2.3打开夹套排污阀，检查其他所有阀门是否处于关闭状态，打开夹套蒸汽一次阀和二次阀。对罐体进行预热，待温度升至90℃后关闭夹套蒸汽一次阀和二次阀。5.1.2.4打开放空阀，将繁殖罐内压力排掉，关闭放空阀。通三路蒸汽。压力上升到0.09MPa后开始调整放空阀，使其有微量的排汽。调整三路蒸汽进汽阀，使罐内压力稳定在0.08～0.11MPa之间，温度上升至118℃后单体车间发酵岗工艺操作规程SLJH-C